上皮细胞黏附因子及肿瘤相关糖蛋白-72在结肠癌中的表达及临床意义

蔡 芸, 佘远霞, 刘 姝

(江苏省如皋市人民医院 病理科, 江苏 如皋, 226500)

中国每年新发结肠癌患者约为40万，病死者多达20万，且呈逐年上升的趋势[1-2]。作为一种常见的消化道恶性肿瘤，结肠癌预后与临床分期、浸润程度、是否转移密切相关，寻找结肠癌侵袭转移的相关因子，对于指导治疗、评估预后非常重要。上皮细胞黏附因子(EpCAM)具有调节细胞增殖、参与肿瘤血管生成、促进组织再生等多种生物学功能，是一种强致瘤性、遗传稳定的肿瘤标志物[3-4]。肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)属于一种高分子量糖蛋白类化合物，其表达水平与肿瘤生物学行为及预后密切相关，已成为免疫治疗消化道肿瘤的合适靶位[5-6]。目前国内有关EpCAM、TAG-72与结肠癌关系的研究并不多见，本研究采用免疫组化的方法来分析EpCAM、TAG-72在结肠癌组织中的表达及其临床意义，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 病理材料

收集2015年1月—2016年12月132例结肠癌患者组织标本，男78例，女54例; 年龄36～72岁，平均(48.32±6.12)岁; 肿瘤直径≥3 cm者62例, <3 cm者70例; 高分化腺癌45例，中分化腺癌52例，低分化腺癌26例，黏液腺癌9例; 有淋巴结转移58例，无淋巴结转移74例。

1.2 主要试剂

EpCAM免抗人多克隆抗体、磷酸盐缓冲液、免疫组化检测试剂盒、二氨基联苯胺显色试剂盒均购自上海生工生物技术有限公司; TAG-72免抗人多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司, En Vision染色试剂盒购自丹麦Dako公司。

1.3 方法

所有标本均经4%甲醛固定、脱水、石蜡包埋, 2 μm连续切片，根据免疫试剂盒说明书进行免疫组化检测。EpCAM抗体、TAG-72抗体稀释浓度均为1∶100, 柠檬酸盐缓冲液抗原修复，二氨基苯胺显色。磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照，使用已知阳性标本作为阳性对照。

1.4 结果判断

以细胞质或细胞核呈棕黄色或棕褐色判断EpCAM及TAG-72阳性细胞，根据细胞染色强度评分、阳性细胞率评分判断阳性、阴性患者。细胞染色评分: 无染色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。阳性细胞率评分: <5%计0分, 5%～<10%计1分, 10%～<20%计2分, 20%～<50%计3分, ≥50%计4分。细胞染色评分与阳性细胞率评分之和≥3分者判为阳性，≤2分者判为阴性。

1.5 统计学分析

2 结 果

2.1 免疫组化检查结果

EpCAM及TAG-72免疫组化染色阳性表达主要定位于细胞质，以棕黄色或棕褐色为主。132例结肠癌组织标本中, EpCAM表达阳性率为65.91%(87/132)，平均评分(2.48±0.54)分; TAG-72表达阳性率为70.45%(93/132)，平均评分(2.56±0.62)分。EpCAM阳性并TAG-72阴性10例, EpCAM阳性并TAG-72阳性77例, EpCAM阴性并TAG-72阴性19例, EpCAM阴性并TAG-72阳性16例。

2.2 EpCAM及TAG-72表达与结肠癌病理特征

的关系

不同性别、年龄的结肠癌患者EpCAM及TAG-72阳性率、评分比较，差异无统计学意义(P>0.05); 而肿瘤直径>3 cm、低分化/黏胰腺、TNM分期(Ⅲ、Ⅳ期)、T3～4浸润深度、有淋巴结转移的结肠癌患者EpCAM表达阳性率及TAG-72表达阳性率、评分显著高于肿瘤直径≤3 cm、高中分化、TNM分期(Ⅰ、Ⅱ期)、T1～2浸润深度、无淋巴结转移者(P<0.05或P<0.01)。见表1。

表1 EpCAM及TAG-72表达与结肠癌病理特征的关系

EpCAM: 上皮细胞黏附因子; TAG-72: 肿瘤相关糖蛋白-72。与同一病理特征的另一亚项比较, *P<0.05, **P<0.01。

2.3 EpCAM及TAG-72表达与结肠癌生存期的

关系

EpCAM表达阳性、TAG-72表达阳性、EpCAM表达并TAG-72表达阳性者评分显著高于表达阴性者，生存时间显著短于表达阴性者(P<0.01); EpCAM表达阳性并TAG-72表达阳性者评分显著高于EpCAM表达阳性者、TAG-72表达阳性者(P<0.01), 生存时间显著短于EpCAM表达阳性者、TAG-72表达阳性者(P<0.01)。见表2。

表2 EpCAM及TAG-72表达与结肠癌生存期的关系

EpCAM: 上皮细胞黏附因子; TAG-72: 肿瘤相关糖蛋白-72。

与阴性比较, **P<0.01; 与EpCAM表达并TAG-72表达阳性比较, ##P<0.01。

3 讨 论

结肠癌是指发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤，早期根治术患者5年生存率高达90%, 发生淋巴结转移患者5年生存率不足10%[7]。结肠癌侵袭转移是由多因素共同作用的结果，寻找特异性标志物用于早期诊断、靶向治疗、预后评估至关重要。EpCAM是由肿瘤相关钙蛋白信号转导基因编码的一种跨膜糖蛋白，具有加快细胞周期及促进细胞增殖、分化、迁移、免疫逃逸等多种生物学功能[8-9]。作为一种肿瘤干细胞标志物, EpCAM与β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt信号通路密切相关，被视为Wnt-β-catenin信号转导途径的靶基因，其表达水平与β-catenin呈正相关性[10-11]。本研究中，不同肿瘤直径、分化程度、TNM分期、浸润深度、有无淋巴结转移的结肠癌患者EpCAM表达水平存在差异，且EpCAM阳性表达患者细胞染色评分、阳性细胞率评分明显高于阴性表达者，中位生存时间明显短于阴性表达者，与周逢强等[12]研究报道基本相似，说明EpCAM可作为鉴别诊断结肠癌的特异性标志物。

TAG-72是一种分子量约为100 kDa的黏糖蛋白，主要表达于乳腺癌、结肠癌等腺癌中，人体其他组织很少表达[13]。作为一种从乳腺癌转移细胞株中发现的肿瘤标志物，TAG-72具有特异性高、灵敏度高的特点[14]。TAG-72属于消化道恶性肿瘤的肿瘤相关抗原，为早期恶性肿瘤标志物[15-16]。陈红等[17-19]研究报道，随着腺瘤级别的升高，TAG-72表达呈几何级数式增加，高级别上皮内瘤变、结肠腺癌阳性表达分别为88.89%、100.00%。本研究中，肿瘤直径大于3 cm(80.65%)、低分化/黏胰腺(94.29%)、TNM分期(Ⅲ、Ⅳ期)(84.21%)、T3～4浸润深度(85.71%)、有淋巴结转移(96.55%)患者EpCAM表达阳性率及TAG-72表达阳性率、评分均较高，且TAG-72表达阳性结肠癌肿瘤中位生存时间为(16.25±3.42)个月，明显短于阴性者，说明TAG-72表达可作为判断结肠癌严重程度及预后的指标。

综上所述, EpCAM、TAG-72表达均与结肠癌肿瘤直径、分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移等密切相关, EpCAM、TAG-72均为阳性表达者生存时间更短，提示EpCAM、TAG-72联合应用在鉴别诊断、靶向治疗、预后评估中有很重要的临床意义[20-21]。