结核杆菌核酸定量检测与T-SPOT.TB检测在肺外结核病诊断中的应用分析

王慧

吉林省疾病预防控制中心结核病实验室，吉林长春 130000

结核病是一种传染性疾病，包含肺外结核与肺结核，发病率较高，严重威胁人们的健康安全。常见的肺外结核疾病有结核性脑炎、结核性胸膜炎、肾结核等，病因复杂，如结核性胸膜炎的病因包括淋巴引流障碍、胸膜受感染病原体侵入、感染病原体由血液与淋巴侵入胸膜等[1]。结核病的传统这怒单方法为涂片镜检、结核杆菌培养、血清结合抗体检验等，而肺外结核疾病在诊断时受到很多因素影响，如自身因素等，在短时间内无法明确诊断。近年来，随着我国的医疗技术发展迅猛，更多的肺外疾病诊断方法应用于临床，如结核杆菌核酸定量检测、T-SPOT.TB等，均具有显著的诊断效果。该文将以2018年2月—2019年2月的200例患者为对象，探究结核杆菌核酸定量检测与结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）在肺外结核病诊断中的应用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该研究涉及对象为肺外感染患者200例。所有患者中，男、女患者分别为122例与78例；年龄在18～80岁之间，平均年龄为（43.85±6.71）岁；结核性脑炎、结核性胸膜炎、肾结核分别为46例、116例、38例。纳入标准：资料齐全；以《临床诊疗指南：结核病分册》为诊断标准；胸腔积液、尿液、脑脊液中可见结核分枝杆菌；病理活检可见干酪性肉芽肿；影像学诊断具备肺外感染疾病特征；临床特点与肺外感染疾病相符合。排除标准：恶性肿瘤；精神障碍；不配合研究者[2]。研究组和参照组患者的基本信息组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 设备选择 T-SPOT．TB试剂盒 (生产厂家：英国Immunotec公司)，DA-7600PCR扩增仪及配套试剂 （生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司）。

1.2.2 T-SPOT.TB 样本处理：取40～50 mL胸腹水、尿液、脑脊液，加入0.2 mL肝素进行抗凝；富集T淋巴细胞，使用1640培养液将其调整至7 mL，随后洗涤，并调整技术后细胞浓度为1.0×106个／mL[4]。判断标准：阳性：空白对照孔斑点数0～5个，抗原A（抗原B）斑点数超过空白对照孔斑点数6个及以上；空白对照孔斑点数6～10，抗原A（抗原B）斑点数超过超过空白对照孔斑点数的2倍及以上。阴性：不符合阳性判断标准，阳性质控对照孔正常[5]。

1.2.3 结核杆菌涂片镜检 样本处理：取尿液、胸腹水、脑脊液标本置入1.0～1.5 mL离心管，进行离心操作，将上清液去掉，待沉淀以后加入DNA提取物50 μL充分混匀，在100℃的恒温水中，水浴10 min，随后离心操作5 min，使用50 uL阴性质控品与50 μL阳性质控品，加入等量的DNA提取液混合均匀。在镜检之前，取标本离心处理，20 mL离心操作5 min，取沉淀物进行涂片操作，应用抗酸染色液进行染色。

PCR结果若超过50copies则表示诊断有意义；抗酸染色结果：1 000倍显微镜下对100个视野进行观察，可见抗酸杆菌1～9条即为阳性。

1.3 观察指标

对比T-SPOT.TB、结核杆菌涂片、结核杆菌核酸定量检测的检测结果，进行统计学分析。

1.4 统计方法

将研究中的各项数据结果输入SPSS 19.0统计学软件进行分析，计量资料用（±s）表示，用t检验，计数资料以[n(%)]表示，用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 T-SPOT.TB、结核杆菌涂片阳性率比较

T-SPOT.TB检测阳性率（90.50%）明显高于结核杆菌涂片阳性率（21.00%），组间差异有统计学意义（χ2=195.799，P＜0.05）。 见表 1。

表1 T-SPOT.TB、结核杆菌涂片阳性率比较

2.2 结核杆菌核酸定量、结核杆菌涂片阳性率比较

结核杆菌核酸定量检测阳性率（94.00%）明显高于结核杆菌涂片阳性率（21.00%），组间差有统计学意义（χ2=221.4094，P＜0.05）。 见表 2。

表2 结核杆菌核酸定量、结核杆菌涂片阳性率比较

2.3 T-SPOT.TB、结核杆菌核酸定量阳性率分析

T-SPOT.TB检出阳性率（90.50%）与结核杆菌核酸定量检测（94.00%）相比，组间差异无统计学意义（χ2=2.306，P＞0.05）。 见表 3。

表3 T-SPOT.TB、结核杆菌核酸定量阳性率分析

3 讨论

T-SPOT.TB诊断所运用的技术为酶联免疫斑点技术，是对效应T淋巴细胞数量进行测定，结核性胸膜炎患者由于受到结核分枝杆菌的特异性抗原的刺激[3]，从而造成IFN-γ释放效应T淋巴细胞。大量临床实践表明，TSPOT.TB诊断具有较高的敏感度，约为90%[4]，可在临床中推广使用。在肺外结核患者中，伴随胸腔积液、脑脊液等产生，在发病期间，结核分枝杆菌对局部感染容易产生隔室效应，效应T淋巴细胞由血液进入至胸腔积液、脑脊液，发挥其免疫学效应[5]，而结核分枝杆菌的潜伏感染对肺外积液内的效应T淋巴细胞影响小，因此肺外积液TSPOT.TB诊断在结核性胸膜炎的诊断价值更高。有学者[6]对T-SPOT.TB的胸腔积液与外周血分别进行检测，结果表明前者特异性T淋巴细胞数量为后者的4.6倍，证实了特异性T淋巴细胞在发生结核性胸膜炎时由外周血迁移至胸膜腔，以及胸腔积液T-SPOT.TB诊断在结核性胸膜炎患者中具有较高的诊断价值。由此可见，胸腔积液、脑脊液中行T-SPOT.TB诊断的肺外结核病检出率较高。该次研究结果可见，T-SPOT.TB检测阳性率（90.50%）明显高于结核杆菌涂片阳性率（90.50%），组间差异有统计学意义（χ2=195.799，P＜0.05）。 与张忠原[7]学者研究结果:非结核病 64例，其中阳性 5例，占7.81%，阴性 59例，占92.19%。荧光定量核酸扩增技术检查结核病阳性率比较，差异有统计学意义(P＜0.005)，保持一致。

大量临床实践表明[8]，结核杆菌核酸具有良好的特异性，且敏感度较高，在胸腹、脑脊液、尿液、痰液等标本均可行PCR诊断，若结果为阳性，则可欧威结核病诊断重要依据。该次研究结果可见，结核杆菌核酸定量检测阳性率明显高于结核杆菌涂片阳性率，组间差异有统计学意义(P＜0.05)。有学者[9]选取109例肺外结核病患者进行研究，结核杆菌涂片诊断阳性率为20.1%，全血T-SPOT诊断阳性率为99.10%，结核杆菌核酸定量结果阳性率为95.4%，组间差异有统计学意义(P＜0.05)。该次研究中，T-SPOT.TB检出阳性率与结核杆菌核酸定量检测相比，组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

综上所述，结核杆菌核酸定量检测与T-SPOT.TB均可用于肺外结核病的诊断中，具有较高的检出率，有利于肺外结核疾病患者的治疗，值得临床上推广及使用。