芦花止血凝血实验研究※

郑明月 余怡嫔 李亚林 廖 博 李 淼 马会霞*

（华北理工大学中医学院，河北 唐山 063000）

芦花，中药名，为禾本科植物芦苇的花。秋季收获，晒干，生于河塘的浅水中，分布于全国大部分地区，芦根，又名苇根，味甘，性寒，主治消渴止热，止小便利［1］。常用于呕吐和腹泻、衄血、血崩、外伤性出血、鱼蟹中毒、干霍乱、心腹胀痛等。《中药大辞典》记录了芦花：“性味甘寒无毒，功效主治为止血解毒、治鼻衄、血崩、上下呕吐和腹泻。［2］”《本草纲目》记载了芦花：“烧灰吹鼻，止衄血，亦入崩中药。”三七粉是三七植物的根产物。它是由三七的主根制成的粉末［3］，性温，味甘微苦，入肝、胃、大肠经［4］。三七的功能可以用“止血、散瘀、定痛”来概括［5］。三七是五加科植物，含三七总皂甙［6］和人参皂甙，三七皂甙具有止血、活血的功效，而人参皂甙具有滋补的作用，三七既能止血又能促进血液循环［4］。本课题使用低成本、易获取的芦花进行小鼠实验，为芦花的开发利用和临床治疗提供了实验基础，为临床治疗提供科学的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物50 只6 周龄的雄性和雌性ICR 小鼠，购自济南朋悦实验动物繁育有限公司许可证号SCXK（鲁）20140007。

1.1.2 药物 芦花水，芦花灰（将芦花灰煎成水煎液），三七粉水溶液，药房购生理盐水。

1.1.3 主要仪器 电磁炉、砂锅、大烧杯、电子称、灌胃针、注射器、手术剪、手术镊、玻璃棒、量筒、载玻片、大头针、滤纸、纱布。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组 将50 只雌性和雄性小鼠随机分为4 组，并用标记物标记，分为4 个实验组（芦花水组、芦花灰组、三七组、生理盐水组）。每组12 只，剩余2 只作为实验断尾法和眼眶后静脉丛采血法练习使用。

1.2.2 实验药物剂量 每只小鼠用0.02 mL/g 的灌胃量，芦花对于人，内服用量为15～30 g，三七粉的用量为3～9 g。人类和动物对同类药物的耐受性差异很大。通常，动物比人类更耐受，也就是说，每单位重量的动物的用药量大于人的用药量。根据实验动物和人体剂量转换系数［7］，按标准体质量计算，其公式为：小鼠的剂量=X mg/kg×70 kg×0.002 6/0.02 kg=9.1 Xmg/kg。

我们将每千克人用三七量定为0.1 g 即X=0.1 g/kg，则小鼠用三七剂量为0.91 g/kg；而将芦花水组和芦花灰组每千克人的用量定为0.4 g，则小鼠用芦花剂量为3.64 g/kg。

1.2.3 灌胃 首先将小鼠饲养1 周，以适应环境，然后每组小鼠每日固定时间灌胃7 d。

1.2.4 观察指标 出血时间：连续给药7 d 后，最后一次灌胃给药后1 h，进行实验操作：通过断尾法测定出血时间［8］，将小鼠置于固定器中，用解剖剪距小鼠尾尖3 mm处横剪断，当血液自行溢出时计时，每隔10 s 用纱布吸血1 次，直至血液自然停止所需的时间是该小鼠的出血时间［9］。

凝血时间：在断尾实验结束后进行实验操作：通过玻片法测定凝血时间［10］，并且在最后一次给药1 h 后用镊子取出小鼠的左眼球，从其左眼后静脉丛取血，拭去第一滴血后，在玻片上滴一滴并同时计时，每隔30 s 使用一个干净的大头针在玻片上挑血丝一次，当有血丝出现时，计时完毕，即获得凝血时间。

1.2.5 统计学方法 采用SPPS 20.0 统计学软件对数据进行统计分析，用Microsoft Excel 进行数据处理，计量资料符合正态分布采用均数±标准差（±s）表示，组间比较使用t 检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组药物对小鼠出血时间的影响 给小鼠连续灌胃7 d后，芦花水组、芦花灰组、三七组较生理盐水组均缩短。芦花灰组较生理盐水组有显著性缩短，差异具有统计学意义（P＜0.05）。芦花水组与三七组较生理盐水组比差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 各组药物对小鼠出血时间的影响 （±s）

表1 各组药物对小鼠出血时间的影响 （±s）

2.2 各组药物对小鼠凝血时间的影响 将小鼠连续灌胃7 d后，芦花灰组较生理盐水组缩短，差异有统计学意义（P＜0.05）。芦花水组、三七组和生理盐水组比较，凝血时间差异均无统计学意义（P＞0.05），说明芦花灰活血作用明显，具有抗凝作用。见表2。

表2 各组药物对小鼠凝血时间的影响 （±s）

表2 各组药物对小鼠凝血时间的影响 （±s）

3 讨论

3.1 芦花的止血效果 出血时间是指在某些条件下，人为刺破皮肤的毛细血管后，从血液自然流出到自然停止所需的时间。出血时间的长短，与凝血因子、血小板的数量和功能、纤维蛋白溶解系统、毛细血管功能和组织收缩性有关［12］。芦花的功效主治为止血、治鼻衄、血崩。本实验根据芦花的药理作用及芦花烧灰存性［13］的特质，研究了芦花水煎剂与芦花烧灰煎液的止血效果，按照正常的服用剂量给药，观察其烧灰组止血作用强于水煎剂。对照组选用的三七粉水溶液，其是市面上常用的止血活血药剂，在止血功效方面很有疗效，但弱于普遍生长、易于获取的芦花。

3.2 芦花的抗凝效果 凝血时间是指当血液离开血管，在体外凝固的时间。其原理是离体静脉血和普通玻璃试管接触后，因子Ⅻ和内源凝血系统被激活，并且最终生成纤维蛋白而血液凝固［12］。血液凝固是一系列蛋白质水解活化的链反应，抗凝系统中的抗凝物质能阻断凝血过程［14］，凝血时间长，抗凝效果好。4 个实验组相比较，芦花灰组抗凝效果最佳，芦花水组与三七组差异不明显，表明芦花烧灰后抗凝作用有提高。

3.3 发展前景 应用断尾法测定止血时间、取眼球法测定凝血时间，对比观察芦花灰、芦花水、三七的止血凝血效果，我们的实验结果表明：比较各组出血时间有明显差异，其中芦花灰明显缩短，其次为芦花水、三七；比较各组凝血时间差异均无统计学显著性，芦花灰组显著，说明芦花灰活血作用明显，具有抗凝作用。芦花同三七一样，不仅具有良好的止血作用，还有活血作用。近年来，随着我国中医药事业发展，对中成药传统剂型进行了革新与创新，并取得了一定的成绩，已经研制出许多新剂型，其有助于临床用药的丰富、药物的充分使用和药物应用的便利性。市场上广泛使用的止血药材，普遍价格偏高，部分药材日益稀缺。因此，我们可以考虑将芦花烧灰制成外用药，应用于止血活血祛瘀止衄的方药中。