HPLC法测定助消膏中桉油精的含量

班腾敏　毛建国

摘 要：目的： 采用高效液相色谱法（HPLC）建立助消膏桉油精含量测定的质量控制方法。方法：采用C18 4.6×150mm色谱柱，经过试验以乙腈-水（64∶36）为流动相，流速1.0ml/min，检测波长为203nm，柱温为25℃。结果：桉油精在0.218mg/ml～2.18mg/ml范围内有良好的线性关系，y=1×107x-65561（r2=0.9999）。定量和检测分别为1.33μg/ml和0.4μg/ml。回收率为99.44%，RSD值为0.76%，回收率良好。样品中桉油精含量平均值为33.40mg/g。结论：该方法科学、简便、准确，能有效控制助消膏中桉油精含量测定的质量。

关键词：HPLC 桉油精 助消膏

中图分类号：R284文献标识码：A文章编号：1003-9082（2019）11-0-01

助消膏是大果木姜子、五倍子、木香等中药的提取物组成，散寒止痛，收敛止泻（苗医：漳射挡孟，苣敛挡渣;久代加嘎奴，久代吉嘎奴）的功效，用于脾胃虚寒所致的小儿腹泻、腹痛、腹胀[1]，为贵州省特色苗药。原助消膏标准中仅有食子酸的含量测定，而大果木姜子挥发油中含有大量的桉油精， 有理气止痛的作用， 也是助消膏的主要药效成分之一。故对助消膏中桉油精的含量测定方法进行了研究，桉油精含量文献报道多采用GC法测定，本文采用HPLC测定桉油精含量，方便，快速，为标准的修订提供了科学的数据。

一、材料与方法

1.材料

1.1仪器 岛津LC-20AT高效液相色谱仪， Diamonsil 5?m 4.6mm×150mm ，岛津UV1700紫外分光光度计;赛多利斯CPA225D电子天平（十万分之一）。

1.2试剂与试药 桉油精对照品（中国药品生物制品检定所，批号：10788-201105，99.9%）、助消膏样品为贵州金桥药业有限公司产品。乙腈（色谱纯），甲醇（分析纯）。

2.方法

2.1 溶液的制备

2.1.1对照品溶液的制备 取桉油精对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含桉油精0.6mg的溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 取本品，除去盖村，剪成小块，称取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，滤过，即得。

2.2 色谱条件的选择 采用C18 4.6×150mm色谱柱，经过试验以乙腈-水（64∶36）[2～4]为流动相，流速1.0ml/min;紫外光谱扫描在203m附近有最大吸收，選定203nm为检测波长。

二、结果

1.方法学验证

1.1专属性试验 标准制备工艺条件下，制备缺桉油精的阴性样品，按上述色谱条件检测，阴性样品未见吸收峰;测定样品中桉油精峰的保留时间，与对照品溶液中桉油精的保留时间一致。

1.2系统适用性试验 按上述色谱条件测定制剂中桉油精的含量，桉油精峰拖尾因子、分离度符合要求。理论板数不得低于2000。

1.3线性关系的考察 精密称取桉油精对照品（110788-201105，99.9%）101.0mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml含2.180mg的对照品储配液。分别精密量取上述对照品溶液1ml、2ml、3ml、5ml、10ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每1ml含0.218mg、0.436mg、0.654mg、1.09mg、2.18mg的对照品溶液，分别精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度x（μg/ml）为横坐标，峰面积y（mv）纵坐标，作图，得到基本过原点的直线方程，回归方程y=1×107x-65561，相关系数r2=0.999，以对照品测定所得峰面积代入前述回归方程计算含量，所得结果与真实含量平均偏差小于2%，故可认为标准曲线近似过原点。由此含量测定可采用外标一点法计算。

试验结果表明∶桉油精在0.218mg/ml～2.18mg/ml范围内有良好的线性关系。定量和检测分别为0.13μg/ml和0.4μg/ml。

1.4精密度试验 精密量取同一桉油精对照品溶液（0.01090mg/ml）10μl，进样6次，记录色谱图，峰面积相对标准偏差（RSD）为0.9%，试验结果表明精密度良好。

1.5稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、8h，连续进样6次，峰面积相对标准偏差（RSD）为0.91%。试验结果表明，供试品溶液在8小时内稳定性良好。

1.6重复性试验 取同一批号（181001）样品6份，精密称定，按含量测定项下的方法进行测定，记录色谱图，计算桉油精含量：平均含量为33.31mg/g，RSD为1.88%;试验结果表明，重复性良好。

1.7加样回收率试验 取同一批号（131001）的样品9份，精密称定，精密加入0.6661mg/ml的对照品溶液20、25、30ml，按含量测定项下的方法进行测定，记录色谱图，回收率（99.44%，n=9）。试验结果表明，回收率良好。

1.8样品含量测定 分别取十批样品适量，精密称定，按含量测定项下的方法进行测定，计算样品含量。结果得出十批样品含量测定平均值为33.40mg/g。

三、讨论

1.流动相选择 别以甲醇-水（70∶30）、（65∶35）和乙腈-水（40∶60）、（64∶36）、（70∶30）为流动相，考察桉油精峰分离度及拖尾因子，测定结果表明，以乙腈-水（64∶36）为 流动相桉油精峰分离度较好，出峰时间短，故选择乙腈-水（64∶36）作为桉油精含量测定用流动相。

2.取方式的考察 同一批号的样品分别以回流、超声提取30分钟，测定桉油精含量分别为3.36mg/g、3.26mg/g，提取方式对含量无明显差异，故选择超声提取。

3.回流时间考察 以同一批号的样品分别超声提取20分钟、30分钟、45分钟，测定含量分别为31.66mg/g、33.40mg/g、33.49mg/g，从测定含量上看，提取30分钟后，随提取时间的延长，桉油精含量未显著增加，故确定为30分钟。

参考文献

[1]WS-11609-（ZD-1609）-2002.助消膏质量标准[S].

[2]何兵，田吉，刘艳，等.HPLC 测定 11 种中药挥发油中桉油精的含量[J].药物分析杂志，2012，32（5），769-771.

[3]张琳，朱丽萍，张爱军.香芍胶囊挥发油中桉油精的HPLC含量测定方法研究[J].中国医药科学，2015，5（15），45-47.