猪链球菌致病性研究及其公共卫生意义探讨

康梓博

摘 要 猪链球菌病是养殖业发展过程中的一种常见多发疾病，由于其人畜共患的特点受到广泛关注。本文对猪链球菌在小鼠、斑马鱼、微型猪三种动物中的致病性进行了详细研究，并阐述了猪链球菌病的公共卫生意义。

关键词 猪链球菌；致病性；公共卫生

1 猪链球菌致病性研究

1.1 猪链球菌对小鼠的致病性研究

在进行猪链球菌对小鼠的致病性研究之前首先进行菌液制备。用接种环取适量的猪链球菌分离株菌种，使用划线法将猪链球菌接种于哥伦比亚血琼脂平板上，在37℃温度条件下培养18h-24h，对菌落的形态进行观察，包括其形状、颜色、体积、表面光滑度等。选用具有典型性的单体菌落，接种在THB营养肉汤中，肉汤应保证含有2%牛血清，在37℃温度条件下培养24h。之后以6000r/min的转速对肉汤进行10min的离心处理，收集沉淀物，使用10mL容量的THB培养基重悬。稀释菌液的倍率比使其达到108cfu/ml，并取用200μL的菌液兑入THB培养基使其达到2mL制成菌悬液，使用平板表面涂布法记录菌落的数量并稀释备用。

致病力试验应使用20g左右健康小鼠460只，分两次进行试验，每次230只，按照每组5只分成46组。使用菌液制备过程中制成的猪链球菌液各1mL，分别使用腹腔注射方法对前44组小鼠进行致病力试验，第45组设为稀释液对照组，对小鼠注射1ml的THB培养液，第46组设为空白对照组，对小鼠注射1mL的生理盐水，并对小鼠持续观察7d并记录其发病情况。对于死亡的小鼠应及时进行解剖处理，对于生存下来的小鼠分别在感染猪链球菌后的3d、5d、7d内杀死，对脑、心肌和多种主要脏器进行猪链球菌的分离，使用PCR确定小鼠体内的菌株与试验使用菌株是否一致。通过判断小鼠临床症状和解剖分析脏器内菌株，得出猪链球菌分离株对于小鼠的致病性[1]。

1.2 猪链球菌对斑马鱼的致病性研究

猪链球菌对斑马鱼的毒力试验进行前，可将斑马鱼分为7组，每组使用100条斑马鱼。取用5株不同的猪链球菌分离株以及1株无毒参考菌株，分别对其进行菌液培养，将浓度稀释到10-6，对前5组斑马鱼进行腹腔接种猪链球菌分离株菌液，第6组注射无毒菌株菌液，第7组注射等量生理盐水作为空白对照组。将斑马鱼分为每缸20条，在容量为12L的鱼缸中进行30℃恒温养殖7d，对斑马鱼的养殖过程进行观察记录，出现斑马鱼死亡时应及时对斑马鱼进行解剖。通过解剖了解到，前5组的LD50数据分别为9.62×103、8.77×103、8.20×103、1.15×104和2.89×104，无毒株的LD50为5.67×107，通过半数致死量的数据差异体现出猪链球菌的致病性。

斑马鱼的免疫实验中，选取AB系斑马鱼每组60条，在27℃温度条件下进行饲养。选择经灭活处理的HA7345和ZY05812两种猪链球菌分离株、MRP重组蛋白、猪抗HA7345高免血清、猪阴性血清和生理盐水对各组斑马鱼进行注射，14d后进行二次免疫。28d后使用50LD50剂量的HA7345进行注射攻击。经测量，灭活HA7345和ZY05812分离株以及MRP充足蛋白、高免及阴性血清的RSP数值分别为79%、71%、62%、73%、7%。保持试验条件不变，分别用灭活HA7345和ZY05812用同样方法分别对斑马鱼进行免疫处理，二次免疫后使用50LD50剂量的ZY05812对斑马鱼进行注射攻击，两组的RSP数值都达到了85%。试验证明HA7345与ZY05812两种灭活猪链球菌分离株之间可以起到良好的交叉免疫保护，可以作为抗体使用。同时，MRP重组蛋白和猪链球菌高免血清也可以起到一定的免疫效果。

1.3 猪链球菌对微型猪的致病性研究

在微型猪的致病性试验过程中，使用109cfu的猪链球菌分离株培养物对3头体重5kg左右的3月龄微型猪进行肌肉注射。3头猪在注射后24h内均出现体温升高、食欲下降等临床现象，2头猪在7d后死亡，另一头3d后自行康复。在病死猪脑、心脏以及脏器内采集细菌，通过PCR检测与注射的猪链球菌分离株相同。实验中应设置2头体重与月龄相同的微型猪作为对照组，分别注射等量无毒菌株与生理盐水，观察20d后微型猪无临床症状出现。

对微型猪进行免疫保护试验前，应选用微型猪10头，其中1头设为空白对照组。首先对微型猪进行猪链球菌抗体ELISA法检测全部为阴性，之后采用灭活HA7345疫苗进行二次免疫。两周后将猪分为两组，第一组5头猪注射ZY05812菌液，第二组4头猪注射HA7345菌液，每头注射量为109cfu。观察后发现第一组有2头猪在注射两天后发病，其中一头在四天后死亡，另一头在三天后康复，其余免疫猪保持健康存活，并检测出存在高滴度的抗體[2]。

2 浅析猪链球菌公共卫生的意义

猪链球菌的致病原理与其感染能力、黏附能力和溶血能力有极大的关系。猪链球菌常见型有1型、2型、4型、9型等，通过呼吸道、消化道和伤口等途径在猪群中进行快速传播，且发病极为迅速，往往给养殖业带来严重的经济损失。猪链球菌对于人类也有致病危险，主要通过伤口感染，可能引起脑膜炎、败血症、心内膜炎等一系列病症，经常与猪群接触的养殖人员是其感染的高危人群。例如，2005年我国四川省爆发大规模猪链球菌病疫情，造成大量猪死亡的同时感染人数达到百人以上，死亡数十人。

3 结语

综上所述，猪链球菌是一种威胁性极高的致病菌，在猪群中可以快速进行传播，在短时间内威胁到大量猪的生命健康，造成养殖业的严重经济损失。同时，猪链球菌也对人类存在一定的威胁。有关部门应加强对猪链球菌致病性的研究，做好猪链球菌病的防控工作，充分保证食品安全和养殖行业工作人员的安全。

参考文献：

[1]董志民，李秀丽，田向学，等.天津地区猪链球菌9型分离株致病性的研究[J/OL].中国兽医科学：1-10

[2]郑成坤，贾梦蝶，王彦红.血清4型猪链球菌的分离鉴定及其致病性和药物敏感性分析[J/OL].中国兽医科学：1-7