高危型HPV在前列腺腺癌中的表达及临床意义

何尧林 谢海辉 何娟

[摘要] 目的 探讨高危型HPV在前列腺腺癌组织中的表达情况。 方法 选取50例前列腺腺癌组织标本（Pca组）和52例前列腺增生组织（BPH组），通过聚合酶链式反应（PCR）结合反向点杂交（RDB）技术检测17种高危型HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、68、73、83、MM4）的表达情况。 结果 50例前列腺癌患者中17例患者存在高危型HPV阳性表达，52例前列腺增生患者中4例存在高危型HPV阳性表达，差异有统计学意义（χ2=10.29，P=0.001）。HPV16的阳性表达率最高，前列腺癌组阳性表达11例（22.0%），前列腺增生组中阳性表达3例（5.7%），两组比较有统计学差异（χ2=5.671，P=0.017）;HPV18阳性表达率次之，前列腺癌组阳性表达9例（18.0%），前列腺增生组中阳性表达2例（3.8%），两组比较有统计学差异（χ2=5.307，P=0.021）。 结论 高危型HPV在前列腺腺癌和前列腺增生组织中的表达具有一定的差异，一定程度上提示高危型HPV感染与前列腺癌的发生发展可能存在一定的关系。

[关键词] 高危型HPV;前列腺腺癌;前列腺增生;聚合酶链式反应;反向点杂交

[中图分类号] R737.25          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2019）26-0076-03

[Abstract] Objective To investigate the expression of high-risk HPV in prostate adenocarcinoma. Methods A total of 50 specimens of prostate adenocarcinoma（Pca group） and 52 specimens of benign prostatic hyperplasia（BPH group） were selected. Polymerase chain reaction （PCR） combined with reverse dot blot （RDB） technique was used to detect the expressions of 17 high-risk HPVs（16， 18， 31， 33， 35， 39， 45， 51， 52， 53， 56， 58， 59， 68， 73， 83， MM4）. Results Among the 50 patients with prostate cancer， 17 patients had high-risk HPV positive expression， and 4 cases of 52 patients with benign prostatic hyperplasia had high-risk HPV positive expression， and the difference was statistically significant （χ2=10.29， P=0.001）. The positive expression rate of HPV16 was the highest， with 11 cases（22.0%） of positive expression in prostate cancer group and 3 cases（5.7%） of positive expression in prostatic hyperplasia group. There was significant difference between the two groups （χ2=5.671， P=0.017）. The positive expression rate of HPV18 followed， with 9 cases（18.0%） of positive expression in prostate cancer group and 2 cases（3.8%） of positive expression in prostatic hyperplasia group. There was significant difference between the two groups（χ2=5.307， P=0.021）. Conclusion The expression of high-risk HPV in prostate adenocarcinoma and benign prostatic hyperplasia has certain differences. To some extent， there may be a certain relationship between high-risk HPV infection and the development of prostate cancer.

[Key words] High-risk HPV; Prostate adenocarcinoma; Benign prostatic hyperplasia; Polymerase chain reaction; Reverse dot hybridization

前列腺癌為老年男性泌尿系统常见的恶性肿瘤之一，其发病率逐年增加[1-2]。前列腺癌与宫颈癌具有一定的相似性，均与患者的性开放行为相关，因此，人乳头瘤病毒（human papillomaviruses，HPV）感染是否与前列腺癌的发生发展也存在相关性。目前部分国外文献已报道高危型HPV感染与前列腺癌存在一定的相关性[3-5]，但就二者的相关性而言，存在一定的争议。在国内，有关这方面的文献报道较少。既往研究结果[6]表明高危型HPV16/18在前列腺癌及前列腺增生中表达具有差异性，且与前列腺癌中Gleason评分、临床T分期、危险因素等级等临床病理参数相关。本研究应用聚合酶链式反应（PCR）结合反向点杂交（RDB）技术在50例前列腺腺癌组织和52例前列腺增生组织中进一步检测17种高危型HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、68、73、83、MM4）的表达情况，旨在探讨高危HPV感染与前列腺癌发生的相关性，其联合PSA检测可提高前列腺癌高风险人群的早期筛查效果，为今后临床上对前列腺癌的诊疗、预后评估提供帮助。

1 资料与方法

1.1 一般资料

50例前列腺癌标本（Pca组）和52例前列腺增生标本（BPH组）取自2013年12月～2016年12月在南华大学附属第二医院和广西医科大学第四附属医院行前列腺穿刺或手术切除的标本（其中前者收集18例前列腺癌标本，后者收集32例前列腺癌标本，52例前列腺增生标本均来自广西医科大学第四附属医院），术前未接受手术去势、药物去势或放化疗治疗。标本均经所在医院2位高年资副主任病理医师诊断。

1.2 方法

PCR结合反向点杂交分析试剂为亚能生物技术（深圳）有限公司产品。检测原理：采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术，利用HPV基因特点设计特异引物，扩增出17种高危HPV亚型，再将扩增产物与固定在膜条上的17种高危分型探针进行杂交，判断是否有这些亚型的HPV感染，具体步骤按说明书进行。

1.3 结果判读

根据膜条上蓝色斑点出现的相应位置即可判断HPV的亚型为阳性，反之为阴性[7]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0软件进行统计处理，患者一般情况及测定结果等计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1患者一般情况

前列腺癌组和前列腺增生组患者入组时年龄分别为（67.90±6.91）岁、（69.21±5.52）岁;体重指数（kg/m2）分别为（23.81±3.27）kg/m2、（24.00±3.09）kg/m2;前列腺大小分别为（56.58±13.72）mL、（57.38±15.13）mL;PSA分别为：（35.64±10.47）μg/mL、（34.25±10.58）μg/mL;两组间比较，均无统计学差异（P>0.05）。

2.2 检测结果

50例前列腺癌患者中17例患者存在高危型HPV阳性表达，52例前列腺增生患者中4例存在高危型HPV阳性表达，差异有统计学意义（χ2=10.29，P=0.001）。HPV16的阳性表达率最高，前列腺癌组阳性表达11例（22.0%），前列腺增生组中阳性表达3例（5.8%），两组比较有统计学差异（χ2=5.671，P=0.017）;HPV18阳性表达率次之，前列腺癌组阳性表达9例（18.0%），前列腺增生组中阳性表达2例（3.8%），兩组比较有统计学差异（χ2=5.307，P=0.021），见表1。两组患者中均存在多重阳性表达的情况，前列腺癌组HPV16阳性患者中，仅1例患者未合并其他分型表达阳性，前列腺增生组HPV16阳性患者中，也仅1例未合并其他分型表达阳性。

3 讨论

前列腺癌是老年男性的常见恶性肿瘤，其早期症状与良性前列腺增生症相似，症状不明显，发现时往往已是晚期，影响疾病治疗和预后。作为前列腺癌的筛查指标血清PSA是组织特异性抗原而非癌特异性抗原，直肠指诊、留置尿管等检查可引起PSA水平升高，具有一定的局限性。肿瘤是一种多基因参与的疾病，单个标志物的检测具有一定的局限性，多种生物标志物的联合检测将可提高前列腺癌诊断的特异性和敏感性。

人类乳头状瘤病毒（HPV）为小环状双链DNA 病毒，直径45～55 nm，表面密布壳微粒，无包膜的核衣壳结构，88%是病毒蛋白（包括L1主要衣壳蛋白），内为DNA。HPV具有嗜人上皮细胞的特性，稳定性好，即便在没有宿主的寒冷的条件下也能独立存活数个月。根据不同的HPV亚型致癌率和致癌性不同，HPV可分为高危型和低危型。

HPV主要通过性生活接触传播，目前认为，高危型HPV与疾病的相关性较大，HPV主要是通过破损的皮肤黏膜进入人体，感染皮肤或黏膜细胞，进行大量的病毒复制并组装成熟、释放。致癌机制主要是HPV病毒侵入皮肤后持续感染，HPV DNA基因整合到宿主细胞E2 基因的断裂缺失，使致癌基因E6和E7大量表达，抑制抑癌基因p53和Rb的表达，发生细胞周期的调控紊乱，从而癌变发生[8-10]。

随着对HPV研究的越来越深入，研究表明高危型HPV感染，尤其是高危亚型HPV感染在前列腺癌的发病机制中可能扮演着重要角色[11]。早期研究中，McNicol PJ等[12]应用PCR方法检测前列腺癌组织和良性前列腺增生组织中的HPV检出率，结果显示：相对于对照组，高危型HPV在前列腺癌组织中具有较高阳性率。日本学者Anwar K等[13]通过检测高危HPV 16/18在68例前列腺癌组织标本中的阳性表达情况，结果发现，HPV感染与前列腺癌的临床危险度分期、病理Gleason评分具有一定的联系，提示高危型HPV与前列腺癌的疾病进展具有相关性。近年来，Pascale M等[3]通过免疫组化和PCR检查对150例前列腺癌标本进行检验，结果发现150例前列腺癌标本中112例标本HPV E7蛋白阳性，阳性率（74.67%），其表达与前列腺癌Gleason评分、临床分期、危险因素等级有一定的联系，此后部分学者的研究结果与其一致[14，15]，提示高危型HPV感染与前列腺癌的发生发展相关。

部分学者的研究结果持有相反的观点，认为HPV与前列腺癌的发生发展没有相关性[16，17]。伊朗学者Aghakhani A等[17]运用 MY09/MY11 和 GP5（+）/GP6（+）HPV引物，对104例前列腺癌和104例前列腺增生组织标本进行基因测序，结果发现13例前列腺癌组织（13/104，12.5%）和8例前列腺增生组织标本（8/104， 7.7%）中HPVDNA表达阳性，其中13例前列腺癌组织中高危型HPV 10例，低危HPV 3例，8例前列腺增生组织标本中高危型HPV 5例，低危HPV 3例，前列腺癌和前列腺增生组织标本的HPV表达无差异，HPV感染与前列腺癌没有相关性。目前研究结果的不一致性，原因可能与性开放程度和区域种族基因易感性的差异，另外可能与纳入研究对象的标本量和研究采用的实验检测方法不同有关。

目前，国内有关HPV感染与前列腺腺癌的相关性报道较少，国外的研究报道也大多集中在HPV16、HPV18两个亚型中。本课题组通过聚合酶链式反应（PCR）结合反向点杂交（RDB）技术检测17种高危型HPV在前列腺癌和前列腺增生中的表达情况，50例前列腺癌患者中17例患者存在高危型HPV阳性表达，52例前列腺增生患者中4例存在高危型HPV阳性表达，差异有统计学意义（P<0.05），提示前列腺癌的发生发展可能与高危型HPV有一定关系。前列腺癌中高危型HPV阳性表达率从高到低分别是HPV16、HPV18、HPV58、HPV33、HPV31、HPV35、HPV45。52例前列腺增生标本中的高危型HPV阳性表达的情况分别为：HPV16（3例，5.8%），HPV18（2例，3.8%），HPV33（1例，1.9%），两组均是HPV16、HPV18表达最高，且组间比较有统计学差异（P<0.05），结果提示各亚型中可能HPV16、HPV18与前列腺发病关系最密切，与国内外研究结果类似[6，13]。

综上所述，高危型HPV在前列腺腺癌和前列腺增生组织中的表达具有一定的差异，一定程度上提示高危型HPV参与前列腺腺癌的发生和发展，但具体机制目前尚无定论，受条件所限，本研究纳入的样本例数偏少，下一步，应加大样本量，且对血清、尿液等其他种类标本进行相关检测，进一步研究HPV与前列腺癌的相关性。

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（收稿日期：2019-05-27）