圆齿野鸦椿果皮成分及抑菌活性研究

陈景新，倪 林,3 *，王 钦，吴楚红，裴新颖，邹小兴，邹双全

1福建农林大学植物保护学院；2福建农林大学林学院；3自然生物资源保育利用福建省高校工程研究中心，福州 350002

圆齿野鸦椿(EuscaphiskonishiiHayata)为省沽油科(Staphyleaceae)野鸦椿属(EuscaphisSieb.et Zucc.)植物。野鸦椿属植物共3种，中国有2种，分别是野鸦椿(Euscaphisjaponica(Thunb.) Dippe)和圆齿野鸦椿(EuscaphiskonishiiHayata)，是民间常用中草药，具有抗炎镇痛，祛风除湿，活血化瘀的功效[1]。该植物广泛分布于长江以南地区，据作者统计，仅福建地区就约有10万株，资源较为丰富。已发现的野鸦椿属植物的化学成分有苯丙素类，三萜类，黄酮类，鞣质类化合物，其具有抗炎、抗肿瘤、抗肝纤维化、抑菌等药理活性[2]，而对圆齿野鸦椿果皮化学成分目前尚无报道。圆齿野鸦椿果皮生物量大，常年挂于枝头色泽鲜亮甚少植物病害，推测可能与自身所特有的次生代谢产物有关。而本课题组前期实验发现，该植物的果皮提取物对多种植物病原真菌显示较好的抑制作用，尤以瓜果霉腐菌最为突出。

因此，本研究采用生物活性追踪法，对圆齿野鸦椿果皮提取的抑制瓜果腐霉的活性成分进行了系统研究，以期为圆齿野鸦椿植物资源利用和植物源杀菌剂的研发提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Waters W2695-QDA高效液相色谱仪-质谱联用仪(美国沃特世公司)；CPA225D型电子分析天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)；高速多功能粉碎机(永康市天祺盛世工贸有限公司)；KQ500DE型数控超声波清洗机(昆山超声仪器公司)；BS-100A自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司)；WRR熔点仪(郑州南北仪器设备有限公司)；BS-214D电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)；LC-20AP制备型高效液相色谱仪(日本岛津有限公司)。

1.2 材料

硅胶、氧化铝(青岛海洋化工有限公司)；D101大孔吸附树脂、Sephadex LH-20凝胶(美国通用电气公司)；PRP-512A树脂(北京聚福树脂厂)；YMC-Pack ODS-A反相色谱柱(日本YMC公司)；Diamonsil C18分析型反相色谱柱(北京迪马科技有限公司)；甲醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯(西陇化工有限公司)；色谱纯甲醇、乙腈(默克公司)；丁子香酚(山东亿嘉农化有限公司)。

圆齿野鸦椿果皮样品于2016年11月，采自福建三明清流圆齿野鸦椿种植基地上坡位的10棵4～5年生树，经福建农林大学林学院邹双全教授鉴定为省沽油科野鸦椿属圆齿野鸦椿(EuscaphiskonishiiHayata)，腊叶标本(No.20161105)保存在福建农林大学植物保护学院制药工程系。样品采集后阴干，粉碎过40目筛，保存备用。

瓜果腐霉菌(Pythiumaphanidermatum)该供试真菌由福建农林大学农药学教育部重点实验室提供，菌种保存于福建农林大学植物保护学院制药工程系。

2 实验方法

2.1 提取分离

取干燥的圆齿野鸦椿果皮粗粉10 kg，用100 L的70%的乙醇回流提取3次每次2 h，提取液减压浓缩得浸膏(A)2.7 kg。将所得浸膏经聚酰胺柱色谱分离，分别用水、70%的乙醇进行洗脱，得到水部位(A2)和70%乙醇洗脱部位(A3)。将A2部位经D101孔吸附树脂色谱柱进行吸附，分别用水、10%、30%、60%、95%乙醇进行洗脱，收集洗脱液减压浓缩后所得B1～B5部位。将B2部位(166 g)与60～100目硅胶拌样，硅胶柱色谱分离，采用V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=100∶1、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1依次进行梯度洗脱，收集馏分，通过TLC检测合并，得15个馏分，B2.1～B2.15。取B2.5(4.4 g)经Sephadex LH-20柱色谱，以V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1洗脱分离，收集馏分，通过TLC检测合并得到6个馏分B2.5.1～B2.5.6。其中B2.5.2(230 mg)经制备型HPLC进行制备，以甲醇-水(45∶55)为流动相，得到化合物7(3.5 mg)、8(12.8 mg)、9(11.32 mg)、10(20.19 mg)。B2.5.3(158 mg)经制备型HPLC进行制备以甲醇-水(55:45)为流动相，得到化合物和11(6.8 mg)、12(9.8 mg)、13(27.3 mg)。B2.5.4(220 mg)经硅胶柱V(二氯甲烷)∶V(甲醇)∶(水)=5∶1∶0.1为流动相，进行洗脱，得14(19.8 mg)，15(27.3 mg)。B2.6(4.8 g)经Sephadex LH-20柱色谱，以甲醇洗脱分离，得到7个组分为B2.6.1～A2.6.7；B2.6.3(177 mg)经制备型HPLC进行制备以甲醇-水(48∶52)为流动相纯化得到化合物16(3.3 mg)和17(12.8 mg)；B2.6.4(100 mg)经制备型HPLC以甲醇-水(55∶45)为流动相，制备得到化合物18(40.9 mg)。取B2.8部位(13 g)经硅柱色谱，依次用V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1依次进行梯度洗脱，收集馏分，通过TLC检测合并，得到7个馏分B2.8.1～B2.8.7。B2.8.3(737 mg)经制备型HPLC进行制备以甲醇-水(40∶60)为流动相纯化得到化合物1(9.3 mg)和2(10.4 mg)，取B2.8.4(3.87 g)经Sephadex LH-20柱色谱，以V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1洗脱分离，收集馏分，通过TLC检测合并得到6个馏分B2.8.4.1～B2.8.4.6，其中B2.8.4.2(96 mg)经制备型HPLC进行制备以甲醇-水(38∶62)为流动相纯化得到化合物3(22.8 mg)。B2.8.4.4(172 mg)部位经制备型HPLC进行制备以甲醇-水(38∶62)为流动相，制备得到化合物4(11.5 mg)、5(7.6 mg)、6(22.2 mg)。

2.2 果皮粗提物抑菌活性测定

采用菌丝生长速率法[3]测定圆齿野鸦椿果皮粗提物对瓜果霉腐菌菌丝的抑制作用。将试样用50%甲醇溶液溶解，制成1.0 g/L含药培养进行抑菌活性初筛；以50%甲醇溶液为空白对照；打取直径为5 mm的瓜果腐霉菌饼，接种于含药培养基上，于培养箱中培养并计算菌丝生长抑制率。将初筛抑制率 ≥ 40%的提取物，配制成浓度为0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 g/L的含药培养基，接种培养后测定其抑菌活性并计算毒力方程、抑制中浓度(EC50)和决定系数(R2)。

2.3 单体化合物对菌丝生长抑制作用的测定

采用菌丝生长速率法[3]测定化合物1～18对瓜果霉腐菌的抑制活性。将上述化合物用50%甲醇溶液溶解，药液最终浓度150 mg/L，以此浓度进行抑菌活性筛选。将初筛抑制率≥ 40%的提取物，配制成浓度为50、100、200、400、800 μg/mL的含药培养基，接种培养后测定其抑菌活性并计算毒力方程、抑制中浓度(EC50)和决定系数(R2)。

3 结果与分析

3.1 结构鉴定

化合物1黄色油状物(甲醇)；分子式为C26H34O11；mp.140～142 ℃；ESI-MS：m/z545 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：9.03(1H，s，4-OH)，6.94(1H，d，J=1.6 Hz)，6.77(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz)，6.70(1H，d，J=8.0 Hz)，5.49(1H，d，J=6.0 Hz)，4.24(1H，d，J=8.0 Hz)，4.05(1H，dd，J=5.6，9.2 Hz)，3.77(3H，s)，3.74(3H，s)，2.54(2H，s)，1.68(2H，m)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：147.5(C-3)，146.2(C-4)，145.5(C-4′)，143.4(C-3′)，135.2(C-1′)，132.5(C-1)，128.2(C-5′)，118.3(C-6)，116.8(C-6′)，115.3(C-5)，112.6(C-2′)，110.3(C-2)，103.1(C-1")，86.7(C-7)，76.9(C-3′′)，76.7(C-5′′)，73.5(C-2")，70.1(C-4")，63.0(C-9)，61.1(C-6′′)，60.2(C-9′)，55.7(3"-OCH3)，55.6(3′-OCH3)，51.1(C-8)，34.8(C-7′)，31.6(C-8′)。以上数据与文献[4]报道一致，故鉴定化合物1为(7S，8R)-二氢脱氢二松柏醇9-O-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2黄色油状物(甲醇)；分子式为C17H19O6；ESI-MS：m/z341 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.60(1H，dd，J=2.0，8.4 Hz，H-6)，7.48(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，6.91(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-2′)，6.82(1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，6.67(2H，m，H-5′，H-6′)，4.75(1H，dd，J=9.2，5.2 Hz，H-8)，4.09(1H，t，J=9.2 Hz，H-9a)，3.79(3H，s，3-OCH3)，3.72(3H，s，3′-OCH3)，3.51(1H，dd，J=9.2，5.2 Hz，H-9b)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：197.1(C-7)，151.1(C-4)，147.6(C-3′)，147.5(C-3)，145.6(C-4′)，128.5(C-1)，128.3(C-1′)，123.6(C-6)，120.3(C-6′)，115.5(C-5′)，114.9(C-5)，112.4(C-2′)，111.6(C-2)，63.8(C-9)，55.6(3-OCH3)，55.5(3′-OCH3)，53.9(C-8)。以上数据与文献[5]报道一致，故鉴定化合物2为楝叶吴萸素B。

化合物3黄色油状物(甲醇)；分子式为C20H26O7；ESI-MS：m/z461 [M﹣H]-；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.97(1H，d，J=1.2 Hz，H-2)，6.80(1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，6.75(1H，dd，J=1.2，8.4 Hz，H-6)，6.68(1H，dd，J=1.2，8.4 Hz，H-5′)，6.64(1H，d，J=8.4 Hz，H-6′)，5.30(1H，d，J=4.4 Hz，H-7)，3.73(3H，s，2′-OCH3)，3.69(3H，s，3-OCH3)，1.67(2H，m，H-8′)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：149.5(C-2′)，147.0(C-3)，145.7(C-4)，145.5(C-1′)，135.2(C-4′)，132.7(C-1)，120.2(C-5′)，120.2(C-6)，116.0(C-5)，114.6(C-6′)，112.9(C-2)，111.5(C-3′)，103.3(C-1′′)，81.8(C-8)，76.9(C-3")，76.7(C-5")，73.4(C-2")，71.6(C-7)，70.0(C-4")，60.9(C-6")，60.2(C-9)，60.2(C-9′)，55.4(2′-OCH3)，55.6(3-OCH3)，34.5(C-8′)，31.3(C-7′)。以上数据与文献[6]报道一致，故鉴定化合物3为(7R，8R)-threo-7，9，9′-三羟基-3，3′-二甲氧基-8-O-4′-新木脂素4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4黄色油状物(甲醇)；分子式为C30H34O9；ESI-MS：m/z561 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:9.03(1H，s，4-OH)，6.90(1H，d，J=1.6 Hz)，6.76(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz)，6.75(1H，d，J=8.0 Hz)，5.03(1H，d，J=4.8 Hz)，3.76(6H，m)，3.74(3H，s)，1.68(2H，m)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：147.5(C-3)，146.2(C-4)，145.5(C-4′)，143.4(C-3′)，135.2(C-1′)，132.5(C-1)，128.2(C-5′)，118.3(C-6)，116.8(C-6′)，115.3(C-5)，112.6(C-2′)，110.3(C-2)，103.1(C-1")，86.7(C-7)，76.9(C-3")，76.7(C-5")，73.5(C-2")，70.1(C-4")，63.0(C-9)，61.1(C-6")，60.2(C-9′)，55.6(3"-OCH3)，55.4(3，3′-OCH3)，51.1(C-8)，34.8(C-7′)，31.6(C-8′)。以上数据与文献[7]报道一致，故鉴定化合物4为illiciumlignan B。

化合物5黄色粉末(甲醇)；分子式为C16H12O7；mp.301～302 ℃；ESI-MS：m/z317 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.45(1H，s，5-OH)，7.75(1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.70(1H，dd，J=2.0，6.0 Hz)，6.19(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.47(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，7.76(1H，t，J=2.5 Hz，H-2′)，6.95(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，7.75(1H，d，J=2.0 Hz，H-6′)，3.84(3H，s，-OCH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：175.9(C-4)，164.0(C-7)，160.7(C-5)，156.2(C-9)，147.4(C-4′)，146.8(C-2)，146.6(C-3′)，135.8(C-3)，122.0(C-1′)，121.7(C-6′)，115.5(C-5′)，111.7(C-2′)，103.0(C-10)，98.2(C-6)，55.7(-OCH3)。以上数据与文献[8]报道一致，故鉴定化合物5为异鼠李素。

化合物6黄色粉末(甲醇)；分子式为C15H10O6；mp.276～277 ℃；ESI-MS：m/z287 [M+H]+；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ：12.48(1H，s，5-OH)，8.04(2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′)，6.92(2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′)，6.43(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.19(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)；13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ：175.9(C-4)，163.9(C-7)，160.7(C-5)，159.2(C-4′)，156.2(C-8a)，146.8(C-2)，135.7(C-3)，129.5(C-2′)，129.5(C-6′)，121.7(C-1′)，115.5(C-3′)，115.5(C-5′)，103.0(C-4a)，98.2(C-6)，93.5(C-8)。上述数据与文献[9]报道一致，故鉴定化合物6为山萘酚。

化合物7黄色粉末(甲醇)；分子式为C15H10O7；mp.304～305 ℃；ESI-MS：m/z303 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.5(1H，s，5-OH)，9.40(2H，s，C3′，4′-OH)，7.67(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，7.54(1H，dd，J=2.2，8.4 Hz，H-6′)，6.88(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.40(1H，d，J=2.0 Hz，H-5′)，6.18(1H，d，J=2.5 Hz，H-6)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：175.7(C-4)，162.1(C-7)，161.6(C-9)，156.6(C-5)，147.8(C-4′)，146.8(C-2)，144.3(C-3′)，135.8(C-3)，122.9(C-1′)，121.9(C-6′)，115.6(C-2′)，115.3(C-5′)，104.9(C-10)，98.6(C-6)，93.3(C-8)。以上数据与文献[10]报道一致，故鉴定该化合物7为槲皮素。

化合物8黄色粉末(甲醇)；分子式为C21H20O11；mp.275～276 ℃；ESI-MS：m/z465 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.64(1H，s，5-OH)，7.58(1H，dd，J=2.0，9.2 Hz，H-6′)，6.84(1H，d，J=2.0 Hz，H-6′)，6.40(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.46(1H，d，J=2.0 Hz，H-1′′)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：177.5(C-4)，164.2(C-7)，161.3(C-9)，156.4(C-5)，156.2(C-9)，148.5(C-4′)，144.9(C-3′)，133.3(C-3)，121.6(C-6′)，121.2(C-1′)，116.2(C-2′)，115.2(C-5′)，104.0(C-10)，100.8(C-1′′)，99.6(C-6)，93.6(C-8)，77.6(C-5′′)，76.5(C-3′′)，74.1(C-4′′)，70.0(C-4′′)，61.0(C-6′′)，上述数据与文献[11]报道一致，故鉴定化合物8为槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物9黄色粉末(甲醇)；分子式为C28H32O16；mp.266～267 ℃；ESI-MS：m/z625 [M+H]+；1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：12.56(1H，s，5-OH)，7.85(1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.51(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6)，6.90(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，6.40(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，6.18(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.43(1H，d，J=7.0 Hz，H-1′′)，4.41(1H，brs，H-1′′′)，3.83(3H，s，3′-OCH3)，0.97(3H，d，J=6.0 Hz)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：177.2(C-4)，164.2(C-7)，161.2(C-5)，156.5(C-9)，156.3(C-2)，149.4(C-3′)，146.9(C-4′)，133.0(C-3)，122.2(C-6′)，121.0(C-1′)，115.2(C-2′)，113.2(C-5′)，101.2(C-1′′)，100.9(C-1′′′)，98.9(C-6)，93.9(C-8)，76.4(C-3′′)，75.9(C-5′′)，74.3(C-2′′)，71.8(C-4′′′)，70.6(C-4′′)，70.3(C-3′′′)，70.1(C-2′′′)，68.3(C-5′′′)，66.8(C-6′′)，55.6(3′-OCH3)，17.7(C-6′′′)，上述数据与文献[12]报道一致，故鉴定化合物9为异鼠李素3-O-β-D-芸香糖苷。

化合物10黄色粉末(甲醇)；分子式为C26H28O14；mp.222～224 ℃；ESI-MS：m/z565 [M+H]+；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：13.69(1H，s，5-OH)，10.26(1H，brs，7-OH)，9.25(1H，brs，4′-OH)，8.05(2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′)，6.97(2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′)，6.84(1H，s，H-3)，4.77(1H，d，J=9.9 Hz，H-1′′′)，4.73(1H，d，J=9.6 Hz，H-1′′)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.3(C-4)，164.1(C-2)，161.5(C-7)，161.2(C-4′)，158.2(C-5)，155.1(C-4a)，129.0(C-2′，6′)，121.5(C-1′)，115.9(C-3′，5′)，108.1(C-6)，105.1(C-8)，103.7(C-8a)，102.6(C-3)，81.9(C-5′′)，78.9(C-3′′)，74.2(C-3′′′)，73.8(C-1′′′)，73.3(C-1′′)，70.9(C-2′′)，70.5(C-5′′′)，70.1(C-4′′)，69.6(C-2′′′)，68.4(C-4′′′)，61.2(C-6′′)，上述数据与文献[13]报道一致，故鉴定为化合物10为夏佛托苷。

化合物11黄色粉末(甲醇)；分子式为C25H26O13；mp.277～279 ℃；ESI-MS：m/z535 [M+H]+；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：13.69(1H，s，5-OH)，8.23(1H，brs，7-OH)，7.55(1H，dd，J=2.0，8.2 Hz，H-6′)，7.48(1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，6.88(1H，d，J=2.0 Hz，H-5′)，6.69(1H，d，J=2.0 Hz，H-3)，4.75(1H，d，J=2.0 Hz，H-1′′′)，4.72(1H，d，J=2.0 Hz，H-1′′)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.2(C-4)，164.3(C-2)，161.1(C-7)，158.2(C-5)，155.1(C-4a)，149.7(C-4′)，145.9(C-3′)，121.9(C-1′)，119.5(C-6′)，115.6(C-5′)，114.1(C-2′)，108.1(C-6)，105.1(C-8)，103.7(C-8a)，102.6(C-3)，82.1(C-5′′)，79.0(C-3′′)，74.2(C-1′′′)，73.8(C-3′′′)，73.3(C-1′′)，70.8(C-4′′)，70.7(C-5′′′)，70.1(C-2′′)，69.6(C-2′′′)，68.4(C-4′′′)，61.6(C-6′′)。以上数据与文献[14]报道一致，故鉴定化合物11为木犀草素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷-8-C-α-吡喃阿拉伯糖苷。

化合物12白色粉末(甲醇)；分子式为C7H6O2；mp.115～116 ℃；ESI-MS：m/z123 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：9.78(1H，s，-CHO)，7.76(2H，d，J=8.0 Hz，H-2，6)，6.93(2H，d，J=8.8 Hz，H-3，5)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：190.9(-CHO)，163.4(C-4)，132.1(C-2，6)，128.3(C-1)，115.8(C-3，5)，以上数据与文献[15]报道一致，故鉴定化合物12为对羟基苯甲醛。

化合物13白色粉末(甲醇)；分子式为C8H8O3；mp.151～152 ℃；ESI-MS：m/z169 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.44(1H，d，J=2.4 Hz，H-2)，7.35(1H，dd，J=1.8，7.8 Hz，H-6)，6.54(1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，3.65(3H，s，3-OCH3)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：174.1(-COOH)，151.1(C-4)，147.3(C-3)，131.0(C-6)，123.6(C-1)，114.7(C-5)，114.5(C-2)，55.8(3-OCH3)。以上数据与文献[16]报道一致，故鉴定该化合物13为香草酸。

化合物14白色粉末(甲醇)；分子式为C19H32O7；mp.136～137 ℃；ESI-MS：m/z375 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:4.21(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.82(1H，m，H-9)，1.56(3H，s，H-13)，1.05(1H，d，J=6.0 Hz，H-1′)1.00(3H，s，H-12)，0.98(3H，s，H-11)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：136.9(C-6)，123.7(C-5)，101.5(C-1′)，76.8(C-9)，76.8(C-5′)，73.5(C-3′)，71.6(C-2′)，70.2(C-4′)，66.3(C-3)，61.2(C-6′)，44.9(C-2)，40.3(C-4)，39.8(C-1)，37.2(C-8)，29.6(C-12)，28.2(C-11)，24.1(C-7)，23.5(C-10)，19.5(C-13)。以上数据与文献[17]报道一致，故鉴定化合物14为[R-(R*，R*)]-(1R)-3-[(4R)-4-羟基-2，6，6-三甲基-1-环己烯-1-基]-1-甲基丙基-β-D吡喃葡萄糖苷。

化合物15无定型粉末(甲醇)；分子式C19H30O7；mp.121～123 ℃；ESI-MS：m/z385 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.32(1H，d，J=16.4 Hz，H-7)，6.13(1H，d，J=16.4 Hz，H-8)，4.43(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，2.30(3H，s，H-10)，1.94(1H，d，J=12.4 Hz，H-2)，1.80(3H，s，H-11)，1.14(3H，s，H-12)，1.11(3H，s，H-13)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：201.2(C-9)，144.4(C-7)，137.1(C-6)，134.0(C-8)，133.2(C-7)，102.5(C-1′)，78.1(C-5′)，77.9(C-3′)，75.2(C-2′)，72.5(C-4′)，71.7(C-3)，62.7(C-6′)，47.4(C-4)，40.4(C-2)，37.7(C-1)，30.5(C-13)，28.7(C-12)，27.2(C-10)，21.8(C-11)。以上数据与文献[18]报道一致，故鉴定化合物15为(3E)-4-[(3R，4R，5R)-4-(β-D-吡喃葡糖氧基)-3，5-二羟基-2，6，6-三甲基-1-环己烯-1-基]-3-丁烯-2-酮。

化合物16黄色油状物(甲醇)；分子式为C19H30O8；ESI-MS：m/z409 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：5.95(1H，d，J=15.2 Hz，H-7)，5.76(1H，s，H-4)，5.15(1H，d，J=4.2 Hz)，5.02(1H，s，OH)，4.90(1H，s，OH)，4.43(1H，m，H-9)，3.63(1H，m，H-3′)，3.03(2H，m，H-4′)，2.94(1H，m，H-5′)，2.55(1H，d，J=16.8 Hz，H-2b)，2.05(1H，d，J=16.8 Hz，H-2a)，1.81(3H，s，H-13)，1.18(3H，d，J=6.4 Hz，H-10)，0.91(3H，s，H-11)，0.93(3H，s，H-12)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ：197.5(C-3)，163.9(C-5)，131.7(C-8)，131.7(C-7)，131.5(C-4)，100.0(C-1′)，78.0(C-6)，77.2(C-3′)，77.0(C-5′)，733(C-9)，72.0(C-2′)，70.1(C-4′)，61.1(C-6′)，49.4(C-2)，41(C-1)，24.1(C-12)，23.2(C-11)，22.1(C-10)，18.7(C-13)。以上数据与文献[19]报道一致，故化合物16鉴定为长春花苷。

化合物17黄色油状物(甲醇)；分子式为C10H14O2；ESI-MS：m/z169 [M﹣H]-；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.14(4H，m，H-2，3，5，6)，2.59(2H，q，J=7.6 Hz，CH2)，1.17(3H，t，J=7.6 Hz，CH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：143.9(C-1)，143.6(C-4)，128.2(C-6)，126.6(C-5)，126.2(C-2)，124.1(C-3)，74.4(C-1′)，68.0(C-2′)，28.7(CH2)，16.1(CH3)。以上数据与文献[20]报道一致，故鉴定化合物17为1-(4-乙基苯基)-1，2-乙二醇。

化合物18无色晶体(甲醇)；分子式为C11H16O3；mp.139～141 ℃；ESI-MS：m/z197 [M+H]+；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：5.78(1H，s，H-7)，4.99(1H，d，J=3.5 Hz，3-OH)，4.08(1H，m，H-3)，2.28(1H，dd，J=2.5，10.5 Hz，H-4a)，1.86(1H，dd，J=3.0，11.5 Hz，H-2a)，1.66(3H，s，H-11)，1.63(1H，dd，J=3.5，13.5 Hz，H-4b)，1.41(1H，dd，J=3.5，13.5 Hz，H-2b)，1.38(3H，s，H-9)，1.20(3H，s，H-10)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：183.1(C-6)，171.0(C-8)，112.1(C-7)，86.5(C-5)，64.9(C-3)，46.6(C-4)，45.3(C-2)，35.7(C-1)，30.4(C-9)，26.8(C-11)，26.2(C-10)。以上数据与文献[21]报道一致，故鉴定化合物18为黑麦草内酯。

3.2 果皮粗提物抑菌活性分析

果皮粗提物抑菌活性测定表明：A、A2、A3、B2部位对瓜果霉腐菌菌丝均有一定的抑制作用，其抑制率分别为45.99%±1.94%、63.17%±4.63%、51.52%±1.47%、64.60%±7.63%。其他部位在1.0 g/L浓度下对瓜果霉腐菌菌丝抑制率均低于40%。毒力测试结果表明，圆齿野鸦椿果皮提取物A、A2、A3、B2对瓜果霉腐菌的EC50值分别为1 175.28、275.10、585.80、207.45 mg/L，如表1所示。

表1 4种不同部位对瓜果霉腐菌菌丝的抑制作用 Table 1 The inhibitory effect of four different parts on P.aphanidermatum

3.3 单体化合物抑菌活性分析

单体化合物抑菌测试结果表明，化合物1、9、10、11对瓜果霉腐菌都具有较好的抑制作用，与阳性对照药丁子香酚活性相当。除化合物1、9、10、11以外，其余化合物在150 mg/L的浓度下对瓜果霉腐菌的抑制率均低于40%。4种化合物对抑制瓜果霉腐菌菌丝生长的EC50值分别为123.94、56.06、67.66、101.88 μM，如表2所示。

表2 化合物对瓜果霉腐菌的菌丝抑制作用 Table 2 Toxicity of the compounds against P.aphanidermatum

4 讨论

本研究首次发现圆齿野鸦椿果皮提取物对瓜果霉腐菌具有较好的抑制作用，并从活性部位分离鉴定了18已知个化合物，包括4个木脂素类、7个黄酮及其苷类、4个倍半萜及其苷类、3个酚酸类，其中除化合物6～8、12～13外均为该属植物中首次分离得到。化合物1、9～11对抑制瓜果霉腐菌菌丝生长的EC50值分别为123.94、56.06、67.66、101.88 μM。从化合物分类上来看，圆齿野鸦椿果皮中木脂素类化合物和黄酮碳苷类化合物对瓜果霉腐菌显示较好的抑制作用，且通过成分研究说明了黄酮碳苷类化合物是该植物的重要成分。

已报道的圆齿野鸦椿的相关研究多集中于总化学成分的测定，本研究对圆齿野鸦椿果皮成分进行系统分离鉴定，并发现对瓜果霉腐菌起抑制作用的单体成分，对继续挖掘圆齿野鸦椿抑菌活性成分具有重要意义。另外，且圆齿野鸦椿果皮生物量大，资源丰富，经济成本低，具有较高的开发价值和应用前景。

本研究仅对圆齿野鸦椿果皮粗提物的水洗脱部位(A2)进行了活性成分追踪，而抑菌测试表明70%乙醇部位(A3)对瓜果霉腐菌仍有抑制作用，其活性成分有待进一步探究。