19F核磁共振定量法测定含氟漱口液中氟化钠的含量

华俊杰，朱海菲，李 育

(海军军医大学药学院 上海 200433)

定量核磁共振(qNMR)是基于信号的积分面积正比于产生信号的质子数的一种绝对定量法，已被包括中国药典、美国药典与欧洲药典收载[1-3]。在药物分析方面已得到了广泛的应用[4-6]，例如天然产物鉴别[7]、药物的质量控制[8-11]。这是一种快速、简便、准确的技术，无需对照品，即能获得混合物的定量信息，可对传统色谱技术进行补充和替代。有文献报道，19F-qNMR可用于辨别含氟药物及其含量检测[10-13]，由于药物辅料中大多不含氟，不产生干扰，并有文献表明19F-qNMR的准确度与HPLC质量平衡法结果相当[10]。

含氟化物漱口水中主要组成为氟化钠，能有效防龋，但摄入过量会导致氟斑牙或氟骨症。因此，对于含氟漱口液中氟化钠含量测定，对于其质量控制至关重要。目前对于氟化钠的测定主要采用氟离子选择电极法，分光光度法和离子色谱法，存在耗时、试剂昂贵，操作烦琐的问题[14]。本实验拟选择19F-qNMR测定含氟漱口液中氟化钠的含量，为其质量控制提供必要的技术方法。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

BRUKER AVANCE II300 MHz NMR(Bruker 公司)、5mm同轴核磁管535-pp-7(Wilmad 公司)、SHIMADZU AUW220D分析天平(0.01 mg，SHIMADZU 公司)。

1.2 样品及试剂

含氟漱口液(自制)、重水(Cambridge Isotope Laboratories,Ins.)、三氟乙酸(纯度99.5%，Cambridge Isotope Laboratories,Ins.)、纯化水(实验室自制)。

2 实验方法

2.1 溶液配制

含氟漱口液配制：精密称取氟化钠、替硝唑、醋酸氯已定适量，溶于1 000 ml水中，制得氟化钠、替硝唑、醋酸氯已定浓度分别约为0.4、0.2 和0.2 mg/ml的含氟漱口液。

氟化钠对照品储备液配制：精密称取氟化钠0.08106 g，置100 ml量瓶中，加入纯化水溶解，并稀释定容至刻度，得浓度为0.8106 mg/ml的氟化钠对照品储备液。

内标物配制：量取氘代三氟乙酸 0.1 ml，置10 ml量瓶，用重水稀释，定容至刻度，精密量取220 μl置于同轴核磁管内管。

供试品配制：以含氟漱口液作为供试品溶液，精密量取260 μl 置于同轴核磁管外管，待测。

2.2 测定条件与处理

在同轴核磁管外管放入待测样品，插入含三氟乙酸的内管，进行数据采集。采用zgfhigqn.2脉冲序列在恒温(25oC)下获取19F-NMR谱。具体试验参数设置如下：谱宽(SWH)=δ 90，射频中心频率(O1P)=δ 98，采样点数(TD)=128 K，采样时间(AQ)=2.67 s，采样次数(NS)=32次，空扫次数(DS)=4次，增益(RG)=912。

图谱处理，使用 Topspin3.1 软件处理采集到的数据，通过软件调整相位并自动校准基线后对信号峰进行积分，设定内标峰积分面积为1.00，记录样品峰积分面积。

3 方法学考察

3.1 专属性试验

精密量取含氟漱口液供试品260 μl，按“2.2”项下检测条件测定19F-NMR谱，记录信号峰的积分面积。另按含氟漱口液处方，配制不含氟化钠的阴性对照品溶液，同法取样测定，比较阴性对照与供试品的19F-NMR谱，观察阴性对照品是否出峰。另取稀释1000倍后的三氟醋酸220 μl，同法测定，结果显示，供试品的信号峰在δ 119，处方其他组分无响应信号，对供试品不产生干扰信号；内标的响应信号在δ 75，供试品与内标的响应信号分离度好，说明本法专属性良好(见图1)。

3.2 线性与范围

分别精密量取氟化钠对照品储备液10.0、6.0、4.0、2.0、1.0 ml置10 ml量瓶中，用纯化水稀释并定容至刻度，制成含氟化钠对照品0.8106、0.6080、0.4053、0.2027、0.1013 mg/ml工作曲线系列溶液。分别吸取260 μl工作曲线溶液，转移至同轴核磁管外管，按“2.2”项下检测条件进行300 MHz核磁共振检测，记录19F-NMR谱图，以峰面积A对浓度C(mg/ml)进行线性回归，得线性回归方程：

A= 1.1392C- 0.0013，r= 0.99995

表明氟化钠在0.1 ～ 0.8 mg/ml范围内，线性关系良好。

图1 含氟漱口液的19F-NMR图谱(含三氟乙酸内标)1.氘代三氟乙酸信号峰；2.氟化钠信号峰

3.3 重复性试验

分别精密量取供试品溶液260 μl 6份，按“2.2”项下进行检测，记录供试品的响应信号面积相，按照标准曲线法计算含量，得含氟漱口液中氟化钠含量分别为99.41%、99.27%、99.22%、99.63%、99.00%、99.19%，RSD平均为0.22%，表明该方法重复性良好。

3.4 回收率试验

精密称取对照品氟化钠0.10270 g，置100 ml量瓶，加纯化水溶解，稀释并定容至刻度，得浓度为1.0270 mg/ml氟化钠对照品溶液。

精密量取漱口液2.5 ml，置于5 ml容量瓶；随后分别精密量取浓度为1.0270 mg/ml氟化钠对照品液0.8、1.0和1.2 ml，加入上述量瓶中，加纯化水稀释并定容至刻度，制得低、中、高3个浓度的回收率测定溶液，每个浓度平行配制3份，按“2.2”项下进行检测，并计算加样回收率。表1显示低、中、高3个浓度的平均回收率分别为99.36%、99.31%及99.65%，RSD分别为0.51%、0.35% 及0.54%，表明该方法测定结果准确度满足要求。

表1 19F-NMR测定含氟漱口液中氟化钠含量的加样回收率试验(n=3)

3.5 稳定性试验

取供试品溶液，在0、4、8、12、24 h分别对其进行测定，记录供试品的响应信号面积相。结果如表2所示，氟化钠平均峰面积为0.4619，RSD为0.19%，表明供试品在24 h内稳定性良好。

表2 19F-NMR测定含氟漱口液中氟化钠含量的稳定性试验

3.6 氟化钠的含量测定

分别精密量取供试品溶液260 μl 5份，按照“2.2”项下方法测定。结果如表3所示，该漱口液中氟化钠的平均含量为99.30%，RSD为0.23%。

表3 19F-NMR测定含氟漱口液中氟化钠的含量

4 结果与讨论

本文所建立的19F-NMR定量分析含氟漱口液中氟化钠含量的方法，无需分离提取过程，直接用核磁共振波谱法进行含量检测，具有方便、快捷、准确的特点，解决了传统高效液相色谱法无法检测NaF含量的问题。本文采用标准曲线法可准确地计算出NaF含量，适用于大批量样品分析，能有效排除内标物的浓度与质量对于含量测定的影响。经过方法学考察后，论证了19F-NMR定量分析方法具有较好的专属性、线性、精密度、准确度及稳定性，为含氟药物的含量检测拓展了新方法。