不同厂家雷公藤多苷片的紫外谱学特征研究

王秀文，顾金瑞

（山西中医药大学，山西晋中030619）

雷公藤系卫矛科（Celastr aceae）雷公藤属植物雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）多年生藤本植物，其有效成分主要为二萜、三萜、生物碱等［1］。雷公藤多苷片是雷公藤干燥后去皮根经提取、纯化后得到的有效组分，对类风湿性关节炎、皮肤病、自身免疫性肝炎等具有显著疗效［2］。目前，国内市场销售的雷公藤制剂主要为雷公藤片和雷公藤多苷片，雷公藤多苷片具有用量小、不良反应少的优点，得到了较广泛的应用［2］。近年来，已有不少学者对雷公藤制剂的质量进行了研究［3-7］，大多是通过高效液相色谱法来测定雷公藤制剂中的有效成分，但这种方法成本较高，操作也相对复杂。而紫外分光光度法和傅立叶红外光谱法具有成本较低、操作简单和分析速度快等优点。本实验采用可以快速提取有效成分的超声波提取法提取雷公藤多苷片中的有效成分，使用紫外-可见分光光度法对雷公藤多苷片进行紫外图谱扫描，并辅以红外光谱法，分析不同厂家不同批号雷公藤多苷片的质量，以期为雷公藤多苷片质量的快速鉴定提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪 器

TU-1810紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），FA224电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司），SB-5200DTDN超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司），Nicolet系列傅立叶变换红外光谱仪（赛默飞世尔科技有限公司），压片机（天津市瑞来特仪器有限公司）。

1.2 试 药

95%乙醇、三氯甲烷均为分析纯（天津市凯通化学试剂有限公司），石油醚（分析纯，沸程60～90°C，天津市光复科技发展有限公司），高纯水（市售娃哈哈纯净水），溴化钾（光谱纯，上海榕柏生物技术有限公司）；8批雷公藤多苷片药品均购自山西太原和晋中榆次各大药店。

表1 雷公藤多苷片样品来源

2 方法

2.1 紫外吸收光谱供试品的制备

分别取8批雷公藤多苷片每批各4片，精密称定，研细，将粉末置于50 mL具塞三角瓶中，加入20 mL溶剂，精密称重；超声30 min后，冷却至室温，称重，并用提取溶剂补足损失重量。滤取上清液，洗涤滤纸上的样品残渣并转移至50 mL具塞三角瓶中，继续用提取溶剂超声提取2次，合并滤液，作为供试品溶液。

2.2 紫外吸收光谱图的绘制

以高纯水为参比溶液，测出以水为提取溶剂时8批雷公藤多苷片供试品溶液的紫外吸收光谱图。再分别以95%乙醇、氯仿和石油醚为参比溶液，同法测出各批号样品的紫外吸收光谱图。扫描波长范围为200～800 nm，取样间隔为0.1 nm，扫描速率为中速。

2.3 红外吸收光谱供试品的制备

取以水和石油醚为提取溶剂时的雷公藤多苷片残渣适量，研成粉末，将样品与溴化钾按1∶100的比例研磨均匀，取混合物适量压片。

2.4 红外吸收光谱图的绘制

以溴化钾为背景，将压好的片放入红外光谱仪扫描。光谱分辨率4 cm-1，测定范围4000～500 cm-1，每个样品累计扫描20次，自动大气背景扣除。

3 结 果

3.1 4种溶剂提取的雷公藤多苷片紫外谱线组数据

4种不同溶剂提取的雷公藤多苷片紫外谱线组数据见表2。由表2可以看出，4种溶剂提取的8批雷公藤多苷片紫外谱图吸收峰数目均只有1个，但最大吸收波长及最大吸收波长处的吸光度均有差异。选择不同溶剂为提取液时，供试品溶液的吸光度值不同，说明雷公藤多苷片中的有效成分在不同溶剂中有不同的溶解度。

表2 4种溶剂提取的雷公藤多苷片紫外谱线组数据

A、B 2个厂家各3个批号的样品，经4种溶剂提取后，吸光度值比较稳定；而C厂家2批样品，经4种溶剂提取后，吸光度值差别较大。综上可知，A和B两个厂家生产的雷公藤多苷片成分含量高且相近，产品成分含量比较稳定，C厂家生产的雷公藤多苷片成分含量低且质量不稳定。

3.2 不同厂家样品在不同提取溶剂下的吸光度平均值

结果见表3。

表3 不同厂家样品在不同提取溶剂下的吸光度平均值（λma）x

由表3可以看出，4种不同溶剂提取的8批雷公藤多苷片中，A厂家的3批样品和B厂家的3批样品平均吸光度值比较接近，而C厂家的吸光度值普遍偏小。

3.3 8批样品石油醚和水提取残渣红外光谱图

由表2可以看出，以95%乙醇和氯仿为提取溶剂时，A厂家与B厂家所生产的雷公藤多苷片供试品在最大吸收波长处吸光度值较大，说明其成分含量高；而以水和石油醚为提取溶剂时，吸光度值均偏小。产生上述现象的原因可能是雷公藤多苷片中的有效成分易溶于95%乙醇和氯仿，而不易溶于水和石油醚。

在试验中我们发现，当以水和石油醚为提取溶剂时，样品出现了明显不溶解现象，提取后过滤速度非常缓慢，且滤纸上残留粉末较多，经过3次超声提取后仍有药品粉末沉在瓶底。其中，水提取后A厂家3批样品有较多残渣，石油醚提取后8批样品均有残渣。这进一步证明在以水和石油醚为提取溶剂时，样品吸光度值偏小是由于这两种溶剂没有把雷公藤多苷片中的成分提取出来或提取较少。为了证实这个推断，我们对8批样品石油醚和水提取残渣进行了红外光谱扫描，见图1~图11。

图1 水为提取溶剂时残渣与样品红外光谱图（批号为140203的A厂家样品）

由图1~图11可以看出，残渣与样品的红外吸收峰数目、峰形和峰位基本接近，从而证实了雷公藤多苷片中的成分不易溶于水和石油醚的推断。

图2 水为提取溶剂时残渣与样品红外光谱图（批号为150302的A厂家样品）

图3 水为提取溶剂时残渣与样品红外光谱图（批号为150902的A厂家样品）

图4 石油醚为提取溶剂时残渣与样品红外光谱图（批号为140203的A厂家样品）

图5 石油醚为提取溶剂时残渣与样品红外光谱图（批号为150302的A厂家样品）

图6 石油醚为提取溶剂时残渣与样品红外光谱图（批号为150902的A厂家样品）

4 讨论

本实验选择使用4片雷公藤多苷片供试品溶液进行试验。预试验采用10片样品时，测定的吸光度值偏大，后经过对供试品液进行逐次稀释，通过测得的合适浓度的稀释倍数，经过换算得出使用4片雷公藤多苷片制备供试品溶液较为合适。

图7 石油醚为提取溶剂时残渣与样品红外光谱图（批号为20140402的B厂家样品）

图8 石油醚为提取溶剂时残渣与样品红外光谱图（批号为20140501的B厂家样品）

图9 石油醚为提取溶剂时残渣与样品红外光谱图（批号为20151202的B厂家样品）

图10 石油醚为提取溶剂时残渣与样品红外光谱图（批号为141203的C厂家样品）

图11 石油醚为提取溶剂时残渣与样品红外光谱图（批号为150501的C厂家样品）

本试验采用了超声提取法提取雷公藤多苷片中的有效成分，与其他学者采用加热回流法、色谱柱洗脱进行纯化的方法［8-10］相比，本法提取速率快且吸光度较大。在分析方法上，采用紫外分光光度法测定样品的吸收光谱及吸光度，可以快速、有效地分析样品的质量。课题组成员宋晓娟采用FTIR法研究了8批药材的红外吸收光谱，发现同一厂家不同批号雷公藤多苷片的红外吸收谱图的峰形、峰位和峰的数目大致相同，说明同一厂家生产的药品质量相近；而3个厂家雷公藤多苷片的红外吸收光谱峰形、峰位和峰的数目均有差别。因此，我们可以利用红外光谱的不同来鉴别不同厂家的产品，达到了快速鉴别的目的。

由于时间有限，对于雷公藤多苷片中哪些成分在300 nm附近有紫外吸收，以及其准确含量是多少，并没有进行深入研究。以后我们将采用高效液相色谱法等方法来做进一步研究。