五味消澼洗液对三硝基苯磺酸诱导溃疡性结肠炎小鼠各脏器的影响

支晨阳 刘屹 于哲 翟世纯 李为俊 王亚倩 刘志红 高海成 周建华

(1长春中医药大学附属医院肛肠科，吉林 长春 130000；2吉林大学药学院)

溃疡性结肠炎(UC)又称溃疡性非特异性结肠炎，是一种病因尚未明确的疾病〔1〕。本病主要临床表现包括腹痛、腹泻、里急后重和黏液脓血便，少数病人常伴有发热、体重减轻等全身症状，还伴有皮肤、关节、眼、口和肝胆等肠外表现〔2〕。据报道，UC可发病在任何年龄阶段，多见于20～40岁青壮年，男女患病率无明显差异〔3〕。现代医学治疗UC的药物主要包括氨基水杨酸类、糖皮质激素类、抗生素及免疫抑制等〔4〕。目前中药保留灌肠治疗UC以经方、验方居多，而被绝大多数医家共同运用的中医处方或成药较少。五味消澼洗液是中药复方制剂，具有活血化瘀，消炎止痛的功效，本文分析其对UC小鼠各脏器的影响。

1 资料与方法

1.1试剂和仪器 徕卡4215切片机(德国)；PM-10AO 全自动显微照相装置(日本)。

1.2实验动物造模及分组 Balb/c小鼠24只，由沈阳动物室提供。用三硝基苯磺酸(TNBS)分别配成 50%,55% 和70%的浓度。小鼠在造模前禁食不禁水24 h，将小鼠固定在鼠解剖台上，用10%水合氯醛(3 ml/kg)麻醉，用石蜡油润滑聚丙烯管(外径2 mm)，缓慢插入小鼠肛门上段8 cm 结肠内即可，注入5%的TNBS 与50%乙醇以12∶5 比例混合的复合物每只0.8 ml(其中TNBS 120 mg/kg)，提起小鼠尾部，持续倒置1 min，使造模剂充分进入小鼠肠腔内，使小鼠头部倾斜向下平卧，捏紧肛门口2 min，至自然清醒，正常饲养。造模后第3 天当天测量体重后，各组开始保留灌肠给药，五味消澼洗液高、中、低剂量治疗组(200、100、50 μl/g)及阳性药组(美沙拉嗪)均按上述剂量给药。正常对照组和模型组给予等量生理盐水。连续给药14 d，1 次/d。

根据成人灌肠用药40 g/d，按正常成年人标准体重60 kg来算，单位剂量0.667 g/kg，小鼠低、中、高剂量治疗组用药按人的5、10、20 倍来算。美沙拉嗪肠溶片按成人用药3 g/d，正常成年人标准体重60 g/kg 计算，单位剂量是0.05 g/kg，小鼠灌肠中药按人的10 倍来算，即0.5 g/kg。

1.3各脏器HE染色 心、肝、肾及结肠等组织在4%多聚甲醛中固定，经石蜡包埋，切成0.5 μm厚度，HE染色，镜下观测各脏器组织病理变化。

1.4统计学处理 采用SPSS20.0软件进行方差分析。

2 结 果

2.1各组心脏、肾脏和脾脏的重量变化 各组心、肾、脏脏重量变化差异不显著(P>0.05)。见表1。

表1 各组心脏、肾脏和脾脏的重量变化

2.2小鼠解剖 模型组明显有炎症出现，而治疗组结肠炎症减轻(图1)。

图1 各组结肠解剖

2.3结肠 正常对照组黏膜和表面均无溃疡或增生， 肠蠕动正常。在模型组可见间质淋巴细胞，结肠黏膜可见慢性炎症。 腺上皮细胞观察到嗜中性粒细胞和淋巴细胞，浆细胞(上皮细胞看到嗜中性粒细胞，其特征在于急性炎症和损伤，血浆细胞和淋巴细胞是慢性炎症特征)。 此外，可见血管拥塞(图2)。阳性药组、各剂量治疗组其结肠炎症减轻，症状降低。说明五味消澼洗液调控结肠炎的作用。

2.4心脏 正常对照组心肌细胞整齐排列，肌肉定期排列，亚细胞结构如线粒体丰富，聚集，呈正常形态。 模型组可见心肌细胞变性和局灶性炎症细胞浸润及间质性结缔组织增生。阳性药组和各剂量治疗组心肌炎症细胞减少，间质性结缔组织增生降低(图3)，说明五味消澼洗液可能具有保护心肌作用。

2.5肾脏 正常对照组肾脏无明显病理改变。模型组管状上皮细胞脱落并伴有水肿。 局灶性炎症细胞浸润，肾小球系膜细胞增殖。 大部分肾小球基底膜出现增厚，表明模型组肾脏病变显著，阳性药组和各剂量治疗组肾小球系膜细胞炎症减轻(图4)，说明五味消澼洗液可能具有保护肾脏的作用。

图2 各组结肠HE染色(×200)

2.6肝脏 正常对照组的肝脏呈现正常的肝小叶结构和肝细胞结构清晰。模型组可见UC导致组织病理学损伤和广泛的肝细胞损伤，如门静脉炎症，脂肪变化和静脉充血。阳性药组和各剂量治疗组肝脏组织损伤和肝细胞损伤程度减轻(图5)，说明五味消澼洗液可能具有保护肝脏的作用。

图3 各组心脏HE染色(×200)

图4 各组肾脏HE染色(×200)

图5 各组肝脏HE染色(×200)

3 讨 论

慢性UC过程中，可能会诱发多种器官病变〔5〕，因此降低结肠病变，保护各器官免受破坏对慢性UC患者的治疗具有较强的临床意义。五味消澼洗液中药复方制剂不仅能够治疗TNBS诱发的小鼠UC，调控小鼠的体重变化；还能够保护慢性UC小鼠的各个脏器，这种保护作用的产生可能与五味消澼洗液组成的中药复方制剂具有抗炎抗氧化、提高胰腺的功能及调节免疫的作用有关系。其作用机制可能与调节机体免疫功能，抗菌抗感染，调节肠道菌群，改善血液循环，抗微血栓，抗氧化自由基损伤，抗肿瘤等有关〔6〕。但由于中药成分复杂，其作用的有效成分、有效浓度、具体机制仍待深入研究，通过保留灌肠这种给药方式可以避免药物的首过效应，减少对机体的刺激，局部药液浓度增高，效果也会更为理想。