青岛孕晚期妇女B族链球菌定植、药敏及血清型分析

宋海燕，郑 旭，由晓颜，刘丰海*

(1.青岛大学医学部 临床检验诊断学，山东 青岛266021；2.青岛市市立医院 检验科，山东 青岛266011)

B族链球菌是一种β溶血的革兰阳性球菌，常定植于妇女的直肠和泌尿生殖道，携带者多无临床表现[1]。西方国家研究显示，孕妇GBS的定植率为10%-35%[2]，比非妊娠妇女高出20倍[1]。孕妇携带GBS可导致尿路感染、早产和胎膜早破等疾病；新生儿GBS感染通常由垂直传播引起，主要表现为肺炎、脓毒症和脑膜炎。根据特异性荚膜多糖抗原将GBS分为10种血清型，即Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ-Ⅸ[1]，其中Ⅲ型含神经氨酸酶和脂磷壁酸最多，毒力最强。美国CDC[3]于2010年修订了《围产期B族链球菌疾病预防指南》，建议对所有妊娠35-37周妇女采集阴道下1/3及直肠标本，进行GBS筛查以判断是否实施产前抗生素预防性治疗。国内GBS流行病学研究起步较晚，尚缺乏统一的GBS筛查与防治策略。因此，了解本地区GBS的定植率、抗生素药敏谱和血清型分布，以为临床治疗和预防GBS感染提供实验室依据。

1 材料与方法

1.1 GBS菌株来源

收集2017年12月-2018年12月在我院门诊就诊的妊娠35-37周孕妇的阴道和直肠拭子，接种于血平皿，于37℃培养18-24 h，获得GBS分离株54株。

1.2 仪器和试剂

VITEC 2 Compact全自动细菌鉴定仪(法国生物梅里埃公司)，哥伦比亚血平皿和血M-H琼脂平皿(郑州安图生物工程股份有限公司)，药敏纸片(英国OXOID公司)，血清分型试剂(日本Denka Seiken公司)。

1.3 GBS培养与鉴定

首先选择血平皿上菌落较白，呈圆形，中等大小，周围有乳光，多伴有β溶血环的可疑菌落，进行革兰染色并在显微镜下观察，发现革兰阳性球菌再行CAMP实验，最后采用VITEK 2 Compact鉴定仪对CAMP实验阳性菌株进行鉴定。

1.4 GBS血清型鉴定

应用胶乳凝集法测定GBS的6种血清分型(Ia、Ib、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型)，操作步骤和结果判读按照试剂说明书。若菌株与6种分型血清均不发生凝集，定义为未分型(non-typeable,NT)。

1.5 GBS药物敏感性试验

采用VITEC 2 Compact全自动细菌鉴定仪对54株细菌做药物敏感性试验。参照CLSI 2017标准对药敏结果进行判定。质控菌株为肺炎链球菌ATCC 49619，质控菌株来源于本实验室保存。

1.6 红霉素诱导克林霉素耐药试验(D试验)

采用双纸片扩散法对红霉素耐药和克林霉素敏感或中介的菌株进行D试验。将红霉素(15 μg)和克林霉素(2 μg)贴在相邻的位置，间距12-15 mm，35℃ 5-10% CO2孵育18-24 h，发现红霉素耐药，且邻近红霉素侧克林霉素抑菌圈截平呈“D型”抑菌环，判定为诱导克林霉素耐药试验阳性，并将该分离株报告为“克林霉素耐药”。

1.7 统计分析

采用WHONET 5.6 软件分析药敏结果。

2 结果

2.1 GBS的定植率

对2017年12月-2018年12月在我院门诊就诊的1265例孕晚期妇女进行GBS筛查，检出GBS阳性孕妇54例，定植率为4.3%。

2.2 GBS菌株血清型分布

54株B族链球菌，共检测到5种血清型，主要是血清Ⅲ型(44.4%)和Ⅰb型(31.5%)，其次为Ⅴ型(9.3%)、Ⅰa型(3.7%)、Ⅱ型(3.7%)和NT型(7.4%)，见表 1。

表1 GBS的血清型分布

2.3 GBS的药物敏感性分布

54株GBS对青霉素、氨苄青霉素、利奈唑胺、万古霉素均敏感，对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星和四环素的耐药率较高分别为66.7%、75.9%、74.1%和53.7%，见图1。以上54株GBS中，28株对红霉素和克林霉素同时产生耐药；8株对红霉素耐药而克林霉素敏感或中介，对这8株菌进行D试验，发现D试验阳性7株，阳性率为87.5%。

图1 54株GBS菌株药敏结果

3 讨论

GBS是欧美国家围产期新生儿侵袭感染的首要原因，可引起新生儿死亡或残疾。新生儿感染主要由母婴垂直传播引起，国外一项前瞻性研究发现，约30%的孕妇感染GBS，其中30%-85%发生垂直传播，由此导致的新生儿平均感染率达50%[1]。20世纪90年代，西方国家通过制定GBS预防指南，明显降低了新生儿GBS的感染率和病死率，但我国尚未对GBS感染问题制定合理有效的预防措施。

GBS流行分布存在地域或民族差异，一篇meta分析[2]显示，全球孕妇GBS总体定植率为18%，东亚地区为11%。我们发现青岛孕晚期妇女GBS的定植率为4.3%，低于东亚地区的平均水平。国内GBS检出率一般为3%-15%，如：南京[4]地区GBS定值率为4.17%，东莞[5]为8.2%，温州[6]高达14.01%。本地区GBS定植率与南京地区相仿，处于偏低水平。

本研究中共检出5种血清型(Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ型)，以Ⅲ型和Ⅰb型最常见，分别占44.4%和31.5%，有别于国内其他研究，台湾[7]地区为Ⅵ型(35%)和Ⅲ型(25%)；东莞[5]以Ⅲ型(54.9%)和Ⅰa型(17.6%)为主。本地区的优势血清型与国外报道也有较大差异，欧洲[8]主要是Ⅲ型(31.9%)、Ⅰa型(18.8%)和Ⅴ型(16.7%)；日本[9]以Ⅵ型(24.6%)和Ⅷ型(35.6%)为主。以此可见，GBS菌型谱分布具有明显的区域差异性。引起新生儿侵袭性感染和孕妇不良妊娠结局常见的血清型是Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ型，其中Ⅲ型最常见，在新生儿GBS感染总发病率中占61.5%[2]，该型也是本地区流行的主要血清型，应提高足够重视。

指南[3]推荐青霉素作为产前抗生素预防的一线药物，但在日本和韩国已发现对青霉素敏感性降低的GBS菌株，本研究中所有菌株对青霉素和氨苄青霉素均100%敏感，说明β内酰胺类抗生素仍可作为产前抗生素干预的首选药物。指南[3]同时指出，对青霉素过敏者可选用红霉素和克林霉素作为替代药物，然而本试验中GBS对红霉素和克林霉素耐药率均较高，分别为66.7%和75.9%，高于上海[10](53.4%和50.2%)、东莞[5](64.9%和52.4%)和台湾[7]地区(48.9%和51.4%)。此外，本研究中D试验阳性率为87.5%，高于国内其他报道[10]，可能与GBS的表面蛋白、耐药基因、分子分型及区域差异相关。因此，不建议本地区将大环内酯类抗生素作为二线药物用于治疗母婴GBS感染。

本研究还发现，该地区GBS对左氧氟沙星的耐药率高达74.1%，显著高于东莞、上海[5,10]等地。GBS对喹诺酮类药物较高水平耐药主要由parC和gyrA基因联合突变引起，提示我们应加强GBS的耐药检测，防止耐药基因的累积或爆发。

总之，青岛育龄妇女GBS定植率较低，血清型主要为Ⅲ型和Ⅰb型。但是，本地区GBS对大环内酯类和喹诺酮类抗生素均表现出较高水平的耐药率，所以在抗GBS感染中，仍推荐首选β内酰胺类药物，对青霉素过敏者可选用万古霉素。本研究对预防母婴GBS感染具有重要意义，也为国内GBS大规模流行病学研究和GBS疫苗研发提供理论依据。