HPLC对比分析福鼎大白茶绿茶、红茶中的茶多酚儿茶素类物质

杨秀群 刘永祺 刘燕 罗菊

摘   要   建立了一种检测茶叶中茶多酚儿茶素含量的方法。对比研究超声提取和冷凝回流提取方法处理样品，结果表明，提取温度50 ℃，时间70 min，样品与溶剂料液比为1∶20时效果最佳。经孔径0.22 μm有机相滤头过滤，高效液相色谱仪检测，结果显示目标物在20 min内出峰，在浓度20～1 600 μg·mL-1范围内线性关系良好，相关系数达0.998 7以上，精密度RSD（n=5）在1.04%～1.28%，日内重现性好，回收率在81.7%～83.6%。应用該方法检测福鼎大白茶绿茶、红茶中的茶多酚，发现两种加工工艺处理的福鼎大白茶儿茶素的含量有差异，该研究结果可以用于指导消费者依据自身需要选取茶叶，同时为茶叶功能食品的研发提供理论依据。

关键词   高效液相色谱法;福鼎大白茶;绿茶;红茶;茶多酚儿茶素

中图分类号：S132    文献标志码：A    DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.28.006

我国茶叶分类方式多样，最常见的是以加工工艺划分，根据是否发酵及发酵的程度通常把茶叶分为红茶、黄茶、黑茶、白茶、青茶、绿茶。其中，绿茶又称为不发酵茶，由新叶经杀青、揉捻和干燥等工艺制成，而红茶经揉捻、发酵、干燥制成[1]。发酵能使茶叶的内含成分发生生物化学变化，加工工艺不同将影响茶叶的组成成分，特别是茶多酚[2]。

茶多酚（Tea-poly0phenols，TP）是茶叶中最主要的功能成分之一，占茶叶干重的10%～30%[3]。茶多酚又叫茶鞣质、茶单宁，是茶叶中一类多羟基酚类化合物的总称，主要包括儿茶素类、黄酮、花青素类和酚酸类[4]。其中儿茶素类化合物为茶多酚的主体成分，占茶多酚总量的65%～90%。儿茶素可分为表没食子儿茶素（Epigallocatechin，EGC）、表儿茶素没食子酸酯（Epicatechingallate，ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechingallate，EGCG）、儿茶素（C）、表儿茶素（Epicatechin，EC）[5]等。儿茶素是茶叶中最主要的活性物质，具有强于VC、VE的抗氧化性[6]，有抗肿瘤、抗诱变、预防龋齿等诸多药效[7]，尤其EGCG具有抗病毒、抗肿瘤[8]、抗突变[9]、降压、抗白血病等功效[10]。儿茶素已成为一类重要的食品添加剂和药物。儿茶素是茶树次生物质代谢的重要成分，也是茶叶保健功能的主要物质，决定茶叶色、香、味品质的重要因素[11]。儿茶素的成分受不同品种茶树、栽培环境和加工工艺的影响[12]，研究儿茶素可为评价茶叶及其制品的品质及药用价值[13-14]，以及用于解读茶树多酚代谢的生理调控机制提供一定的依据[15]。

茶多酚的检测方法分为总量检测和组分含量检测，总量检测有分光光度法、电化学法、近红外光谱法等;组分检测有高效液相色谱法、毛细管电泳法、原子吸收法、气相色谱法等。其中，液相色谱法因分析简单、快速、灵敏、准确而被广泛应用[16-20]。

本文采用超声和冷凝回流的方法提取茶多酚，高效液相色谱法测定福鼎大白茶绿茶、红茶中4种儿茶素的含量，通过对比研究同种茶叶两种加工工艺即绿茶、红茶处理后4种儿茶素的含量，评价两种加工工艺对儿茶素含量的影响，以便更好地指导消费者依据自身需要选取茶叶，同时为茶叶功能食品的研发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器：LC-20AT型高效液相色谱仪（仪器配置：SPD-M20A检测器，SIL-20A自动进样器，LC-20AD二元泵，CYO-10AASVP柱温箱，CBM-20A系统控制器），日本岛津;ML104型电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司;KH-250DB型数控超声波清洗器，昆山禾创超声仪器有限公司;HH-8数显恒温水浴锅，上海梅香仪器有限公司;WGL-65B电热鼓风干燥箱，天津市泰斯特仪器有限公司;TST-UPW-20L超纯水仪，石家庄泰斯特仪器设备有限公司;BCD-271VMQ冰柜，美的公司。

试剂：表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG， 纯度99.92%），表儿茶素茶多酚没食子酸酯（ECG， 纯度98.93%），表没食子儿茶素（EGC， 纯度98.34%），（+）-儿茶素（C， 纯度99.58%）标准品，成都曼思特生物科技有限公司;甲醇、乙腈色谱纯，美国TEDIA;甲醇、磷酸、柠檬酸分析纯，重庆富宇。实验用水：超纯水，超纯水机制得。

材料：采用红茶、绿茶工艺加工的福鼎大白茶（贵州省贵阳市清镇某茶厂生产），分别命名为福鼎大白茶红茶、福鼎大白茶绿茶。二者经恒温箱50 ℃干燥至恒重。

1.2 实验方法

1.2.1 液相色谱条件

采用InertSustaiu C18 Column（4.6 mm×250 mm， 5 μm）色谱柱;用乙腈和0.1%磷酸水溶液作为流动相，体积比为20∶80，总流速1 mL·min-1，柱箱温度35 ℃，检测波长280 nm，进样量10 μL。

1.2.2 标准溶液的制备

单一标准品储备液的配制：分别准确称取EGC、C、EGCG、ECG标准品各0.800 0 g，分别溶解后转移至5 mL的容量瓶中，用甲醇定容，所得各标准品溶液的浓度为1 600 μg·mL-1。

混合标准品储备液的配制：分别准确称取EGC、C、EGCG、ECG标准品各0.800 0 g，混合溶解后转移至5 mL的容量瓶中，用甲醇定容，所得各标准品溶液的浓度为1 600 μg·mL-1。将混合标准品储备液用甲醇逐级稀释为20、40、80、100、200、800、1 600 μg·mL-1的混合标准溶液，并用0.22 μm的有机系微孔滤膜过滤，避光低温储存待测。

参考文献：

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（责任编辑：丁志祥）