去整合素金属蛋白酶8在食管鳞癌的表达及与病理特征的关系

王献，张灿斌，郑帅玉

（河南科技大学第一附属医院 胸外科，河南 洛阳 471000）

食管鳞癌是消化道第4 常见肿瘤，严重威胁人类健康。近年来以手术为主的综合治疗虽然取得很好疗效，但食管鳞癌患者5年生存率仍较低，其主要原因是食管鳞癌对周围组织极强的侵袭性及容易发生淋巴结转移[1-2]。因此，如何有效早期预测食管鳞癌预后，对于疾病诊疗具有极大意义。

去整合素金属蛋白酶家族成员去整合素金属蛋白酶8（A disintegrin and metalloproteinase 8, ADAM8）已被证实在乳腺癌、前列腺癌等多种癌症组织中高表达，且在肿瘤发生、发展中发挥关键作用，与病理分级、预后密切相关。在食管鳞癌ADAM表达谱研究中证实，ADAM8 在食管鳞癌中亦高表达[3-4]。但是，ADAM8 与食管鳞癌病理、预后的关系尚不明确，尤其是预测作用仍缺乏研究。因此，本研究拟探讨ADAM8 与食管鳞癌病理分级之间的关系及对预后的预测作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年5月—2016年5月河南科技大学第一附属医院因食管鳞癌行手术治疗的患者47 例。其中，男性37 例，女性10 例；年龄（63.1±12.4）岁；肿瘤直径0.8～7.8 cm，平均（4.3±1.9）cm；食管鳞癌组织学分级：Ⅰ级11 例，Ⅱ级24 例，Ⅲ级12 例；TNM 分期：Ⅰ期8 例，Ⅱ期12 例，Ⅲ期16 例，Ⅳ期11 例；发生淋巴结转移24 例。选择同期住院的正常食管黏膜47 例作为对照。患者及家属对研究内容知情，自愿参与并签署知情同意书，研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①结合患者术前资料，并经细胞学或病理组织学诊断为食管鳞癌[5]；②有可供检测肿瘤组织标本且不存在坏死。排除标准：①有接受放疗、化疗及生物细胞免疫治疗病史的患者；②合并严重心、肝、肾等其他器官功能障碍患者；③合并血液性、感染性、免疫性疾病或其他恶性肿瘤疾病的患者。统计分析患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤类别、TNM 分期、淋巴结转移等信息，并随访至2018年7月28日，无死亡及失访病例。细胞分化程度根据病理组织学，由2 位病理科医生判定。肿瘤分期符合2002年国际抗癌联盟第6 版TNM 分期标准[5]。

1.3 方法

所有病理标本均于术中取材，标本获得后立即置于4%中性甲醛溶液中固定，经石蜡包埋切片后，筛选肿瘤细胞成分＞80%的切片进行检测。

1.4 试剂与仪器

免疫组织化学环保脱蜡液（中国博士德生物科技有限公司）脱蜡，高温修复抗原，3%过氧化氢H2O210 min，10%山羊血清室温封闭1 h；Ki-67 抗体（美国Proteintech 公司）、ADAM8 多克隆兔抗（美国Proteintech 公司）4℃孵育过夜。用抗鼠/兔通用型免疫组织化学检测试剂盒（美国Proteintech 公司）检测Ki-67、ADAM8 抗体结合情况并显色。苏木精复染 2 min 后进行脱水处理，中性树脂封片。

1.5 结果判定

Ki-67 染色结果由2 位病理科医生根据食管癌细胞阳性率进行分级：＜50%评判为Ki-67 指数低；≥ 50%评判为Ki-67 指数高。ADAM8 染色结果由2 位病理科医生根据食管癌细胞阳性率进行分级：≤1%为（-），＞1%～25%为（+），＞25%～50%为（++），＞50%～75%为（+++），＞75%～100%为（++++）。

1.6 统计学方法

数据分析采用SPSS 17.0 统计软件，计数资料以例（%）表示，比较采用χ2检验，Kaplan-Meier 法绘制生存曲线，比较采用Long-rank χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组织中ADAM8 表达比较

47 例患者癌组织ADAM8 免疫组织化学染色分级为（-）7 例（14.89%），（+）9 例（19.15%），（++）8 例（17.02%），（+++）12 例（25.53%），（++++）11 例（23.40%）。将分级（-）和（+）的免疫组织化学结果归为ADAM8低表达，（++）～（++++）归为ADAM8 高表达（见图1）。食管鳞癌组织中ADAM8 高表达31 例（65.96%），低表达16 例（34.04%）；正常黏膜组织中，ADAM8 高表 达10 例（21.28%），低表达37 例（78.72%）。两者比较，差异有统计学意义（χ2=19.077，P=0.000），食管鳞癌组织中ADAM8 高表达比例＞正常组织黏膜。

2.2 ADAM8 表达与病理特征的关系

高分级肿瘤患者ADAM8 表达高于低分级肿瘤患者，Ⅲ、Ⅳ期患者ADAM8 表达高于Ⅰ、Ⅱ期患者，淋巴结转移患者ADAM8 表达高于无淋巴结转移患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

图1 癌组织中ADAM8 表达 （免疫组织化学染色×200）

2.3 ADAM8 表达与预后的关系

癌组织中ADAM8 高表达患者与ADAM8 低表达患者，术后2年生存率的比较，经Long-rank 生存分析，差异具有统计学意义（χ2=3.462，P=0.025），ADAM8低表达患者生存率高于ADAM8 高表达患者。见图2。

表1 ADAM8 表达水平与临床病理特征的关系 例（%）

图2 不同ADAM8 表达患者术后2年生存分析

3 讨论

食管鳞癌细胞高侵袭转移能力是其预后差、病死率高的重要原因之一。近年来，与食管癌侵袭、淋巴结转移相关的蛋白逐渐被发现，研究表明这类蛋白对预测患者预后，辅助病理分级诊断具有重要意义，因此，探讨与食管鳞癌病理分级并预测其预后的相关蛋白是近年研究热点[1-2]。ADAM8 是去整合素金属蛋白酶家族的一员，有膜型（ADAM8m）和分泌型（ADAM8s）2 种亚型，在肿瘤中的作用逐渐受到学者重视。研究表明，ADAM8 可作为恶性黑素瘤诊断标志物[6]。亦有学者在Ⅳ期神经母细胞瘤中观察到ADAM8 表达上调[7]。ADAM8 在多种恶性肿瘤中的作用已得到广泛研究，并已经证明可通过多种机制调控肿瘤侵袭转移[8-9]。但是关于ADAM8 在食管癌中的作用及机制研究却相对匮乏。本研究表明，ADAM8 表达越高，食管鳞癌分级程度越高、TNM 分期越高、发生淋巴结转移可能性越大、Ki-67指数越高，预后越差。与乳腺癌、前列腺癌、肝癌等研究结果一致。

ADAM8 与食管鳞癌病理特征相关的机制可能是，ADAM8 通过激活分解多种膜结合配体，如表皮生长因子、胰岛素样生长因子结合蛋白、Notch 配体δ样1 和胎盘亮氨酸氨肽酶等，降解细胞外基质，增加肿瘤细胞侵袭性[10-11]。本研究表明，在高分级，TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者，ADAM8 高表达比例更大，提示ADAM8 可能与食管鳞癌恶性程度及相关生物学行为存在关系。在发生淋巴结转移的患者中进一步证实，ADAM8 高表达患者，更可能发生淋巴结转移。由此推测，ADAM8 可能是参与食管鳞癌恶性转化和侵袭过程的重要分子。另外，在高Ki-67 指数患者中，ADAM8高表达比例更大，提示ADAM8 可能还影响食管鳞癌细胞增殖。但是，在不同肿瘤大小比较中，ADAM8 表达无差异，可能的解释是肿瘤大小受多因素影响，不仅仅与肿瘤的增殖能力相关，食管鳞癌部位、类型等亦可能影响就诊时肿瘤大小[12]。因此，ADAM8 影响食管鳞癌细胞增殖的作用仍有待进一步探讨。由此可推测，ADAM8 水平可能对判断食管癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移等具有一定参考价值。既往在胶质瘤、肝癌等研究中证实，ADAM8 可通过调控细胞骨架蛋白，调控癌细胞EMT，进而影响癌细胞侵袭、迁移、增殖[13]。但ADAM8 参与影响食管鳞癌病理特征的具体机制尚不明确，ADAM8 是否通过相同机制调控食管癌仍有待进一步探讨。

另外，本研究发现，ADAM8 表达与患者预后密切相关，生存期较短患者中，ADAM8 高表达比例更大，其可能的机制是ADAM8 参与调控食管癌细胞病理特征。提示术后ADAM8 检查结果可作为临床预测食管鳞癌患者预后与生存期重要指标，在临床中加以应用。

综上所述，食管鳞癌组织中ADAM8 表达上调，其表达水平与肿瘤分化程度、TNM 分期、淋巴结转移及 Ki-67 指数有关，并影响预后。通过检测ADAM8 表达对判断食管鳞癌患者病理特征与预后具有一定参考价值。