ADD1、HIF-1α蛋白在胃癌组织中的表达情况及与患者临床特征的关系

宋韬，吴煌福，周颖，何贵省

海南医学院第二附属医院1肿瘤外科，2超声医学科，海口 572200

胃癌是一种临床常见的恶性肿瘤，若病情持续进展，可严重影响患者的生活质量，增加其远期病死风险[1]。研究显示，合并幽门螺杆菌感染的患者，胃癌的发病风险或预后恶化风险明显上升[2]。评估胃癌患者的临床特征，可在指导胃癌的治疗及随访方面发挥作用。肿瘤相关蛋白可影响肿瘤细胞的生物学特性，调控胃黏膜上皮细胞的异常分裂，参与胃癌的进展过程。内收蛋白1（adducin 1，ADD1）是细胞膜骨架的成分，可通过提高肿瘤细胞骨架成分的合成和复制速度，促进肿瘤细胞的持续性DNA分裂，最终促进恶性肿瘤的发生发展[3]。缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）是一种炎性因子，可激活原癌基因，明显提高肿瘤细胞的扩增速度，降低肿瘤细胞的凋亡率[4]。本研究探讨了ADD1、HIF-1α的表达情况与胃癌发生发展的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年1月至2018年9月海南医学院第二附属医院收治的胃癌患者。纳入标准：①均符合《中国早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见》[5]；②年龄≤79岁；③均经病理检查确诊；④均未接受过放化疗和免疫治疗；⑤临床资料完整。排除标准：①合并免疫系统疾病和肝肾功能异常；②合并其他部位恶性肿瘤。依据纳入和排除标准，本研究共纳入80例胃癌患者，其中男46例，女34例；年龄为41～77岁，平均年龄为（58.5±10.0）岁。取80例胃癌患者的胃癌组织，同时获得其中40例胃癌患者的癌旁组织（距离肿瘤病灶边缘＞3 cm但＜5 cm内的胃黏膜组织）。

1.2 免疫组化染色方法

将80例胃癌组织标本和40例癌旁组织标本石蜡切片，二甲苯脱蜡水化，5%的双氧水常温孵育10 min，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）孵育5 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，5%的山羊血清抗体封闭10 min，不冲洗。滴加一抗（稀释浓度为1∶500），4℃冰箱孵育过夜，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，滴加生物素标记好的二抗（稀释浓度为1∶1000），37℃孵育30 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，滴加辣根过氧化物酶标记的工作液，37℃孵育10 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片，镜下观察。

1.3 染色结果判定

ADD1蛋白主要定位于细胞质，以细胞质呈黄色、棕黄色、褐色颗粒判定为细胞阳性；HIF-1α蛋白主要定位于细胞核，以细胞核呈黄色、棕黄色、褐色颗粒判定为细胞阳性。依据着色强度进行评分：无着色计为0分，浅黄色染色计为1分，棕黄色染色计为2分，褐色或黑色染色计为3分；依据阳性细胞所占比例进行评分：阳性细胞所占比例≤10%计为1分，阳性细胞所占比例为11%～50%计为2分，阳性细胞所占比例为51%～75%计为3分，阳性细胞所占比例＞75%计为4分。将着色强度和阳性细胞所占比例评分相乘，总分＜3分为阴性表达，≥3分为阳性表达。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0软件对所有数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；以P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ADD1、HIF-1α蛋白表达情况的比较

胃癌组织中ADD1蛋白的阳性表达率为67.50%（54/80），明显高于癌旁组织的27.50%（11/40），差异有统计学意义（χ2=12.823，P＜0.01）；胃癌组织中HIF-1α蛋白的阳性表达率为62.50%（50/80），明显高于癌旁组织的32.50%（13/40），差异有统计学意义（χ2=8.455，P＜0.01）。（图1）

图1 胃癌组织和癌旁组织中ADD1、HIF-1α蛋白表达情况（免疫组化染色，×400）

2.2 不同临床特征胃癌患者胃癌组织中ADD1、HIF-1α蛋白的阳性表达情况

不同TNM分期、淋巴结转移情况胃癌患者胃癌组织中ADD1蛋白的阳性表达率比较，差异均有统计学意义（χ2=6.689、4.549，P＜0.05）；不同分化程度、浆膜浸润情况、肿瘤最大径胃癌患者胃癌组织中ADD1蛋白的阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。不同TNM分期、肿瘤最大径、淋巴结转移情况胃癌患者胃癌组织中HIF-1α蛋白的阳性表达率比较，差异均有统计学意义（χ2=5.692、6.745、5.669，P＜0.05）；不同分化程度、浆膜浸润情况胃癌患者胃癌组织中HIF-1α蛋白的阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表1）

表1 不同临床特征胃癌患者胃癌组织中ADD1、HIF-1α蛋白的阳性表达情况（n=80）

3 讨论

不良的饮食习惯、慢性萎缩性胃黏膜上皮细胞病变等，均可增加上皮细胞异常分裂的发生风险，促进胃癌的发生[6]。年龄＞55岁且长期吸烟或过度饮酒的群体，胃癌的检出率或发病率均有一定程度的上升[7-8]。研究显示，近年来，胃癌患者的总生存情况或无进展生存情况均无明显改善，其远期致残率或多器官功能衰竭的发生风险仍较高[9]。

ADD1是细胞骨架结构蛋白，可提高肿瘤细胞的浸润和黏附能力，维持肿瘤细胞的生物学作用。ADD1可激活肿瘤细胞膜上的不同受体，不同程度地激活肿瘤细胞膜内侧不同信号通路，促进恶性肿瘤的发生。HIF-1α是缺氧诱导因子，可激活癌基因的转录过程，明显提高肿瘤基因的分裂风险，激活肿瘤细胞转录上游的启动子。研究显示，HIF-1α能够影响肿瘤细胞的细胞周期，导致细胞周期紊乱[10]。部分研究认为，胃癌患者的胃癌组织中HIF-1α的阳性表达率明显上升[11-12]，但关于ADD1的研究不足。

本研究结果显示，胃癌组织中ADD1、HIF-1α蛋白的阳性表达率，均明显高于癌旁组织，差异均有统计学意义（P＜0.01），表明ADD1、HIF-1α可能参与胃癌的发生发展过程。ADD1蛋白的表达水平升高，能够通过激活胃黏膜上皮细胞内蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又称AKT）或丝裂原激活蛋白激酶（mitogen activation protein kinase，MAPK）等信号通路，促进肿瘤细胞纺锤体等细胞结构的异常分裂，从而促进胃癌的发生。HIF-1α的表达水平升高，可通过诱导缺氧的肿瘤微环境，提高缺氧环境中肿瘤干细胞的活性，从而增加胃癌的发生风险。李春辉等[13]研究结果显示，ADD1蛋白在胃癌患者中的阳性表达率可上升4～5倍，同时，ADD1的表达具有明显的病情依赖性，患者的肿瘤恶病质表现越为明显，ADD1蛋白的表达水平越高。ADD1、HIF-1α主要定位于肿瘤细胞质或细胞核中，在胃癌细胞异型性较为明显的区域，ADD1、HIF-1α的染色强度可进一步上升。此外，本研究结果显示，TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织中ADD1蛋白的阳性表达率较高，表明ADD1的表达水平升高可明显影响胃癌的发生发展过程。ADD1蛋白可促进肿瘤细胞的上皮-间充质转化，提高肿瘤细胞的浸润和转移风险。TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤最大径≥5.0 cm、有淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织中HIF-1α蛋白的阳性表达率较高，表明HIF-1α蛋白可影响胃癌的发生发展过程，这主要是因为HIF-1α蛋白可影响肿瘤细胞的突破基底膜的能力，从而促进胃癌的进展[14-15]。

综上所述，胃癌组织中，ADD1、HIF-1α蛋白的阳性表达率均较高，ADD1蛋白的表达可能与胃癌患者的TNM分期和淋巴结转移情况有关，HIF-1α蛋白的表达可能与胃癌患者的TNM分期、肿瘤最大径和淋巴结转移情况有关。