sMICA、CYFRA21-1、MMP9在食管鳞状细胞癌中的表达及与化疗疗效的关系

2019-11-08 01:17王丽华郭君兰胡彦伟焦智民
癌症进展 2019年19期
关键词:鳞状食管阳性

王丽华,郭君兰,胡彦伟,焦智民

安阳市肿瘤医院肿瘤内科,河南 安阳 455000

近年来,随着人们生活习惯的改变和生活节奏的加快,食管癌的发病率呈不断增长的趋势。食管癌主要包括鳞状细胞癌、腺癌两种病理类型,其中以鳞状细胞癌更为多见,预后差。早期食管鳞状细胞癌一般经手术治疗可控制其病情进展,而实际临床就诊的食管癌患者以中晚期居多,往往无法实施手术,且部分患者不愿接受手术治疗,需采用化疗干预[1]。肿瘤标志物对于评估肿瘤患者的病情、治疗效果及预测预后十分重要。近年来,陆续有报道指出,血清指标中,可溶型主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关蛋白A(soluble major histocompatibility complex classⅠchain-related protein A,sMICA)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(cytokeratin 19 fragment antigen 21-1,CYFRA21-1)及基质金属蛋白酶 9(matrix metalloprotein 9,MMP9)是重要的肿瘤标志性分子,与肿瘤进展或恶化密切相关[2-5],但其在食管鳞状细胞癌中的表达情况及临床意义尚缺乏报道。为此,本研究以95例食管鳞状细胞癌组织为对象,分析食管鳞状细胞癌中sMICA、CYFRA21-1、MMP9的表达情况及与化疗疗效的关系,现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2016年1月至2017年1月安阳市肿瘤医院收治的95例食管鳞状细胞癌患者,取其食管鳞状细胞癌组织。纳入标准:①通过病理检查确诊为食管鳞状细胞癌;②未接受过胸部放疗、化疗及其他抗肿瘤治疗;③因错过手术时机、无法耐受手术或不愿接受手术治疗,均接受化疗干预。排除标准:①预计生存期<3个月;②有其他消化系统肿瘤病史;③合并其他部位原发性肿瘤;④合并冠状动脉粥样硬化性心脏病、糖尿病、肝硬化、慢性阻塞性肺疾病等慢性疾病。95例食管鳞状细胞癌患者中,男57例,女38例;年龄26~75岁,中位年龄为53岁;病灶部位:食管上段51例,食管中段44例;美国癌症联合委员会(American Joint Committee on Cancer,AJCC)食管癌 TNM 分期[6]:Ⅰ期 19例,Ⅱ期42例,Ⅲ期34例;分化程度:中低分化45例,高分化50例。本研究经医院伦理委员会批准,所有患者均了解本次研究的目的和意义并签署知情同意书。

1.2 试剂和仪器

兔抗人sMICA多克隆抗体、兔抗人CYFRA21-1多克隆抗体、兔抗人MMP9多克隆抗体及二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)显色试剂盒、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(streptavidin-perosidase,SP)试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司,PAS染色液由安阳市肿瘤医院实验室配置。恒温干燥箱购自上海跃进医疗器械厂,医学显微镜及其配套图像采集系统购自日本OLYMPUS公司。

1.3 sMICA、CYFRA21-1、MMP9检测及判定标准

均通过活检取得全部患者的食管鳞状细胞癌组织标本,经过甲醛固定、常规石蜡包埋,制作成4 μm厚的连续切片,采用免疫组化SP法检测,均采取磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)代替一抗作为阴性对照;操作严格按照说明进行,每批染色均以sMICA、CYFRA21-1、MMP9已知阳性切片作为阳性对照。结果由两位高资历病理科医师采用双盲法观察每张切片,sMICA、CYFRA21-1、MMP9蛋白阳性表达细胞表现为细胞质、细胞膜出现区别于背景色的棕黄色细颗粒。400倍显微镜下取典型食管鳞状细胞癌区10个视野观察,根据阳性细胞的染色强度和阳性细胞所占百分比进行评分。阳性细胞染色强度:无着色为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。阳性细胞所占百分比:显微镜下观察10个高倍视野(×400),每个视野计数100个细胞,取10个视野的百分比平均数,<5%为0分,≥5%且<25%为1分,≥25%且<50%为2分,≥50%且<75%为3分,≥75%为4分。染色强度评分与阳性细胞所占百分比评分相乘,结果以0~4分为阴性表达,5~12分为阳性表达。

1.4 疗效评价标准

所有患者均接受化疗,并保持密切随访,随访期间行肝肾功能检查及胸部计算机断层扫描(CT)复查。化疗结束后4周参考实体瘤疗效评价标准1.1版[7]评价近期疗效:完全缓解(CR),食管鳞状细胞癌病灶消失且维持至少4周;部分缓解(PR),食管鳞状细胞癌病灶长径总和较前缩小≥30%,且维持至少4周;疾病进展(PD),食管鳞状细胞癌病灶长径总和较前增加≥20%或出现新病灶;病情稳定(SD),介于PR与PD之间;总有效率(overall response rate,ORR)=(CR+PR)例数/总例数×100%。

1.5 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析,计数资料以例数及率(%)表示,组间比较采用χ2检验;等级资料的比较采用秩和检验;疗效的影响因素分析采用多元Cox回归分析;以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 sMICA、CYFRA21-1、MMP9的表达情况

95例食管鳞状细胞癌组织中,59例食管鳞状细胞癌组织中sMICA呈阳性表达,阳性表达率为62.11%,表现为淡黄色至深棕色颗粒,定位于细胞质;62例食管鳞状细胞癌组织中CYFRA21-1呈阳性表达,阳性表达率为65.26%,表现为淡黄色至深棕色颗粒,定位于细胞质;75例MMP9呈阳性表达,阳性表达率为78.95%,表现为淡黄色至棕褐色颗粒,定位于细胞质。(图1)

2.2 不同临床特征食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织中sMICA、CYFRA21-1、MMP9表达情况的比较

图1 食管鳞状细胞癌细胞中sMICA、CYFRA21-1、MMP9阳性、阴性表达情况(免疫组化染色,×400)

不同TNM分期的食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织中sMICA、CYFRA21-1、MMP9阳性表达率比较,差异均有统计学意义(χ2=26.904、18.767、10.167,P<0.05);不同分化程度的食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织中sMICA、CYFRA21-1、MMP9阳性表达率比较,差异均有统计学意义(χ2=11.634、3.995、10.646,P<0.05)。(表1)

表1 不同临床特征食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织中sMICA、CYFRA21-1、MMP9的表达情况(n=95)

2.3 sMICA、CYFRA21-1、MMP9表达情况与化疗疗效的关系

95例食管鳞状细胞癌患者化疗后,CR 25例,PR 31例,SD 21例,PD 18例,ORR为58.95%(56/95)。sMICA、CYFRA21-1、MMP9阴性表达的患者疗效均优于阳性表达的患者,差异均有统计学意义(Z=2.522、2.752、2.746,P<0.05)。(表2)

表2 不同sMICA、CYFRA21-1、MMP9表达情况的食管鳞状细胞癌患者的疗效情况

2.4 食管鳞状细胞癌患者化疗疗效影响因素的多元Cox 回归分析

以食管鳞状细胞癌患者化疗疗效为因变量,以TNM分期、分化程度及sMICA、CYFRA21-1、MMP9表达为自变量(赋值情况:Ⅰ期=0,Ⅱ期=1,Ⅲ期=2;高分化=0,中低分化=1;sMICA阴性=0,阳性=1;CYFRA21-1阴性=0,阳性=1;MMP9阴性=0,阳性=1),进行多元Cox回归分析,结果显示,TNM分期、分化程度及sMICA、CYFRA21-1、MMP9表达均是食管鳞状细胞癌患者化疗疗效的独立影响因素(P<0.01)。(表3)

表3 食管鳞状细胞癌患者化疗疗效影响因素的多元Cox回归分析

3 讨论

肿瘤细胞凋亡后细胞表面的MICA脱落到外周血里可形成sMICA,研究报道,在肺癌、乳腺癌等患者中sMICA水平较健康者及相应良性病变者高[8-9]。此外,从肿瘤免疫学角度分析,sMICA可降低肿瘤表面MICA的表达,诱导T细胞与自然杀伤细胞表面的活化受体发生内化降解,从而对自然杀伤细胞的杀伤活性产生抑制作用,引起肿瘤逃逸[10]。CYFRA21-1是角蛋白CK19的片段(属于酸性蛋白),通常分布在层状或鳞状上皮等正常组织表面,而当细胞发生癌变时,CYFRA21-1在恶性上皮细胞中可激活蛋白酶,促进细胞的降解,继而可出现在上皮肿瘤细胞的细胞质中,并可大量释放入血。CYFRA21-1对食管鳞状细胞癌的诊断灵敏度较高,如樊卫等[11]的研究证实CYFRA21-1与其他肿瘤标志物联合检测能提高食管鳞状细胞癌诊断的灵敏度(>90%)和准确度(>85%)。作为MMP家族中分子量最大的酶,MMP9可作用于细胞外基质而使细胞外蛋白水解,水解片段可沉积于肿瘤微环境中,促进肿瘤细胞侵袭。研究显示,MMP9还具有分解层粘连蛋白、纤维连接蛋白、弹性蛋白等多种底物的作用,继而可破坏机体防御肿瘤浸润的天然防线[12]。MMP9在包括食管癌在内的许多上皮来源的肿瘤或间质肿瘤中过表达。张鲁川等[13]研究指出,低分化及晚期食管鳞状细胞癌易形成血管生成拟态,而MMP9对其有促进作用。另有学者认为,在肿瘤侵袭转移过程中,MMP可通过某种作用机制促使sMICA介导肿瘤免疫逃逸的发生[14]。本研究选取通过病理确诊的95例食管鳞状细胞癌患者,通过手术取得组织标本,经甲醛固定、常规石蜡包埋、切片,采用免疫组化SP法检测sMICA、CYFRA21-1、MMP9表达情况。结果显示,食管鳞状细胞癌组织中sMICA阳性表达59例(62.11%),CYFRA21-1阳 性 表 达 62例(65.26%),MMP9阳性表达75例(78.95%);且不同TNM分期及分化程度的食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织中sMICA、CYFRA21-1、MMP9阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);表明肿瘤标志性分子sMICA、CYFRA21-1、MMP9在食管鳞状细胞癌中阳性表达率高,可能参与了肿瘤的进展。

目前,关于上述3种肿瘤标志物与食管鳞状细胞癌疗效的关系尚无明确报道,仅梁敏等[15]的报道认为全腔镜食管癌根治术联合紫杉醇类+铂类(TP)化疗方案有助于降低患者血清sMICA、CYFRA21-1、MMP9水平,认为其可能与临床疗效及预后密切相关。本研究95例患者化疗后ORR达58.95%,进一步统计发现sMICA、CYFRA21-1、MMP9阴性表达的患者疗效优于阳性表达的患者,且多元Cox回归分析结果提示,TNM分期、分化程度、sMICA、CYFRA21-1、MMP9表达均是食管鳞状细胞癌患者化疗疗效的独立影响因素,提示肿瘤标志性分子sMICA、CYFRA21-1、MMP9在食管鳞状细胞癌中的高阳性表达率可能影响化疗疗效,可能与sMICA、CYFRA21-1、MMP9直接或间接影响食管鳞状细胞癌细胞的增殖与凋亡,进而参与疾病进展及影响化疗敏感性有关,但具体影响机制仍需进一步探讨。此外,由于目前本研究所选病例大部分仍在随访中,sMICA、CYFRA21-1、MMP9对患者生存情况的影响还需后期补充论证。

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