蜂胶滴丸对小鼠的缺氧耐受力及其毒性的实验研究

●李海燕 李驰坤 张明天 于秀华（长春中医药大学附属医院 吉林 长春 130021）

缺氧是一种病理现象，通常由机体组织氧供应不足或者无法有效利用氧所导致。当人体组织得不到充足的氧或不能充分利用氧时，细胞、组织、器官的代谢机能甚至形态结构都可能发生异常变化，这一病理过程就称为缺氧[1]。蜂胶是工蜂从植物的新生枝条、叶芽或树皮等组织采集到树脂状分泌物后，混入其上颚腺等腺体分泌物和蜂蜡等加工而成的芳香胶状物[2]。其主要包括5 大类成分：树脂、树胶约占50%～55%，蜂胶约占30%，挥发油约占10%，花粉约占5%，各种有机酸和矿物质约占5%[3]。蜂胶的主要成分是黄酮类化合物，能够提高抗氧化酶的活性[4]，研究表明，蜂胶含有大量的生物活性物质和微量元素，因产地不同，蜜蜂种类不同，其生物活性物质亦不同[5]。本实验探讨蜂胶滴丸对小鼠提高缺氧耐受力的作用以及毒性试验的研究，为之后评价蜂胶滴丸对人体提高缺氧耐受力和毒性提供实验依据。

1 材料

1.1 受试物

蜂胶滴丸，本品由蜂胶、聚乙二醇6000 为原料制成的保健食品。规格：20mg/粒（每粒含蜂胶10mg）。样品形态：圆形。食用方法及食用量：口服，4 粒/次，每日1 次。保质期：24 个月，贮存方法：常温。

1.2 试剂试药

羧甲基纤维素钠（CMC-Na）：沈阳化学试剂厂，批号：201511011，规格：250g。

1.3 实验动物及饲养管理要求

昆明种雌性和雄性小鼠，体重18～22g，SPF级。质量合格证：No.211002300022072。实验动物提供单位：辽宁长生生物技术有限公司。实验动物生产许可证号：SCXK（辽）2017-0001。实验动物使用许可证号：SYXK（辽）2017-0001。动物饲料名称：SPF级维持鼠料。饲料来源：沈阳市于洪区前民动物实验饲料厂。饲料生产许可证号：SCXK（辽）2017-0002。实验动物饮用水：纯化水。供水方法：小鼠由饮水瓶自由摄取。动物室环境条件：温度为20～25℃，相对湿度为40%～70%。

1.4 仪器

秒表型号：DM1-001，上海银泽仪器设备有限公司；电子天平型号：CP124S，北京赛多利斯仪器系统有限公司；电子天平型号：PL1002E型，梅特勒托利多仪器（上海）有限公司生产。

2 急性脑缺血性缺氧实验

2.1 试剂设置

分别以人体拟推荐日食用剂量的30、20、10 倍，设为高、中、低剂量组，即40.0mg/kg BW、26.7mg/kg BW、13.3mg/kg BW；对照组给予相同体积的0.5%的CMC-Na，经口给予受试样品体积为10.0mL/kg BW。

2.2 受试物配制

设高、中、低剂量组，称取受试物适量，加入0.5%的CMC-Na，配制成浓度分别为4.00mg/mL、2.67mg/mL、1.33mg/mL的溶液。

对照组：0.5%的CMC-Na。

2.3 试验方法

小鼠在实验动物房环境中适应3d，取雄性小鼠40 只，按体重随机分为4 组，即高、中、低3 个剂量组，1 个阴性对照组，每组10 只。高、中、低剂量组分别给予受试物，剂量分别为 40.0mg/kg BW、26.7mg/kg BW和13.3mg/kg BW，阴性对照组给予溶剂，给予方式均为灌胃，连续给药30d，每周称重1 次，见表1。于末次灌胃后1h，将小鼠自颈部逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘息停止时间，见表2。

3 急性毒性经口MTD（最大耐受剂量）试验

3.1 剂量设置及受试物配制

称取该样品20.00g溶于20.0mL0.5 的CMC-Na的水溶液中，则该样品比重为1.00g/mL，取原液给小鼠灌胃1 次，灌胃量为0.2mL/10g BW，折合剂量20.0g/kg BW。

3.2 试验方法

将小鼠禁食 16h（当日 16：30 至次日 8：30），不限制饮水，按体重要求选用雌、雄小鼠各10 只，称重、染号，采用最大耐受剂量法，经口灌胃给予受试物。

灌胃后观察14d，主要观察小鼠的中枢神经系统及躯体运动有无改变姿势、叫声异常、运动失调等；自主神经有无瞳孔放大或缩小、流涎、流泪等；呼吸系统有无流鼻涕、潮式呼吸等；胃肠系统有无气胀、腹泻或便秘等，并记录出现中毒症状的时间。在第14 天称量体重，计算增重见表3。如果小鼠有死亡，记录死亡数、死亡时间，对全部小鼠做大体解剖。

4 结果

4.1 急性脑缺血性缺氧实验

见表1 和表2。

表1 蜂胶滴丸对急性脑缺血性缺氧实验小鼠体重的影响

结果显示，与阴性对照组比较，受试物各剂量组实验小鼠体重均无显著差异，说明蜂胶滴丸对小鼠的体重无明显影响。

表2 蜂胶滴丸对小鼠急性脑缺血性缺氧实验结果

结果显示，与阴性对照组比较，受试物高、中剂量组实验小鼠断头后至张口喘息停止时间均具有显著差异。

4.2 急性毒性试验

见表3。

表3 蜂蛟滴丸对小鼠急性毒性试验结果

结果显示：试验期间各组小鼠未见中毒症状，死亡数为零；雌、雄性小鼠MTD＞20.0g/kgBW。试验结论：根据急性毒性半数致死剂量分级，该蜂蛟滴丸样品属无毒级。

5 讨论

蜂胶具有广泛的生理和药理作用。本研究选用急性脑缺血性缺氧状态小鼠模型，通过观察各组小鼠在缺氧状态下的存活时间，探讨由蜂胶研制的蜂胶滴丸抗缺氧作用。实验结果显示，蜂胶滴丸能使急性脑缺血小鼠的存活时间显著延长，可见蜂胶滴丸能提高小鼠的耐缺氧能力。经急性毒性实验结果表明，蜂胶滴丸安全无毒，急性经口MTD＞20.0g/kg BW，属实际无毒类，本产品无致突变作用。本实验结果为蜂胶滴丸作为保健食品开发利用提供科学依据。