紫外分光光度法测定复方痛风颗粒剂中总酚的含量

1.广西壮族自治区柳州市中医医院，广西 柳州 545001；2.贵州中医药大学，贵州 贵阳 550002

复方痛风颗粒剂是广西柳州市中医院通过临床实践研制出的纯中药制剂，由白术、紫苏梗、薏苡仁、车前子、枇杷叶等5味中药组成。临床观察证明了能促进尿酸排泄，广泛用于痛风的辅助治疗。方中白术健脾燥湿，健运中焦，散精于肺为君；紫苏梗宽胸利膈，解鱼蟹毒，增强中焦运化为臣；薏苡仁、车前子利湿化浊，助尿酸从膀胱排除为佐；枇杷叶肃降肺气，让精气得于正常运行为使；诸药合用共奏健脾肃肺、利湿化浊之功。方中药材紫苏梗、枇杷叶含有大量酚酸类化合物，且具有抗氧化、抗血小板活性、抗动脉粥样硬化、抗菌抗炎、保肝和促进尿酸排泄作用等[1-2]。为了更好的控制其质量，本文采用紫外分光光度法[3-7]对复方痛风颗粒剂中的总酚进行含量测定，为更深入研究复方痛风颗粒剂提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 TU-1901紫外可见分光光度仪(北京普析通用仪器有限公司)；BSA124S分析天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；KQ-300DB型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)；KDM可调控温电热套(山东鄄城科源仪器设备厂)；HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)；DH64型电热恒温干燥箱(上海市跃进医疗器械一厂)；LK-1000A型摇摆式高速中药粉碎机(浙江温岭市创力药材器械厂)。

1.2 试药 没食子酸对照品(批号：110831-201605，中国食品药品检定研究院)；复方痛风颗粒剂(批号：20161013、20161014、20161015，柳州市中医医院药学部自制)；无水碳酸钠(分析纯，批号：20161024，秦皇岛市化学试剂厂)， 钨酸钠(分析纯，批号：20130710，天津市大茂化学试剂厂)， 钼酸钠(分析纯，批号：20150117，天津市化学试剂四厂)，硫酸锂(分析纯，批号：20130825，重庆东方试剂厂)；乙腈(色谱纯，批号：20180912，成都科龙试剂有限公司)；甲醇(色谱纯，批号：20180820，成都科龙试剂有限公司)；磷酸(分析纯，批号：20160913，北京化工厂)；水为娃哈哈纯净水。

2 方法和结果

2.1 磷钼钨酸试液的制备 取钨酸钠100 g，钼酸钠25 g，加水700 mL使溶解，加盐酸100 mL、磷酸50 mL，加热回流10 h，放冷后现加硫酸锂150 g，水50 mL和溴0.2 mL，煮沸除去残留的溴(约15 min)，冷却，加水稀释至1000 mL，滤过，即得。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品25.2 mg，置25 mL的棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取5 mL，置100 mL的棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。(每mL中含没食子酸0.0504 mg)

2.3 供试品溶液的制备 精密称取样品复方痛风颗粒剂约1 g，置100 mL棕色量瓶中，加水适量，放置30 min，振摇，超声处理30 min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 检测波长的确定 吸取一定量的没食子酸对照品溶液在280～800 nm波长范围内扫描。结果表明，没食子酸对照品和供试品的最大吸收峰位一致，均在760 nm波长处有最大吸收，故本试验选用760 nm作为检测波长。

2.5 线性关系考察 精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置25 mL的棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1 mL，再分别加水11.5、11、10、9.0、8、7 mL，用29% 的碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30 min(以相应的试剂为空白)，照紫外—可见分光光度法在760 nm的波长处测定吸光度(A)，以溶液浓度(C)(μg)对吸光度(A)进行线形回归，得线形回归方程：C=270.872A-8.286(r=0.9996)，线形范围：25.1～200.8 μg 时线性关系良好。

2.6 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液(浓度50.2 μg/mL)2 mL，置25 mL棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1 mL”起，加水9 mL，重复测定吸光度6次(以相应的试剂操作为空白)。结果RSD=0.20%(n=6)，表明精密度良好。

2.7 重复性试验 精密称取样品复方痛风颗粒剂粉末(批号：20161013)约1 g，平行6份，加水适量，放置30 min，振摇，超声处理30 min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，即得。按“2.5”项下方法测定吸光度A，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)。结果平均含量为1.15%，RSD=0.65% (n=6)，表明方法重复性良好。

2.8 稳定性试验 精密吸取同一重复性试验的供试品(批号20161013)溶液，分别在不同时间(0、1、2、4 h)测定，考察供试品溶液的稳定性，结果平均吸光度为0.442，RSD=0.29%，表明样品总酚测定在4 h内基本保持稳定。

2.9 回收率试验 分别精密称取上面重复性试验复方痛风颗粒样品(样品中总多酚含量1.15%)9份各500 mg，精密加入其样品总多酚含量的75%、100%、125%的没食子酸对照品溶液(精密称取没食子酸对照品50.1 mg至50 mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度1.002 mg/mL)，加水适量，放置30 min，振摇，超声处理30 min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，即得。测定吸光度(A)，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)，计算加样回收率。由表1可知，平均回收率为101.59%，RSD为0.82%(n=9)，回收率良好。

表1 总多酚回收率试验结果 (n=9)

2.10 样品的含量测定 精密吸取3批复方痛风颗粒剂约1 g，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.5”项下方法进行测定，用外标法计算复方痛风颗粒剂总多酚含量(以没食子酸计)。结果见表2。

表2 样品含量测定结果 (n=3)

3 讨论

复方痛风颗粒剂是由白术、紫苏梗、薏苡仁、车前子、枇杷叶5味中药组成，通过多酚检测发现总多酚含量较高，可作为复方检测指标，且方中紫苏梗、枇杷叶中均含有一定量的多酚类化合物，具有抗氧化、抗血小板活性、抗动脉粥样硬化、抗菌抗炎、保肝和促进尿酸排泄作用等[1～2]。目前对复方痛风颗粒剂中总酚酸的提取和含量测定无相关报道，本研究建立了测定复方痛风颗粒剂中总酚酸含量的紫外分光光度法，为提高其质量控制标准提供参考。