美味牛肝菌栽培种培养成功初报

李立峰 高 伟 夏兴宏 于 艳 费 滕

(辽宁省蚕业科学研究所，辽宁凤城 118100)

柞园内林下经济建设是柞园生态建设的一个重要内容，也是未来柞园建设和发展的方向。近些年，我们发现柞园里有非常珍贵的野生真菌，这些野生真菌与柞树根系共生形成菌根后，不仅能够促进柞树生长发育，增强柞树抗病、抗逆性，而且其子实体还有许多药用和食用价值。辽东山区柞树菌根真菌有36种,而美味牛肝菌就是药食同用的一种野生真菌。美味牛肝菌(BoletusedulisBull.exFr.)，牛肝菌科，牛肝菌属，俗称大脚菇，粗腿蘑，大腿蘑，牛腿蘑等[1]。资料和实践表明，这种真菌与柞树根系共生形成菌根后，能促进作树生长[2]，其子实体是餐桌上受青睐的菜肴之一，也是我省出口创汇的野生食用菌主要种类，有开发价值。

目前，对美味牛肝菌的一级斜面菌种、二级液体菌种的分离、培养，不少人已获得成功；而对三级栽培种(以下简称栽培种)的制备、未见报导。研究者普遍认为该真菌是难培养的菌种之一，有人试验其栽培种三个月后菌落呈愈伤组织状态，仅有少数绒毛出现。本试验参考其它共生菌、腐生菌栽培种培养基用料，抓住柞树菌根真菌，菌丝生长的主要环节，从编号JMF培养基的用料和营养液不同pH值着手，经过多次试验，终于使该菌栽培种菌丝在30～50 d内长满全袋。现将培养情况初报如下。

1 材料与方法

1.1 材料

美味牛肝菌二级液体菌种，JMF培养基，PDMN营养液，丙稀袋(规格为13 cm×17 cm), 精密试纸等。

1.2 方法

1)配制不同pH值JMF培养基：将PDMN营养液的pH值分别调至4.5,5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0，并分别与JMF培养基搅拌、加水，以手握料见滴水为宜，然后分别装入丙稀袋内扎口，标记好[3-4]。

2)高压灭菌：将装好JMF培养基的丙稀袋，用高压灭菌锅(压力1～1.5 kg/cm2)灭菌120 min，待灭菌锅压力自然降至零时，再启盖、取袋，可防止丙稀袋破裂。

3)接种培养：将灭菌的培养基袋放进接种箱内，用高锰酸钾、甲醛溶液再消毒60 min，袋内培养基温度降到30 ℃以下时，可在酒精灯的火焰周围接种[5]。具体操作是：先将装培养基的丙稀袋口打开，在培养基的中心扎10 cm左右深的圆孔，后将二级液体菌种瓶塞在火焰上方迅速打开，将液体菌种0.5～1.0 mL(或小块)放进培养基内，迅速扎口。为了防止恒温培养时感染杂菌，可在丙稀袋口处扎一层牛皮纸。

4)恒温培养：将接好种的JMF培养基丙稀袋，放置于25±2 ℃的遮光恒温室内发菌。在恒温培养中，每天观察、记载菌丝体生长情况，及时处理被杂菌感染的菌种袋[6]。

2 结果

经过多次试验，JMF培养基营养液不同pH值的8个区，接种后菌丝体生长情况见表1。

表1 营养液不同pH值对美味牛肝菌栽培菌丝生长影响

注:A表示接种平面上的菌丝生长状态，B表示培养料中的菌丝整体生长状态。A0表示菌丝开始扩展；A1/2表示菌丝长满平面1/2；A1表示菌丝长满平面；B1/5表示菌丝涨至全袋1/5；B1/4表示菌丝长满全袋1/4；B1/3表示菌丝长满全袋1/3；B1/2表示菌丝长满全袋1/2；B2/3表示菌丝长满全袋2/3；B1表示菌丝长满全袋。

由表1可见，不同pH的JMF培养基营养液上美味牛肝菌的菌丝都能生长。接种后1～5 d菌丝开始扩展,3～10 d菌丝长满平面,10～20d菌丝长至全袋的1/5～1/2，20～30 d菌丝长至全袋的1/2～2/3，30～50 d菌丝长满全袋。

3 讨 论

3.1 JMF培养基营养液pH道为6.0～6.5的试验区，在30 d内菌丝率先长满全袋；pH值7.0～7.5试验区，有2/3在40 d内菌丝长满全袋；其余试验区的菌丝在50 d内也都长满全袋。

3.2 在试验中，如有杂菌感染现象，是培养料中有干块、恒温室有杂菌及丙稀袋破碎的缘故，为此，拌料时要均匀、剔除硬块，在丙稀袋口处扎一层牛皮纸，防止杂菌感染，并且及时淘汰破碎的丙稀袋。

3.3 恒温室的温度高低；培养料中水份的多少；袋内装料的实松与通气好坏等，均会影响菌丝的正常生长繁殖。

4 结 语

柞园是柞蚕业赖以生存和发展的物质基础，要实现柞蚕业可持续发展，就要保护、建设好柞园，实现生态绿色发展。我们把培养成功的美味牛肝菌等菌种适时回接到柞树幼苗上，培育成菌根化柞苗，栽植到柞园里，可以有效增加柞园真菌子实体的发生量，柞苗成活率、生长量和生产力将会显著提高。利用该项技术，不仅可以应用于柞园生态建设，还可以应用于荒山、荒坡造林以及疏林地改造等林业生态建设，可有效提高辽宁乃至北方柞蚕区柞园的生物量和生产力，对退化柞园生态修复、改善山区生态环境、实现柞蚕业可持续发展起到积极作用。