两种试剂在CA-7000 血凝仪上的应用评价

李家明 杨雯翔 杨淑君 余加聪

作者单位：617000 四川攀枝花，攀钢集团总医院检验科

血浆凝血酶原时间（prothrombin time，PT）、活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）、血浆纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）及血浆凝血酶时间（thrombin time，TT）是临床用于诊断凝血系统异常疾病的检测指标，不仅可用于出凝血异常疾病的筛选和诊断，也可用于止血剂和抗凝药物的疗效监测［1］。目前市面上的血凝试剂较多，检测方法多样，进口试剂往往价格昂贵，国产试剂价格相对便宜。本实验室对比分析使用西门子的SIEMENS 试剂和上海太阳试剂在CA-7000 血凝仪上检测患者血液样本的相关指标，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 样本采集 按WS/T 359-2011 标准［2］，用真空管采集静脉血样本（枸橼酸钠109 mmol/L，1：9 抗凝），止血带使用时间≤60 s，及时混匀，1 500g离心15 min 取血浆，在无溶血、黄疸、脂血的患者样本中，选择高、中、低浓度各25 份样本供检测。

1.2 仪器与试剂 Sysmex CA-7000 全自动血凝仪。西门子SIEMENS 试剂（A 试剂），其中PT 试剂（批号546949，参考范围9.8～12.1 s）、APTT 试剂（批号557221，参考范围22～33 s）、FIB 试剂（批号547281，参考范围1.8～3.5 g/L）、TT 试剂（批号556825，参考范围14～21 s），FIB 校准品定标（批号5032488），正常值质控品（Dade Ci-Trol 1，批号548035）、异常值质控品（Dade Ci-Trol 2，批号：548261），配套清洗剂。上海太阳生物技术有限公司生产的血凝试剂（B 试剂），其中PT 试剂（批号2001307，参考范围10～14 s）、APPT 试剂（批号Y2012196，参考范围22～38 s）、FIB 试剂（批号2031095，参考范围2～4 g/L）、TT 试剂（批号2021162，参考范围10～16 s），校准品定标，正常值质控品（批号182033）、异常值质控品（批号183020）、配套清洗剂。

1.3 检测方法 在Sysmex CA-7000 全自动血凝仪正常运行情况下，严格按照仪器标准操作规程操作，A 试剂校准品定标，用正常值和异常值两种水平质控品，监控室内质控在控，然后更换为B 试剂及配套清洗剂，检测正常值和异常值两种水平质控品在控后，先用A 试剂检测PT、APTT、FIB、TT（含高、中、低浓度）各25 份患者标本，再用B 试剂分析。所有测试均要求在4 h 内完成。以上两种试剂检测凝血四项均采用凝固法。

1.4 临床评价标准 参照美国CLIA'88 规定的室间质量评价标准（T±15%），以SE%＜CLIA'88 规定的室间质量评价标准的1/2（T±7.5%）作为临床可接受标准，判断B 试剂在医学决定水平处的系统误差（systematic error，SE）是否可以接受［3］。将PT、APTT和FIB 的2 个医学决定水平（PT 为X1＝10.5 s，X2＝15 s；APTT为X1＝20 s，X2＝40 s；FIB为X1＝1.70 g/L，X2＝4.10 g/L）分别代入回归方程，计算SE。可接受性判断指标［4］SE%＝︱（a+bXc）-Xc︱/Xc×100%＜EA，与允许误差（allowable error，EA）比较，判断PT、APTT、FIB 和TT 的SE 可接受性。

1.5 统计学方法 采用Excel 进行数据处理，检测结果的组间均值比较采用t检验。

2 结果

2.1 两种试剂检测结果比较 两种试剂的PT 均值整体偏低，A 试剂与B 试剂的PT、TT 检测结果比较有明显差异，以TT 结果尤其明显（P＜0.01）。见表1。

表1 A 试剂与B 试剂的检测结果比较（）

表1 A 试剂与B 试剂的检测结果比较（）

注：与A 试剂比较，aP＜0.01

2.2 两种试剂的回归方程和相关性分析 A 试剂和B 试剂FIB 检测结果的相关性略差，而PT、APTT和TT 两者相关性较好。以A 试剂（X）为标准，B 试剂（Y）4 个项目上的回归方程及相关性分析见表2。

表2 A 试剂与B 试剂间检测项目的回归方程及相关系数

2.3 两种试剂各参考区间的阳性符合率比较 A试剂和B 试剂检测APTT、FIB、TT 的阳性符合率较为接近，但PT 阳性符合率存在明显差异。见表3。

表3 两种试剂各自生物参考区间中的阳性符合率比较

2.4 B 试剂在医学决定水平处的SE 与临床可接受性评价 PT、APTT 在医学决定水平处均可被临床接受（SE%均＜7.5%），FIB 在高值水平可被临床接受，但在低值水平不被接受。见表4。

表4 PT、APTT 和FIB 在医学决定水平处的SE 及临床可接受性评价

2.5 成本效益分析 A 试剂和B 试剂检测同一凝血项目消耗的试剂等量，但B 试剂、质控品和耗材有明显的价格优势，使用B 试剂更能节约成本。

3 讨论

目前，许多医院检验科通常将凝血试验作为常规检测项目，PT 常用于凝血系统外源性和共同途径的筛选以及口服抗凝剂的疗效监测；APTT 常用于内源性凝血系统的筛选以及普通肝素的疗效监测；而FIB 和TT 不仅是出血性疾病与血栓性疾病的常用筛查指标，也用于溶栓治疗监测。凝血项目检验自动化、标准化使分析参数在临床得到广泛应用，且不同实验室之间的数据有可比性。原装配套试剂具有可溯源性、结果稳定、线性范围宽等优点，但试剂、质控品和耗材价格昂贵。而非原装配套试剂各厂家质量参差不齐，因此对此类试剂进行质量评估是保证检验结果准确的重要环节。

本次对比试验显示，B 试剂对APTT 项目的检测结果与进口A 试剂无明显差异，相关性好，阳性符合率较接近，临床使用可接受。两种试剂FIB 项目的参考区间有差别，相关性略差，阳性符合率相近。虽然两种试剂PT 和TT 检测结果的相关性较好，但B 试剂检测结果较A 试剂明显降低，整体均值偏低，尤其以TT 检测结果差异明显。两者的PT 阳性符合率存在明显差异，A 试剂PT 的参考区间低而窄，其原因有待分析。有研究显示，PT 检测结果与促凝血酶原激酶和钙离子的活性和含量有关［5］。促凝血酶原激酶活性因来源不同、制备标准不同而存在差异，钙离子作为启动剂其浓度直接影响各凝血因子的一系列酶促反应，因此不同凝血试剂的促凝血酶原激酶活性和钙离子浓度不同，可导致PT 测定值存在不同程度差异［6-7］。不同试剂TT 的生物参考区间有明显差异，但在各自参考范围中的阳性符合率较接近。影响血凝测定的因素较多（如仪器精度、标本状况、环境温度、试剂和反应杯质量等），尤其是试剂质量，可导致不同品牌仪器及试剂之间的检测结果差异较大，需要各实验室对试剂厂商提供的生物参考区间进行验证，建立适合自己实验室的生物参考区间［8］。各实验室在检测仪器、试剂和校准品等方面各成一个检测系统，不同检测系统的检测结果可能存在明显差异［9-10］。因本研究未找到TT的医学决定水平，因此未做TT的SE及临床评价。

从成本效益而言，国产试剂较进口试剂有明显的价格优势，实验室在确保质量可靠的前提下，可根据实际情况选择具有成本优势的试剂。

此外本室在日常工作中使用CA-7000 血凝仪检测血凝项目时，发现溶血、黄疸和脂血样本对检测结果仍有一定程度影响，部分甚至影响极为显著，这与孙德华等［11］发现的该血凝仪具有良好抗溶血、脂血及黄疸等干扰物质能力的研究结果有差异。

综上所述，在使用非原装配套试剂时，对试剂进行评估是不可或缺的重要环节。通过对比试验可以有效地发现不同试剂间分析结果的差异性，评价临床可接受度，不仅能为临床提供正确可信的结果，还能降本增效。