一种止血材料在肺出血模型中的止血效果和安全性评价*

何小华，郑晓霞，黄艳妮，刘纯，程艳玲

(山东省药学科学院，济南 250101)

1 引 言

外科手术止血不及时或不彻底导致失血过多时有发生[1-2]，常用结扎、缝合、电凝、可吸收多糖止血夹等方法止血[3]，效果明显。胸外科手术出血，影响手术视野，严重时导致患者死亡。在止血过程中，常规止血方法不能进行大范围止血，而电凝会导致伤口及周围组织损伤[4]。目前，用于临床的止血材料较多，如奥地利的Taehocomd 可吸收多糖创面止血封固剂，英国的Surgicel 氧化再生纤维素，均有止血效果[5-6]，但都具有一定的局限性，如 Taehocomd 的止血效果慢，而 Surgicel对神经组织有毒副作用[7-8]，增添了手术风险。因此，胸外科手术亟需一种安全、有效、物美价廉的止血材料。本研究旨在通过建立巴马小型猪肺部创面出血模型，观察可吸收多糖止血材料作用于肺出血创面达到完全止血的时间、出血量及材料用量，并对可吸收多糖止血材料的安全性进行评价。

2 材料和方法

2.1 动物、试剂与仪器

巴马小型猪，由北京实创世纪小型猪养殖基地提供，10只，6月龄以上，雌雄各半，体重10～15 kg，动物合格证号为1103491911000014。

可吸收多糖止血材料，1.0 g/支，日照天一生物医疗科技有限公司；外科术中止血装置，SM005，巴德医疗科技有限公司；速眠新，2 mL/支，敦化市圣达动物药品有限公司；硫酸阿托品注射液，2 mL/支，芮城天通动保药业有限公司；戊巴比妥钠，25 g/瓶，德国默克公司；头孢噻呋钠，0.1 g/支，河南新正好生物工程有限公司。

电子天平，LE203E/02，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；电子计价秤，ACS-JJ-Tiger，梅特勒-托利多(常州)测量技术有限公司；全自动生化分析仪，日立7180，日本株式会社日立高新技术有限公司；全自动血凝分析仪，SYSMEX CA1500，日本SYSMEX公司；全自动血液分析仪，SYSMEX XT-2000iv，日本SYSMEX公司。

2.2 建立巴马小型猪肺出血模型

用速眠新(0.1 mL/kg)进行小型猪基础麻醉，待卧倒后，再用1%戊巴比妥钠(20 mg/kg)维持麻醉。常规消毒，打开胸腔，在肺底部边缘剪下长约1 cm肺组织，清除周围血液，暴露出血点，立即将供试品直接喷在出血部位，直至止血完成并观察止血情况。记录止血时间，出血量及样品使用量。上市对照组做同样处理。纱布对照组使用已精确称重的无菌纱布压创口，持续按压1 min，此后每隔30 s观察一次，直至止血完毕，用少量生理盐水浸透纱布，轻轻揭开，以免造成再次出血，如止血超过5 min，则记录5 min，认为纱布止血无效。

术后处理：术后包扎固定伤口，返回笼中饲养7 d。术后连续3 d肌注头孢噻肟钠20 mg/kg/次/d，每天观察动物活动情况。术前，剖检前进行临检相关指标检测。

2.3 巴马小型猪各脏器解剖观察

所有实验组的小型猪于术后7 d进行解剖，取心、肝、脾、肺、肾、脑，观察各脏器体重变化及样品组织粘附性、降解情况、组织反应及有无血栓形成情况。

2.4 统计学处理

3 结果

3.1 止血试验结果

纱布对照组、供试品组与上市对照组的止血试验结果见表1。与纱布对照组比较，供试品组与上市对照组肺出血创面止血时间均显著缩短(P<0.01)，供试品组肺创面出血量明显减少(P<0.05)，上市对照组出血量减少，但与纱布对照组比较，无显著差异(P>0.05)；供试品组肺出血创面样品用量比上市对照组减少(P<0.05)，止血时间和出血量无显著差异(P>0.05)。

纱布对照组、供试品组与上市对照组术中止血效果观察评分见表1。与纱布对照组比较，供试品组与上市对照组肺出血创面的止血效果均为优良(P<0.01)，且供试品组的出血量少，手术视野比更好 ，见图1。

术后7 d，各组小型猪肺部创面全部愈合，因此，供试品组和上市对照组对伤口愈合时间未见明显影响。

组别止血时间(s)出血量(mL)止血材料用量(mg)止血评分纱布对照组250.17±80.231.35±0.850.00±0.000.67±1.03供试品组33.69±19.31∗∗0.43±0.36∗144.00±76.96△3.83±0.41∗∗上市对照组40.95±20.22∗∗0.80±0.78421.17±248.593.50±0.84∗∗

注：n=3，*P<0.05，**P<0.01，与纱布对照组比较；△P<0.05，与上市对照组比较。

3.2 术后临床及解剖观察

各组小猪术后3 d，精神稍差，活动减少，饮食稍偏少，二便正常。术后7 d，查体伤口愈合良好，可见少许线结反应，未见明显感染迹象，见图1。

图1各组巴马小型猪伤口愈合情况

Fig.1Wound healing of Bama mini pig in each group

肺出血创面剖检观察：7 d后剖检，各组小型猪胸壁切口与肺组织有黏连，肺切口处部分组织实变，未见明显血栓形成病变，见图2。因此，可吸收多糖止血材料对伤口愈合没有明显影响。

图2各组巴马小型猪胸壁与周围肺组织黏连情况

Fig.2Adhesion of chest wall and peripheral lung tissue of Bama mini pig in each group

3.3 所有实验组各脏器体重变化比较

各组解剖脏器体重占比见表2。术后7 d，供试品组与纱布对照组脑体重占比分别为3.01±0.33、3.29±0.53，统计学分析有显著差异(P<0.05)。术后7 d，供试品组和上市对照组脑体重均减轻，供试品组减轻更明显。

项目名称纱布对照组供试品组上市对照组心5.19±0.485.44±0.375.21±0.29肝28.95±3.1823.37±1.7425.38±8.47脾2.54±0.172.32±0.242.22±0.32肺13.99±5.1219.89±10.7716.10±1.63脑3.29±0.533.01±0.33∗3.13±0.39肾3.20±0.383.10±0.133.11±0.31

注：n=3，*P<0.05，与纱布对照组比较。

3.4 临床检测测定

3.4.1血液学指标检查结果 血液学指标属于正常范围。纱布对照组、供试品组和上市对照组的小型猪肺部手术前后血液学指标自身对照及变化率比较，组间有差异，见表3、表4，但统计学分析无显著差异(P>0.05)。

3.4.2血凝指标检测结果 血凝指标属于正常范围。巴马小猪肺部手术前后纱布对照组凝血酶原时间分别为(11.3±0.17) s，(11.93±0.12) s，统计结果显示有显著差异(P<0.05)；各组凝血酶原时间均增加，但纱布对照组增加更明显，见表5；各组血凝指标变化率组间比较有差异，但无显著差异(P>0.05)，见表6。

表3 巴马小型猪肺部创伤d0与d7血液学指标检查结果Table 3 The results of hematology indexes inpulmonary wound of Bama mini pig on d 0 and d

注：n=3，P>0.05，d0与d7自身对照比较.

表4 巴马小型猪肺部创伤d0与d7血液学指标变化率Table 4 Thechange rate of hematology indexes in pulmonary wound of Bama mini pig on d 0 and d

注：n=3，P>0.05，与纱布对照组比较。

3.4.3血生化指标检查结果 巴马小型猪血生化指标属于正常范围，d0与d7自身对照及三组血生化指标变化率比较均无显著差异。

表5 巴马小型猪肺部创伤d0与d7血凝指标检查结果Table 5 The results of coagulation index inpulmonary wound of Bama mini pig on d 0 and d

注：n=3，*P<0.05，d0与d7比较.

表6 巴马小型猪肺部创伤d0与d7血凝指标变化率比较Table 6 The change rate ofcoagulation index in pulmonary wound of Bama mini pig on d 0 and d

注：n=3，P>0.05，与纱布对照组比较。

4 讨论

临床上理想的止血材料应具备安全、无毒、有效的同时还应不影响组织的愈合，减少或不产生组织黏连，不增加感染率等特征[9-10]。目前止血材料止血试验的文献很多，但大部分的止血研究以小动物或兔的腹腔脏器和体表出血模型为主，且对止血材料进行安全性评价的很少[11]。本研究旨在对可吸收多糖止血材料在大动物猪胸腔肺出血模型进行止血效果研究，并对其安全性进行评价。通过止血模型止血效果对比，可吸收多糖止血材料止血效果明显，在止血时间、出血量和术中出血观察效果略优于上市对照组。结合临检指标、术后大体观察及剖检进行生物安全性评价，结果显示，可吸收多糖止血材料不影响组织愈合，不增加感染几率，仅切口附近有少部分肺组织产生黏连，肺组织未见明显血栓形成病变。

综上所述，可吸收多糖止血材料对猪胸腔肺出血模型具有较好的止血作用，同时不影响组织愈合，无感染，伤口无血栓形成，不引起组织广泛黏连，可作为临床胸外科手术中一种理想的止血材料。