一例土鸡心包积液综合征的实验室诊断

李迎晓 程辉 李运 焦凤超

摘  要：对豫北地区某土鸡养殖场送检的疑似鸡心包积液综合征病例进行实验室检查。结果表明：病死鸡剖检可见典型的心包积液、肝炎病理特征。PCR检测结果表明，从肝脏病料中检测出约830 bp大小的片段;序列分析结果表明，该段hexon基因核苷酸序列与Genbank中登录的FAdV-4基因序列的同源性高达99.8%以上，确定该养殖场是由血清4型腺病毒感染而引起的心包积液综合征。

关键词：禽腺病毒I型;心包积液综合征;分离与鉴定;Hexon

禽腺病毒（Fowl adenovirus，FAdV）是现代禽类养殖场中常见的病原体之一，分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ群，其中Ⅰ群有5个基因型（A～E）、包含12个血清型。FAdV-4是引起心包积液-肝炎综合征的主要病原[1]。自2015年6月份以来，鸡心包积液综合征在国内大面积流行，已成为目前危害养殖业的主要疫病之一[2-8]。2019年7月实验室接诊了豫北某土鸡养殖场送检的疑似心包积液综合征病例，通过实验室诊断确定为FAdV-4感染，现报道如下，以期为该地区土鸡心包积液综合征的防控提供有效参考。

1  材料与方法

1.1  材料

1.1.1  病料来源  2019年7月豫北某土鸡养殖户送检的疑似禽腺病毒感染病死鸡。

1.1.2  主要试剂  营养肉汤、营养琼脂，购自杭州滨河微生物试剂有限公司;无菌脱纤绵羊血，购自上海一研生物科技有限公司;DNA提取试剂盒，购于捷瑞生物工程（上海）股份有限公司;即用PCR试剂盒，购于生工生物工程（上海）股份有限公司。

1.2  方法

1.2.1  病理解剖与病变观察  按常规术式解剖病鸡，观察内脏器官病理变化。

1.2.2  细菌学检查  用接种环蘸取肝脏和脾脏病料划线接种于鲜血琼脂平板，37℃培养24～36h检查有无细菌生长。

1.2.3  PCR鉴定

1.2.3.1  组织DNA的提取  采集部分肝脏组织剪碎并充分研磨，取上清液按照DNA提取试剂盒说明书操作提取病毒基因，并于-20℃保存备用。

1.2.3.2  引物设计和PCR检测  参考文献[9]，设计针对禽腺病毒的Hexon序列保守序列特异性引物，目标条带约为830bp，序列见表1。

PCR反应体系50μL：2×Taq Master Mix 25 μL，上下游引物（10μmol/L）各2μL，模板1μL，超纯水20μL。扩增条件：94℃预变性5min;94℃ 30S，55℃ 45S，72℃ 1min，35个循环;72℃延伸 5 min。PCR产物用1.5%琼脂糖电泳进行检测后，凝胶成像系统观察并记录结果。并将PCR阳性样品送到上海生工生物工程有限公司进行测序和同源性分析。

2  结果

2.1  病理解剖与病变观察  剖检6只病、死鸡，主要眼观病理变化为心包内有大量淡黄色透明积液（图1），肝脏肿大并伴有出血点（图2），肾脏肿大呈花斑状。

2.2  细菌学检查结果  肝脏和脾脏病料接种的鲜血琼脂平板，经过培养后无可见细菌生长。

2.3  PCR鉴定结果  电泳结果显示扩增出一条长度约830bp大小条带，见图3。测序结果表明，分离株的Hexon基因序列与登录号为KT899325.1、KU877412.1、KX364100.1和UKY229710.1的基因序列同源性分别为99.9%、99.8%、99.9%以及99.9%，提示所分离的病毒为腺病毒血清4型，命名为XY，见图4所示。

3  结论与讨论

本研究通过剖检可见病鸡心包内有大量淡黄色积液、肝脏肿大出血、部分颜色发黄、坏死、具有禽腺病毒感染的临床症状，以及PCR结果和序列分析结果表明因Hexon的基因核苷酸序列Genbank中登录的部分FAdV-4的基因序列同源性高达99.8%以上。由此确定，本次在豫北地区某土鸡养殖场疫情为血清4型腺病毒感染。相关的报道也证实美洲、亚洲的部分国家和中国出现的心包积液型肝炎综合征主要由FAdV-4型感染引起的[10]。

由于该病毒具有垂直传播的特点，因此净化种鸡是一项非常重要的防控工作。在发生过本病的鸡场，应及时更新免疫计划，将禽腺病毒疫苗纳入养殖场的免疫程序;另外，要建立及时有效的疾病诊断方法，能够在疾病发生初期正确诊断并采取最有效的防治措施，将有利于疾病的防控。在疫情发生早期时，要及时使用高免卵黄抗体配合抗菌药物预防继发感染，能有效降低死亡率，控制疫情的传播。

参考文献：

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