猪群在不同生长期白细胞介素监测

细胞因子具有多种生物学效应，由特定的细胞分泌的小分子多肽，它能够调节细胞免疫功能、介导炎症反应，还参与免疫反应、机体的修复等多种生理活动。细胞因子通常可分为趋化与黏附因子、集落刺激因子和生长因子、白细胞介素（IL）、干扰素和肿瘤坏死因子。

作为一类细胞因子，白细胞介素主要通过与细胞表面的受体相结合，作用于白细胞，同时也可作用于其他细胞。它们可作用于同一种免疫细胞,之间可以相互作用,而它们自身又受到机体内多种因素的调节。白细胞介素具有多种生物学功能,可刺激细胞增殖和分化、提高机体抗感染和细胞杀伤能力、调节细胞膜表面分子的分泌合成、调理炎性反应、协助完成造血干细胞、血管内皮细胞和神经细胞的生命活动等。白细胞介素多肽链被糖基化，因糖基不同，其半衰期及功能都有所不同。

白细胞介素根据产生反应的不同分为Th1和Th2种类型，其中Th1白细胞介素包括IL-2、IL-12、IL-18等，主要参与细胞介导的免疫应答，也可以刺激B细胞产生抗体；Th2白细胞介素包括IL-4、IL-5、IL-10等，通常参与B细胞活化，并调节抗体的产生，主要调节动物机体体液免疫应答。白细胞介素可作为分子佐剂，适用于多种抗原疫苗，以增强疫苗的免疫效果。IL-2、IL-4、IL-5是三种功能不同的白介素，但它们之间有密切的相关性。IL-2能调控免疫系统中白细胞的活性，促进T细胞的增殖，参与抗原抗体反应及造血和肿瘤的监控；IL-4活化B细胞、刺激T细胞增殖，增强CTL细胞毒活性、巨噬细胞的吞噬及表达MHCII的能力，还可以促进EPO、G-CSF、M-CSF和IL-3的克隆；IL-5促进B细胞生长、分化，并刺激B细胞产生抗体，促进B细胞、T细胞产生IL-2受体，诱导CTL形成，促进酸性粒细胞分化、成熟。本文通过监测不同生长阶段猪群IL-2、IL-4、IL-5的水平，来评估动物在不同阶段的免疫水平，为提高动物抵御疫病能力及养殖场生产效率提供依据。

一、材料与方法

1.实验器材。单道、12道移液器、96孔U型血清稀释板、37℃恒温培养箱、洗液器、离心机、iMark-酶标仪。

2.血清样品。江西某养殖场提供2、4、6、8、10、12、24周龄商品猪血清各30份。

3.所用试剂盒。猪白细胞介素2、猪白细胞介素4、猪白细胞介素5酶联免疫分析试剂盒，均购自上海酶联生物科技有限公司。

4.实验方法及判定标准。采用固相ELISA测定实验动物血清中IL-2、IL-4、IL-5的水平,具体方法如下：

1）分别设置标准品孔和样品孔，标准品孔加50uL不同浓度的标准品。

2）设置空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，剩余步骤相同）、待测样品孔。在待测样品孔中先加样品稀释液40uL，然后再加待测样品10uL。

3）每孔加入酶标试剂100uL，空白孔除外。

4）用封板膜封板后，置于37℃避光温育30min。

5）将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水稀释后备用。

6）小心揭开封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。

7）每孔先加入显色剂A 50uL，再加入显色剂B 50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15min。

8）每孔加终止液50ul，终止反应（此时蓝色转变为黄色）。

9）以空白孔调零，测定各孔的OD450nm（测定应在加终止液后15min以内进行）。

结果计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

二、结果

1.在猪群的生长阶段，IL-2始终处于相对较高的水平，IL-5次之，IL-4含量相对较低。

2.猪群在2～10周龄三种白细胞介素的含量变化不明显，处于相对稳定的水平，10～12周龄三种白细胞介素的含量均有所升高，IL-2的增高幅度较为明显，监测到24周龄，三种白细胞介素都出现下降趋势(见表1、图1）。

三、讨论

1.2～4周龄仔猪处于哺乳阶段，因母乳中含丰富的细胞因子，仔猪可以通过摄取母乳来获得IL-2、IL-4、IL-5；此阶段猪只的免疫系统还发育不完善，受外界物质刺激不能够产生大量的白细胞介素。

2.6～8周龄仔猪已经断奶，仔猪又不能从其他途径获得IL-2、IL-4、IL-5，而不同的白细胞介素有各自的半衰期，使IL-2、IL-4、IL-5开始出现下降趋势。

表1 三种白细胞介素在猪群不同生长阶段的检测结果

图1 猪群生长周期内三种白细胞介素含量对比

3.10周龄的猪只免疫系统已经完善成熟，为提高动物机体的抗病能力，此时集中开始接种各种动物疫苗，在疫苗抗原的刺激下，IL-2、IL-4、IL-5增加明显；随着时间的延续，12～24周龄IL-2、IL-4、IL-5逐渐开始下降。

4.IL-2、IL-4、IL-5不仅可以作用于免疫细胞，而且它们之间也相互作用调节，这种严密的调节机制，能使机体免疫机能处于相对稳定的状态，更高效的发挥各种细胞因子在体内的调节作用。

综上所述，白细胞介素在机体免疫应答过程起着重要的作用，同时它们的水平也能反应出猪群在各个生长阶段抵御疫病侵袭的能力，为养殖户做好动物疫病的防控提供科学可靠的参考依据，最大限度的提高生产效率。