徐求文,金妙仁2,楼伟杰2,夏天风,陈 波,楼玲玲
(1.杭州百瑞特饲料科技有限公司,浙江 杭州 311255; 2.杭州海尔希畜牧科技有限公司)
肠道是营养物质消化吸收的主要场所,肠道的生长发育和健康状况影响动物的生长发育,抵抗力和免疫力等。因此,维持肠道结构和功能就显得非常重要。仔猪断奶往往会出现肠道微生物菌群紊乱,肠道粘膜形态受损,消化功能紊乱等现象,导致食欲降低,腹泻,饲料利用率低,生长缓慢,对养猪生产带来巨大损失。谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽富含谷氨酰胺,谷氨酰胺二肽,动物活性小肽和益生菌等,是一种能调节肠道功能的活性肽。本研究在断奶仔猪日粮中添加谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽,研究其对断奶仔猪黏膜形态、肠道菌群和生产性能的影响,为生产应用提供理论依据。
1.1试验材料 谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽由杭州百瑞特饲料科技有限公司研制,谷朊粉和蚕蛹经合理配伍酶解,发酵制成的复合肽,含谷氨酰胺,谷氨酰胺二肽,动物活性小肽和益生菌。
1.2试验设计 选取28日龄断奶杜大长仔猪60头,按胎次,体重相近和公母基本一致原则,分成2组,分别饲养于条件一致的密闭式保育猪舍内。对照组饲喂基础日粮(表1),试验组用1%酶解发酵复合肽替代基础饲粮中1%鱼粉,每组三个重复,每个重复10头,试验仔猪均采用干湿饲喂器饲喂,相邻两栏合用一个干湿饲喂器,一个饲喂器为一个重复,断奶仔猪均饲养于保育舍猪舍,至49日龄结束,试验期21 d。
表1 试验基础日粮组成及营养水平
1.3生产性能 在42日龄和49日龄清晨空腹称重统计饲料消耗量,计算日增重和料重比。
1.4肠道菌群数量 试验结束时,每组每个重复选2头接近平均体重的仔猪屠宰,分别无菌操作采集盲肠和结肠内容物,在灭菌生理盐水中摇匀,用平板培养计数法计数肠道乳酸杆菌和大肠杆菌数量,菌群数量以每克肠道内容物所含细菌群落总数的对数[lg CFU/g]表示。 在无菌操作台中称取1 g内容物于99 mL带有玻璃珠的生理盐水中摇匀灭菌,然后取 1 mL于试管中,加入无菌生理盐水9 mL,振荡混匀,依次按10倍等比稀释至10-7。其中乳酸杆菌接种于乳酸菌选择性培养基(LBS)上培养,在 37 ℃生化培养箱中厌氧培养48 h 后进行菌落计数;大肠杆菌则接种于伊红美兰琼脂培养基上培养,在37 ℃生化培养箱中有氧培养24 h后进行菌落计数。
1.5小肠黏膜结构测定 试验结束时,每组每个重复选2头接近平均体重的仔猪屠宰,截取十二指肠、空肠和回肠中段各 4 cm肠段,置于含3.8%甲醛的福尔马林固定液中,经脱水、包蜡、切片、HE染色后,显微镜拍照,测量绒毛高度和隐窝深度。
1.6试验数据处理 采用SPSS 10.0统计分析。试验数据以“平均值±标准差”表示。
2.1谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽对断奶仔猪生产性能的影响 谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽对断奶仔猪生长性能的影响见表2。
表2 谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽对断奶仔猪生产性能的影响
注:小写字母不同表示各试验组之间差异显著(P<0.05),下同。
谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽能显著提高断奶仔猪日增重,与对照组相比,28~42日龄和28~49日龄的日增重,试验组比对照组分别提高了10.86%(P<0.05)和12.26%(P<0.05)。28~42日龄和28~49日龄的料重比试验组比对照组降低了8.28%(P>0.05)和5.52%(P>0.05)。
2.2谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽对断奶仔猪肠道内容物菌群的影响 谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽对断奶仔猪肠道内容物菌群的影响见表3。
日粮中谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽能显著影响断奶仔猪肠道内容物菌群,试验组盲肠和结肠的大肠杆菌数量比对照组分别降低5.77%(P<0.05)和4.39% (P>0.05)。试验组盲肠和结肠的乳酸杆菌数量比对照组分别提高8.65%(P<0.05)和6.25%(P<0.05)。
表3 谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽对断奶仔猪肠道内容物菌群的影响(lg CFU/g)
2.3谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽对断奶仔猪黏膜形态的影响 谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽对断奶仔猪黏膜形态的影响见表4。
表4 谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽对断奶仔猪黏膜形态的影响(μm)
由表4可见,日粮中添加谷朊粉蚕蛹酶解发酵复合肽能显著影响断奶仔猪黏膜形态,试验组十二指肠、空肠和回肠绒毛高度分别比对照组提高7.34%(P<0.05),7.48%(P<0.05)和10.98%(P<0.05)。试验组十二指肠、空肠和回肠隐窝深度分别比对照组降低9.36%(P<0.05),2.18%(P>0.05)和10.19%(P<0.05)。
3.1对生产性能的影响 仔猪断奶应激引起小肠组织学上的显著变化(如绒毛萎缩和隐窝增生)造成了消化和吸收能力的下降,并最终导致腹泻,造成生长速度下降。黄冠庆等[1]就甘氨酸-L-谷氨酰胺对断奶仔猪的生长性能影响进行研究,结果表明,在21日龄断奶仔猪日粮中添加0.25%甘氨酸-L-谷氨酰胺可显著提高仔猪体重、采食量和饲料转化率,能降低断奶仔猪腹泻率。肖英平等[2]研究表明谷氨酰胺能显著提高断奶仔猪生长性能和营养物质表观消化率。本次研究表明,谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽能显著提高断奶仔猪日增重,降低料重比,与上述研究者的结果具有一致性。酶解发酵肽富含谷氨酰胺、谷氨酰胺二肽,以及其他活性小肽和益生菌,这有利于提高断奶仔猪的生产性能。
3.2对肠道内容物菌群的影响 谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽是经酶解和多种微生物发酵,经低温干燥而成,富含乳酸菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌,有利于调控动物肠道有益微生物菌群。乳酸杆菌是肠道中重要的优势有益菌,具有维持肠道微生态平衡、拮抗肠道条件致病菌(如大肠杆菌)、提供营养、增强机体免疫功能,尤其当机体处于应激状态时(如断奶等),对机体有明显的防御和保护作用[3]。研究表明,在仔猪断奶阶段添加益生菌能够调控肠道菌群,纠正肠道微生态失衡,促进其生长发育[4-5]。Dong 等[6]以及谢全喜等[7-8]研究也发现,饲喂益生菌可以显著降低断奶仔猪粪便中大肠杆菌的数量,提高生产性能。本试验结果表明,谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽可以显著提高盲肠和结肠乳酸杆菌数量,对有益菌增殖具有较好效果。与对照组相比,谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽可显著降低盲肠和结肠中大肠杆菌数量,具明显抑制病原菌效果。
3.3对小肠黏膜形态的影响 肠黏膜结构和形态的完整是保证机体营养物质消化吸收的基础,断奶应激对仔猪肠黏膜形态有很大影响, 导致仔猪小肠绒毛萎缩和隐窝加深,使肠黏膜结构遭到破坏[9]。研究表明,饲料添加谷氨酰胺能够改善幼龄哺乳动物的肠道生理功能[10]。谷氨酰胺是机体中含量最丰富的游离氨基酸,在断奶、受伤和疾病感染等应激条件下被认为是一种条件性必需氨基酸[11],肠道是利用谷氨酰胺和谷氨酸最多的器官,而G1n 和G1u也是肠道主要的能源物质[12-13]。肖英平等[2]和刘涛等[14]的试验结果表明,日粮中的谷氨酰胺对仔猪小肠细胞增殖和维持肠道正常形态具有重要作用。谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽富含G1n和G1u,本研究结果与上述结果一致,日粮添加谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽能显著提高断奶仔猪十二指肠、空肠和回肠绒毛高度降低十二指肠、空肠和回肠隐窝深度。
日粮中添加谷朊粉蚕蛹酶解发酵肽能显著影响断奶仔猪黏膜形态和肠道菌群,提高断奶仔猪的生产性能,能明显缓解仔猪的断奶应激。