HPLC法测定盐酸萘甲唑啉滴鼻液中硫柳汞含量的研究

司孝清

摘  要：盐酸萘甲唑啉滴鼻液中含有抑菌剂硫柳汞，为了更好控制该产品质量，精确测定硫柳汞的含量，特建立高效液相色谱法（HPLC）的测定方法。方法： 色谱柱：Angilent HC-C18 （4.6mm×250mm，5μm）;流动相：1%三乙胺溶液（用磷酸调pH至3.0）-甲醇（30：70）;检测波长：220nm;进样量：20μL;流速1.0mol/min;柱温：40℃。结果：硫柳汞峰面积与浓度的线性关系良好（r>0.999），线性范围为0.1578～0.6312μg，加样回收率为99.6%～100.8%之间。结论：本方法灵敏，快速，准确，重复性好，可用于盐酸萘甲唑啉滴鼻液中硫柳汞的含量测定。

关键词：盐酸萘甲唑啉滴鼻液;硫柳汞;含量;HPLC

中图分类号：R927.2        文献标志码：A 文章编号：2095-2945（2019）24-0085-02

Abstract： Naphthazolin Hydrochloride Nasal Drops contain thiomersal. In order to better control the quality of the product and accurately determine the content of thiomersal， a method for the determination of thiomersal by high performance liquid chromatography（HPLC） was established. Methods： The chromatographic column was Angilent HC-C18（4.6mm×250mm， 5μm）; mobile phase， 1% triethylamine solution （adjusted to pH 3.0 with phosphate）-methanol （30：70）， the detection wavelength was 220nm; the injection volume was 20μL， the flow rate was 1.0 mol/min;column temperature： 40 ℃. Results： The linear relationship between thiomersal peak area and concentration was good（r>0.999）， the linear range was 0.1578～0.6312μg， and the recovery was 99.6%～100.8%. Conclusion： The method is sensitive， rapid， accurate and reproducible， and can be used for the determination of the content of thiomersal in Naphthazolin Hydrochloride Nasal Drops.

Keywords： Naphthazolin Hydrochloride Nose Drops; thiomersal; content; HPLC

前言

鹽酸萘甲唑啉属于咪唑啉类的拟交感神经药，是广泛用于眼和鼻粘膜的减充血剂，是一种有效的作用于结膜小动脉α肾上腺素能受体的血管收缩剂。当应用于粘膜时，萘甲唑啉引起血管收缩，从而达到迅速并能够延长减少肿胀和结膜充血的作用，广泛用于成人过敏性及炎症性鼻充血、急慢性鼻炎。盐酸萘甲唑啉无抑菌作用，为了防止盐酸萘甲唑啉滴鼻剂多次使用时发生微生物增长，在处方中添加了抑菌剂，以确保用药的安全性。查阅收集到的产品说明书，发现市场上销售的盐酸萘甲唑啉滴鼻液处方中标注的抑菌剂为硫柳汞。中国药典2015版（ChP2015）收载的盐酸萘甲唑啉滴鼻液没有硫柳汞的检测，为考察盐酸萘甲唑啉滴鼻液中硫柳汞的稳定性，建立盐酸萘甲唑啉滴鼻液中硫柳汞的检测方法。

1 仪器与试药

SARTORIUS BT125D型电子天平，LC-2030岛津二极管阵列检测器，LC-2030四元低压泵，Agilent HC-C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱。硫柳汞对照品（中国食品药品检定研究院，批号135050-201401），2，2'-二硫代水杨酸（北京百灵威科技有限公司），三乙胺（分析纯，广州化学试剂厂），磷酸（分析纯，广州化学试剂厂）、甲醇（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司），盐酸萘甲唑啉滴鼻液（ 广东恒健制药有限公司自制）。

2 色谱条件

色谱柱：Agilent HC-C18（4.6mm×250mm，5μm）;流动相：1%三乙胺溶液（用磷酸调pH至3.0）-甲醇（30：70）;流速：1.0mL/min;柱温：40℃;检测波长：220nm;进样量：20μL;溶剂：水。2，2'-二硫代水杨酸与硫柳汞峰的分离度应大于1.5（图1）。

3 方法与结果

3.1 溶液的配制

系统适用性试验溶液：称取2，2'-二硫代水杨酸和硫柳汞对照品各约10mg，置50ml量瓶中，加甲醇-水（90：10）适量溶解并稀释至刻度，摇匀，量取1ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

对照品溶液：精密称取硫柳汞对照品适量，加水定量稀释成0.02mg/ml的溶液。

供试品溶液：取盐酸萘甲唑啉滴鼻液作为供试品溶液。

3.2 专属性试验

取供试品溶液（硫柳汞阴性）、供试品溶液以及对照品溶液，分别进样20μl，记录色谱图。结果：盐酸萘甲唑啉和其他辅料均不干扰硫柳汞的检测。（图2～图4）

3.3 线性和范围

精密称取硫柳汞对照品适量，加水定量稀释成0.2mg/ml的溶液，精密量取适量，分别加水稀释成8μg/ml、12μg/ml、16μg/ml、20μg/ml、24μg/ml、32μg/ml的溶液分别进样20μl，记录色谱图。以进样量（μg）为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线（图5），求得回归方程y=2823068.8x-10654.4，r=1.0000（n=6），结果表明：硫柳汞进样量在0.1578～0.6312μg范围内与峰面积成良好线性关系。

3.4 进样精密度

取对照品溶液进样20μl，连续进样6次，RSD为0.08%，进样精密度良好。

3.5 重复性试验

取供试品溶液6份，分别进样20μl，RSD为0.12%，方法重复性良好。

3.6 回收率试验

精密称取硫柳汞对照品适量，加稀释剂（取盐酸萘甲唑啉和其他辅料按处方比例配制而成）稀释至刻度，配制成相当于硫柳汞标示浓度的80%、100%、120%的供试品溶液，每个浓度配制3份，分别进样20μl，计算回收率（%）。结果：本方法回收率在99.6%～100.8%之间，RSD（n=9）为0.33%，方法准确度良好。

3.7 讨论

（1）2，2'-二硫代水杨酸为硫柳汞主要降解产物，美国药典40版（USP40）对硫柳汞中杂质A（2，2'-二硫代水杨酸），经对盐酸萘甲唑啉滴鼻液进行酸、碱、氧化、光照、高温破坏，样品中硫柳汞的含量检测结果表明：硫柳汞在光照条件下降解较快（图6），降解产物为2，2'-二硫代水杨酸。故本检测方法中以2，2'-二硫代水杨酸峰和硫柳汞峰的分离度作为系统适用性，以增加方法的专属性和准确度，硫柳汞对光敏感，溶液的配制应避光操作。

1.光照降解产物（2，2'-二硫代水杨酸）;2.硫柳汞

（2）本研究使用等度洗脱，硫柳汞峰的出峰时间在5～6min之间，能达到快速分析的目的，方法灵敏、准确、重复性好，适用于盐酸萘甲唑啉滴鼻液中硫柳汞的含量测定。

参考文献：

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