基于HPLC法的芙蓉散质量控制方法研究

首都医科大学附属北京中医医院（100010）庄志宏 吴剑坤

北京市卫生局临床药学研究所（101300）张林华

芙蓉散为北京中医医院院内制剂，在皮科、外科已有50多年的应用。它具有清热解毒，消肿止痛的功效，对于阳性肿疡有良好的治疗效果。临床常用于疮疡肿毒之热毒蕴结引起的乳腺炎、各种软组织损伤、关节炎等症候，症见皮肤红、肿、热、痛，舌红，苔白或黄，脉滑、数[1]。处方为芙蓉叶、生大黄、黄芩、黄连、关黄柏、泽兰、冰片等。方中芙蓉叶具有凉血解毒、消肿止痛作用，生大黄清热解毒、祛瘀生新，芙蓉叶、生大黄为君药，黄芩清热解毒、泻火燥湿，助君药清热解毒，行臣药之功。局部用药可使肿疡得以消散，即使难以完全消散也可使肿势局限，拔脓外出[2][3]。在现执行标准《北京市医疗机构制剂规程》中仅规定对芙蓉散进行薄层鉴别，并无含量检测项目。为进一步提升芙蓉散质量控制水平，识别制剂生产过程关键风险因素，本研究建立了芙蓉散中黄芩苷含量测定方法，为有效控制制剂质量、保证临床用药安全提供依据。

附图 对照品溶液，阴性对照溶液，供试品溶液色谱图

1 材料

1.1 主要仪器 日立L-2000型高效液相色谱仪；D-2000工作站；岛津AUW-220D分析天平等。

1.2 样品与试剂 黄芩苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110715-201720）；芙蓉散（北京中医医院提供，批号：1701016）；乙腈（色谱纯，天津市光复科技有限公司）；纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 采用Diamonsil C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈（B）和0.1%磷酸水（A）为流动相梯度洗脱，梯度洗脱条件详见附表1；流速1ml/min；柱温30℃；检测波长277nm；进样量10μL；理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2500。见附表1。

2.2 黄芩苷对照品溶液制备 精密称取黄芩苷对照品1.55mg，置于10mL容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得黄芩苷为0.155mg/mL的对照品溶液。

2.3 芙蓉散供试品溶液制备 精密称取芙蓉散5g，精密加入70%甲醇75ml，称定重量，超声处理40min，放冷至室温，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml～25ml容量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，取续滤液即得。并按照处方配制不含黄芩的阴性对照样品。

2.4 阴性对照样品 在上述色谱条件下，取黄芩对照品溶液、芙蓉散供试品溶液、芙蓉散阴性样品溶液各10μL进样，记录色谱图，结果显示黄芩苷和其他组分峰分离度良好，阴性样品对测定无干扰，见附图。

附表1 梯度洗脱色谱条件

附表2 芙蓉散中黄芩苷含量测定结果

附表3 样品中黄芩苷含量测定结果

2.5 线性关系考察 按照上述色谱条件，分别进样1、2、3、5、10μL的黄芩苷对照品溶液，记录色谱图。以进样含量（μg）为横坐标，以色谱峰面积值为纵坐标进行线性回归，得到黄芩苷的回归方程为Y=233651925.3239X+4290.3661；R2=1.0000。黄芩苷在0.155～1.55μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.6 重复性试验 取2.4项下制备的供试品溶液，连续进样6次，进样量10μL，结果样品中黄芩苷的平均含量为4.00mg/g，RSD为1.38%（n=6），表明该方法重复性较好。

2.7 稳定性试验 取芙蓉散供试品溶液，按上述色谱条件于0、2、4、8、24h进样，结果，供试品溶液中黄芩苷峰面积的RSD为1.33%（n=5），表明供试品溶液中的黄芩苷成分在室温放置24h内基本稳定。

2.8 回收率试验 精密称取已测含量的同一批号芙蓉散样品6份，计算回收率。平均回收率为95.43%，RSD为1.48%。见附表2。

2.9 样品含量测定 取3批芙蓉散供试品，按照2.4项下方法进行样品处理，按照上述色谱条件进行含量测定，结果见附表3。

3 结论

本研究通过对供试液在HPLC检测器响应信号进行测定，优化仪器参数，对提取溶剂的组成、提取时间和溶剂用量进行优化，确定最优的实验条件，建立了具有分离效果好、峰形对称、溶剂及其他杂质干扰小的含量测定方法。在三个批次样品的应用表明，此方法可以对符合现行标准的药品的质量进行进一步的量化。预期通过一段时间的数据积累可以明确制剂质量合理变化范围。为采取合理、有效手段提升散剂均匀性，控制制剂质量、保证临床用药安全提供方法支撑。