苗药羊奶奶叶的生药学研究

黄洁　邹立君　钟卫津　慕泽泾　梁健　钟国跃　张亚梅

【摘 要】 目的：建立苗药羊奶奶叶的生药学鉴别方法。方法：采用性状、显微和薄层色谱等鉴别方法研究苗药羊奶奶叶三种基原植物的生药学特性。结果：羊奶奶叶3种基原植物的药材性状特征、叶横切面显微特征方面均具有显著的差异，可以用于3者之间的鉴别;但三者的叶表面、粉末显微特征，薄层色谱特征无明显区别，可用于羊奶奶叶药材的真伪鉴别。结论：苗药羊奶奶叶薄层色谱特征，叶表面及粉末显微特征均可作为羊奶奶叶生药学鉴别的理论依据。

【关键词】羊奶奶叶;胡颓子叶;蔓胡颓子叶;宜昌胡颓子叶;生药学研究

【中图分类号】R282.6 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2019）14-0036-05

苗药羊奶奶叶收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》（2003年版），为胡颓子科胡颓子属植物胡颓子Elaeagnus pungens Thunb.、宜昌胡颓子Elaeagnus henryi Warb.以及蔓胡颓子Elaeagnus glabra Thunb.的干燥叶，具有止咳平喘、消肿止血、收敛止泻的功效，用于咳喘、外伤出血[1]。生于海拔1000m以下的向阳山坡或路旁[2]。其中胡颓子叶始载于《本草拾遗》，1977年版《中国药典》收载，中医将其列为止咳平喘要药。中成药定喘灵、消炎止咳片、海珠喘息灵等均用胡颓子叶作为主要配方原料。宜昌胡颓子叶和蔓胡颓子叶在民间亦广泛用于治疗咳嗽、哮喘等病症[3]。

现代研究表明胡颓子叶中含有单宁、黄酮苷、生物碱、有机酸、三萜及甾醇类等化合物，具有平喘、止咳、祛痰等药理作用[4]。但宜昌胡颓子叶和蔓胡颓子叶的化学和药理研究鲜有报道。已有的羊奶奶叶药材标准中，性状描述仅涉及宜昌胡颓子，显微鉴别仅有粉末项，尚缺乏三种基原植物系统、详尽的生药学研究。基于此，作者分别对其性状、显微特征（叶横切面、叶表面、粉末）、薄层色谱特征进行研究，以期为羊奶奶叶的药材鉴定和质量评价提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 XY-200型高速多功能粉碎机;GZX-9070MBE电热鼓风干燥箱;麦克奥迪（Motic）BA410EF-UPR显微镜;Moticam pro 282A 显微成像系统;TS100（Nikon）倒置生物显微镜;德国徕卡Leica RM2245轮转式切片机;TKY-BMB型石蜡包埋机。

1.2 材料 胡颓子叶采自贵阳花溪区高坡乡，宜昌胡颓子叶采自毕节地区大方县星宿彝族仡佬族乡，蔓胡颓子采自布依族苗族自治州惠水县摆金镇。经江西中医药大学慕泽泾老师鉴定分别为胡颓子科植物胡颓子E.pungens、宜昌胡颓子E.henryi 蔓胡颓子E.glabra的干燥叶。标本现存于江西中医药大学中藥资源与民族药研究中心标本馆。甘油、苯酚、水合氯醛、明胶、乙醇、甲醛、冰醋酸、二甲苯（AR）、番红、固定绿、加拿大树胶、石蜡等均为分析纯。

2 方法

2.1 性状鉴别 结合文献和标本对羊奶奶叶三种基原植物进行性状描述。

2.2 显微鉴别 分别取各基原样品3份，1份置水中煮沸，待室温后沿脉切成0.3cm×0.5cm方块置FAA固定液中固定，制成石蜡切片用于叶横切面的显微观察;1份干燥后粉碎，过60目，用于羊奶奶叶的粉末鉴定;1份水煮软化，用于撕去叶表面进行观察。

2.3 薄层鉴别 分别取羊奶奶叶各基原植物粉末1.0g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入30mL水和30mL乙酸乙酯溶液，水浴回流提取60min，过滤，滤液置于分液漏斗中，静置分层，取上清液蒸干，甲醇溶解定容于5mL容量瓶中，即得样品溶液。精密称取银锻苷对照品适量，加甲醇溶解后制成浓度为0.20mg/mL的对照品溶液。照《中国药典》2015年版4部薄层色谱法实验，吸取对照品和和样品溶液各10μL点样于硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（5∶5∶0.1）为展开系统，365nm紫外灯下检视。

3 结果

3.1 药材性状

3.1.1 胡颓子叶 叶革质，椭圆形或长圆形，长5～10cm，宽1～4cm，先端钝尖，基部宽楔形，全缘或微波状，常向背面反卷，有时呈筒状。叶上表面浅绿色或黄绿色，具光泽，散生褐色或黑褐色鳞片;下表面银灰色，密被白色和散生棕褐色鳞片。主脉在叶上表面多略凹陷，在叶背面突出，密生黑褐色鳞片。叶柄粗短，长0.5～1cm，灰黑色，上面有沟，密被褐色或深褐色鳞片。气微，味微涩。如图1所示。

3.1.2 蔓胡颓子叶 叶片革质或薄革质，卵形或卵状椭圆形，稀长椭圆形，长4～12cm，宽2～5cm，顶端渐尖 基部圆形，边缘全缘;叶上表面深绿色，具光泽，下表面黄褐色或灰绿色，密被深褐色或浅棕色鳞片;侧脉6～8对，与中脉开展成50～60°的角，上面明显或微凹下，下面凸起;叶柄棕褐色，长5～8mm。如图2所示。

3.1.3 宜昌胡颓子叶 叶革质至厚革质，阔椭圆形或倒卵状阔椭圆形，长6～15cm，宽3～6cm，顶端渐尖或急尖，基部钝形或阔楔形，边缘有时稍反卷。幼叶上表面深绿色，被褐色鳞片，成熟叶上表面黄绿色或黄褐色，下面银白色、密被白色和散生少数褐色鳞片;侧脉5～7对，近边缘分叉而互相连接或消失，上面不甚明显，下面甚凸起;叶柄粗壮，长8～15mm，黄褐色。如图3所示。

3.2 叶横切面

3.2.1 胡颓子 叶上下表皮均为1列呈类方形细胞，外壁均被角质层，且上表皮角质层厚于下表皮。下表皮外多见呈丁字状的非腺毛，柄部由3～6个并列细胞组成，细胞壁角质化;上部呈牛角状二歧分枝，细胞壁木质化。上表皮有下皮层，内侧为1～2列呈切向延长的厚角细胞;下表皮内侧有1～4列厚角细胞;主脉维管束周韧型或双韧型，木质部半月形，韧皮部多有不规则扁形分泌腔;维管束鞘纤维2至数个相聚，聚成断续环带。叶肉组织下表皮有时可见气孔的断面及非腺毛的纵切面;栅栏组织为2～3层圆柱形细胞。如图4所示。

3.2.2 蔓胡颓子叶 叶主脉上、下表皮细胞外侧角质层均较胡颓子叶薄。上、下表皮非腺毛和内侧厚角细胞均较胡颓子叶多。韧皮部及皮部均有较多分泌腔。主脉周韧型维管束成半圆形，维管束鞘纤维分散环绕于维管束外，微木化。叶肉组织表皮细胞同主脉，上、下表皮均可见星状、鳞片状非腺毛的纵切面;栅栏组织为1～4层柱状细胞，海绵组织细胞排列紧密。如图5所示。

3.2.3 宜昌胡颓子叶 上、下表皮细胞外侧角质层较胡颓子和蔓胡颓子均薄。下表皮偶见鳞片状非腺毛纵切面。维管束自叶先端到叶基部从外韧型到双韧而后周韧型过渡，韧皮部集中多数分泌腔。中央髓部较小或无;维管束鞘排列成环带状，纤维壁较胡颓子厚。叶肉细胞同主脉，栅栏组织为1～3层长柱形细胞，海绵组织排列略紧密，宽度与栅栏组织近相等。如图6所示。

3.3 叶表面观 三种基原羊奶奶叶上表皮细胞均呈多角型或不规则形，垂周壁明显波状弯曲（图7），气孔不定式，副卫细胞4～7个，密被星状和鳞鳞片（图8）。下表皮细胞略有差异，其中胡颓子叶下表皮细胞呈多角形，壁略直（图8）。蔓胡颓子叶下表皮鳞片比胡颓子更密（图9）。宜昌胡颓子叶鳞片比胡颓子少（图10）。

3.4 粉末特征 3种基原羊奶奶叶药材的粉末无差异，均呈黄绿色。盾状鳞片无色、土黄色或黄棕色，多破碎，单个散在，直径300～500μm，由无数一端尖锐的细长细胞放射排列组成，各细胞的侧壁全部相连;柄部由数枚细胞组成，所有细胞壁全部木质化。透明的星状非腺毛，头部直径115～300μm，由数十枚细长细胞组成，其一端略膨大，集中于中心，另一端渐尖，游离放射状伸出，侧壁仅在近中央的一端部分相连，柄部的组成与盾状鳞片相似，细胞壁全部木质化。草酸钙柱晶，长2～4μm。纤维壁厚，孔沟不明显，直径6～11μm。叶上表皮细胞呈类多角形，垂周壁微波状弯曲，略增厚;下表皮细胞呈多角形，壁薄，较平直;气孔不定式，副卫细胞4～7个。如图11～15所示。

3.5 薄层鉴别 采用银椴苷为对照品，以三氯甲烷：丙酮：甲酸（5∶5∶0.1）为展开系统，365nm紫外灯下检视，如图16所示，斑点清晰，分离效果好。以此建立羊奶奶葉的薄层鉴别方法。

4 讨论

实验结果表明，羊奶奶叶3种基原植物在药材性状和显微特征方面均具有显著的形态学规律，对其真伪鉴别具有实际意义。在叶横切面显微特征方面：3种基原植物的栅栏组织和海绵组织分布均规则、清晰，上、下表皮均可见星状、鳞片状非腺毛的纵切面，且非腺毛上部呈牛角状二歧分枝（切面）或放射状，细胞壁木质化;3者的区别是宜昌胡颓子和胡颓子的栅栏组织和海绵组织的分布比例约1∶1，但前者的海绵组织较后者排列紧密、规则，蔓胡颓子的海绵组织约为栅栏组织的2倍，可以用于3者的显微鉴别。在叶表面的显微特征方面：3种基原植物之间没有明显区别，上、下表皮均被角质层，且下表皮密被星状非腺毛和鳞状非腺毛，气孔不定式。3种基原药材的粉末亦无明显区别，故合写为羊奶奶叶药材粉末显微特征。胡颓子属植物的薄层色谱鉴别主要针对叶和根，用齐墩果酸做标准品。前期研究表明，羊奶奶叶中黄酮类物质和银椴苷均具有镇咳平喘的活性。张伟欣等采用HPLC法测定发现12批次全国多地胡颓子叶中均含有有银椴苷[5]。此外，银椴苷具有抗炎、镇痛、抗高血压、抗糖尿病、抑制胰腺癌细胞增殖等活性[6]。结合三种基原植物在民间广泛用于治疗咳嗽、哮喘等病症的用药经验，本实验选择银椴苷为对照品，更具专属性。综上所述，本研究所建立的方法可用于苗药羊奶奶叶的生药学鉴别。

参考文献

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第一卷）[M].北京： 科学出版社， 2004： 415.

[2] 贵州省药品监督管理局. 贵州省中药材、民族药材质量标准[M]. 贵阳：贵州科技出版社，2003：175.

[3] 李聪. 胡颓子属3种叶类药材的鉴定与品质研究[D].武汉： 中南民族大学， 2012： 13.

[4] 黄丽杰. 胡颓子叶综合质量评价研究[D]. 郑州：河南中医学院， 2015： 14.

[5] 张伟欣， 刘伟， 林帅军， 等. 胡颓子叶药材HPLC指纹图谱[J]. 中国实验方剂学杂志， 2017， 23（4）： 98-101.

[6] 仲维兰， 刘红， 鲁美钰， 等. 银椴苷抑制人胰腺癌细胞增殖的作用及机制研究[J]. 中国药理学通报， 2018， 34（12）： 1679-1683.

（收稿日期：2019-04-25 编辑：程鹏飞）