锦带花水提取物镇痛作用研究

王永慧 张文竹 张子睿 迪丽努尔·阿孜叶尔江 张 颖 罗学娅

1.大连大学医学院临床医学系，辽宁大连 116622；2.大连大学医学院药理学教研室，辽宁大连 116622

疼痛是困扰人类健康的严重问题之一，也是当前神经科学研究的热点问题之一。临床上对于多种急慢性疼痛的治疗，传统药物主要有阿片类和非阿片类镇痛药，虽疗效肯定，但长期应用会发生成瘾性、消化性溃疡等不良反应。因而在丰富的中药、天然药物资源中寻找具有一定镇痛作用，且无成瘾性，不良反应少的药物是必要的。中药锦带花（Weigela florida）属于忍冬科（Caprifoliaceae）植物，传统古籍记载其具有清热凉血解毒、活血化瘀止痛等功效，主要用于治疗瘟病初起、咽喉肿痛、丹毒、感冒发热等症状[1-2]。据报道，锦带花具有抑菌[3-4]、抗流感病毒[5-6]、抑制α-葡萄糖苷酶[7]等作用。本研究基于锦带花的功效，对其水提取物的镇痛作用进行探讨，研究结果既可填补锦带花镇痛作用研究的空白，也可为开发新型、安全、具有应用前景的镇痛药物提供有价值的参考。

1 材料与方法

1.1 材料

清洁级昆明种小鼠150 只，体重（21±2）g，5～6 周龄，雌雄兼用，购自大连医科大学实验动物中心，动物合格证号：SCXY（辽）2018-0003。屏障环境饲养，按照清洁级动物管理标准管理，健康，皮毛光滑，无伤无畸形。动物使用经大连大学实验动物伦理委员会批准，并在实验过程中严格执行国家有关实验动物保护和使用指南。锦带花（大连大学医学院中医中药学系高松教授馈赠）；冰醋酸（西陇化工股份有限公司）；5%盐酸曲马多注射液（多多药业有限责任公司）；YLS-6B 智能热板仪（山东省医学科学院设备站）。

1.2 方法

1.2.1 锦带花水提取物制备 锦带花干燥药材25.0 g，蒸馏水600 mL 浸泡30 min 后，进行回流冷凝，加热煮沸30 min，趁热过滤，收集滤液并加热浓缩，得锦带花水提取物200 mL（浓度0.125 g 生药/mL），4℃冰箱保存备用。

1.2.2 热板法测定锦带花水提取物的镇痛作用 雌性小鼠数只，置（55±0.5）℃热板上，以其两次舔后足潜伏期的均值为给药前痛阈值[8]。选取给药前痛阈值30 s内的小鼠50 只，随机分为锦带花水提取物小、中、大剂量组（相当于生药0.05、0.1、0.2 g/kg，依据文献[2，6，8]确定剂量），盐酸曲马多组（0.04 g/kg，依据文献[8]确定剂量），生理盐水组（给予等容积生理盐水），每组10 只，灌胃给药。依次测定各小鼠给药后15、30、45、60、75 和90 min 的痛阈值。

1.2.3 扭体法测定锦带花水提取物的镇痛作用 雌雄各半小鼠数只，1%冰醋酸10 mL/kg，腹腔注射，选取10 min 内出现扭体反应的小鼠100 只，其中50 只随机同热板法[9]分组，灌胃给药，10 min 后开始记录每10 分钟[11～20 min（T1）、＞20～30 min（T2）、＞30～40 min（T3）、＞40～50 min（T4）]内的扭体反应数，至50 min 为止[10]。另50 只随机分组同上，腹腔注射给药，记录给药后的扭体反应数，并计算扭体反应抑制率，扭体反应抑制率=（生理盐水组扭反应数均值-给药组扭体反应数均值）÷生理盐水组扭体反应数均值×100%。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，不满足正态分布的数据经变量转换后进行分析，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t 检验。以P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 锦带花水提取物对小鼠痛阈值的影响

与生理盐水组比较，中剂量组给药后60、75 min时及大剂量组给药后15、45、60 min 时的痛阈值均明显升高，差异均有统计学意义（P ＜0.05）；盐酸曲马多组灌胃给药后不同时间点的痛阈值与生理盐水组比较，差异有统计学意义（P ＜0.05 或P ＜0.01）。与盐酸曲马多组比较，除中剂量组灌胃给药后45、75、90 min时，大剂量组给药后45、90 min 时痛阈值差异无统计学意义（P ＞0.05）外，其余各时间点的差异均有统计学意义（P ＜0.05 或P ＜0.01）。见表1。

表1 锦带花水提取物灌胃给药对小鼠痛阈值的影响（s，±s，n=10）

表1 锦带花水提取物灌胃给药对小鼠痛阈值的影响（s，±s，n=10）

注：与生理盐水组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01；与盐酸曲马多组比较，#P ＜0.05，##P ＜0.01

2.2 锦带花水提取物对小鼠扭体反应的影响

小、大剂量组给药后T1～T4时段，中剂量组给药后T3和T4时段的扭体反应数与生理盐水组的比较，差异有高度统计学意义（P ＜0.01）。与盐酸曲马多组的比较，小剂量组给药后T1、T2时段，中剂量组给药后T1、T2、T3时段，大剂量组给药后T2时段差异有统计学意义（P ＜0.05 或P ＜0.01）。小、中剂量组给药后T3、T4时段，大剂量组给药后T2、T3、T4时段的扭体反应数与生理盐水组的比较，差异有统计学意义（P ＜0.05或P ＜0.01）。与盐酸曲马多组的比较，小剂量组给药后T1、T3时段，中剂量组给药后T1、T2、T3时段，大剂量组给药后T1时段差异有统计学意义（P ＜0.05 或P ＜0.01）。盐酸曲马多组无论灌胃或腹腔注射给药后不同时段的扭体反应数与生理盐水组比较，差异均有高度统计学意义（P ＜0.01）。见表2～3。

3 讨论

疼痛是临床常见症状，由于对其产生的确切机制尚不清晰，其治疗成为临床面临的难题之一，至今尚无有效的治疗方法，亟待开发安全、有效、低毒的镇痛药物。中草药毒副作用少，常具有多个作用靶点，在疼痛治疗方面应用历史悠久。目前已知的具有止痛作用的中药达千余种，但80%左右的药物未进行药理学实验研究，可见开发潜力巨大。锦带花目前仍以园艺观赏为主[11]，在栽培和引种方面的研究报道较多[12-16]，而药理作用的报道，除抑菌、抗流感病毒、抑制α-葡萄糖苷酶等方面外，其他报道仍是空白。本研究探讨了锦带花水提取物的镇痛作用，以期进一步发掘新的药理活性，为研究开发具有应用价值的中药提供理论与实验依据。

表2 锦带花水提取物灌胃给药对小鼠扭体反应的影响（±s，n=10）

表2 锦带花水提取物灌胃给药对小鼠扭体反应的影响（±s，n=10）

注：与生理盐水组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01；与盐酸曲马多组比较，#P ＜0.05，##P ＜0.01。“-”表示无数据

表3 锦带花水提取物腹腔注射给药对小鼠扭体反应的影响（±s，n=10）

表3 锦带花水提取物腹腔注射给药对小鼠扭体反应的影响（±s，n=10）

注：与生理盐水组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01；与盐酸曲马多组比较，#P ＜0.05，##P ＜0.01。“-”表示无数据

在筛选具有镇痛药理作用的化合物、评价镇痛药物药效强度等研究中，多以动物致痛模型实验为基础。最常用的4 种致痛动物模型包括小鼠热板实验、小鼠甩尾实验、小鼠醋酸扭体实验以及小鼠福尔马林实验等[17-18]。其中小鼠热板实验对组织损伤最小，可反复利用，简便易行[19]；冰醋酸扭体法具有敏感、简便、重复性好的优点。同时动物通过预筛选，也可最大程度地减少因个体差异导致的实验误差。

本研究采用传统的热板法和扭体法疼痛动物模型，观察锦带花水提取物对小鼠的镇痛作用。结果发现，锦带花水提取物中、大剂量灌胃给药后，痛阈值均有不同程度的提高，且在60 min 时作用表现最为显著；3 种剂量锦带花水提取物无论灌胃还是腹腔注射，给药后扭体反应数均有不同程度的下降，在T4时段作用表现最为显著，大剂量组作用更为明显。提示其对小鼠具有一定的镇痛作用。在灌胃给药的小鼠扭体反应实验中，尽管小、大剂量组给药后T1直到T4的各个时段内，扭体反应数均有下降（P ＜0.01），但从扭体反应数的均值上看，大剂量组的均值在T1、T2、T33 个时段内相对于小剂量组都要低些。综合分析所有实验结果，锦带花水提取物对小鼠的镇痛作用在大剂量组表现更为显著。虽然锦带花水提取物各剂量组灌胃或腹腔注射给药后，对痛阈值或扭体反应数的影响在一定程度上与盐酸曲马多比较差异无统计学意义（P ＞0.05），但从数据均值上看，盐酸曲马多的改变更明显些，说明盐酸曲马多作为阳性对照药物，其镇痛作用是明确且显著的。

关于中药的镇痛机制，有报道指出可能与增加中枢阿片肽类的含量，抑制中枢一氧化氮的释放，降低脑组织中前列腺素E2的含量，减少外周致痛物质的分泌以及调节外周c-fos 基因等有关[20]。至于锦带花水提取物对小鼠的镇痛作用机制为何，则有待于深入研究。