山杏内种皮中磷脂化合物的分析测定

鲍宇宏

摘 要：山杏（Prunus armeniaca） 是我国北方干旱山地丘陵区特有的经济林树种，目前对山杏的研究主要集中在对山杏仁的研究，如杏仁中的苦杏仁苷、山杏挥发油、硒、不饱和脂肪酸和山杏蛋白等方面的研究，未见有对其磷脂类物质提取及测定的研究。本研究以山杏内种皮为原料，利用高效液相色谱法测定含量，以便为生产中测定山杏内种皮磷脂类化合物提供技术依据，为山杏资源的充分开发利用提供参考。

关键词：磷脂；高效液相色谱；山杏内种皮

1.引言

1.1 山杏的介绍

杏，有文字记载的，首为《诗经》，其把杏列为五果之首，即杏、李、桃、栗、枣。此外，《齐民要术》、《王桢农书》、《黄帝内经素问》等书籍中都有对杏的记录[1]。具记载，我国是整个杏属植物的原生种的起源地。据介绍，全国各地约有 1500 多个品种[2]。我国山杏资源十分丰富，是我国北方重要的生态经济型树种，主内蒙古、北京、辽宁、山西、黑龙江、新疆、西藏等地区，多分布在半干旱、半湿润的风沙平原、山地和丘陵地区[3]。

山杏的营养价值较高，据分析，山杏果肉含蛋白质、碳水化合、及多种维生素。此外，山杏果肉中还含有多种矿质元素、胡萝卜素、类黄酮、绿原酸以及焦性儿茶酸等活性物质[4]广泛用于食品、饮料、药品生产上[5]。但是，目前山杏的开发主要集中在杏仁上，其他方面有待研究。

1.2 磷脂的概述

磷脂也称磷脂类、磷脂质，磷脂是细胞的组成成分，是指含有磷酸的脂类，属于复合脂。磷脂在生命过程中起结构形成和代谢作用，具有重要而广泛的生理意义。磷脂主要存在于油料种子中，大部分存在于胶体相内，并且广泛分布在动植物体内。

2.材料与方法

2.1 试验材料与仪器

2.1.1 主要原料与试剂

主要原料和试剂有山杏内种皮、甲醇、乙腈、磷脂酰甘油（PG）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰胆碱（PC）。

2.1.2 试验仪器

主要仪器设备有电子天平、紫外-可见分光光度计、高效液相色谱仪。

3.高效液相色谱法测定磷脂类化合物

3.1 制备样品

称取样品1.0000 g，加入正己烷-甲醇（1：1，体积比）试剂15 mL，超声功率450 W，超声提取50 min，放置至室温，加正己烷-乙醇提取试剂补至原重，6 000 r/min离心10 min，取上清液用适量的0.75 %氯化钠溶液萃取2次，收集有机相。将有机相旋转浓缩至近干，用甲醇定容至10 mL。取样品溶液1 mL，甲醇稀释至10 mL，0.45 μm微孔滤膜过滤，待测。

3. 2检测波长的选择

波长扫描结果在201～210nm之间有一个最大吸收峰，为此，测定相同样品在201～210nm范围内，在每个纳米波长下测定其吸收度结果表明206nm处磷脂有最大吸收度。因此，选用206nm作为检测波长。

3.3 流动相的选择

试验考察了流动相为甲醇、乙腈、甲醇-乙腈等不同流动相组成及比例下3种磷脂标准品的分离情况。流动相为100%甲醇或100%乙腈时，PG和PE保留时间相近，最终确定甲醇-乙腈（15：85，V/V）为流动相。

3.4 流速的选择

试验中选取流速分别为0.8mL/min、1.0mL/min及1.5mL/min，考察流速的不同对磷脂各组分的分离度、出峰时间及信号强度的影响。结果表明流速越小，出峰越慢，且峰型不好，分叉或跟有若干小峰，流速越大出峰时间越快，峰型越好，但PE、 PG与PC保留时间越接近。综合考虑，确定流速为1.0 mL/min。

3.5最优色谱条件

根据试验结果，确定高效液相色谱法分析磷脂类化合物的最优条件为：流动相为甲醇-乙腈（15：85，V/V），流速为1.0mL/min，由于柱温对分离效果影响不大，最终选择柱温为35℃。

3. 6 标准曲线的绘制

分别取磷脂标准品储备液进行稀释，制备标准曲线，以标准品浓度为横坐标，以峰面积/106为纵坐标进行线性回归，三种磷酯标准品的线性方程及相关系数见表3-1。

3. 7 精密度试验

将混合标准品溶液按3.3色谱条件进行测定，重复测定5次，三种磷脂化合物峰面积的RSD值分别为：PG：1.53%， PC：1.01%， PE：1.17%，表明儀器精密度良好。

3. 8 样品测定结果

精密称取一定量的山杏内种皮样品提取，在已优化的色谱条件下测定，平行测定5次，其分析结果见表3-2。根据回归方程计算山杏内种皮PE含量为0.3934mg/g。

3.9稳定性试验

将样品溶液按色谱条件每隔2h测定一次，重复5次，磷脂类化合物PE峰面积的RSD值为1.23%，说明样品溶液在8h内稳定，结果见表3-3。

4.结论

本试验以山杏内种皮为原料，建立了高效液相色谱-紫外检测器的分析方法。以高效液相色谱-紫外检测器法分析山杏内种皮中磷脂酰乙醇胺（PE）的含量，通过优化色谱条件，建立标准品回归方程，并考察试验方法。确定液相色谱检测条件为：AGILENT ZORBAX RX-SIL型硅胶柱，流动相为乙腈：甲醇（15：85，v/v），等度洗脱，流速为1mL/min，检测波长为206nm，柱温为35℃，进样量为20μL，根据标准曲线测得山杏内种皮中PE的含量为0.3934mg/g，与总磷脂含量相比，山杏内种皮中应该还有别的磷脂成分。

参考文献：

[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：人民卫生出版社，1990，176.

[2]王焕华.中药趣话[M].天津：百花文艺出版社，2006，214-218.

[3]毕武臣，刘志龙.论山杏的生物经济学特性及发展前景[J].防护林科技，2005，（5）：76-77.

[4]张加延，张钊.中国果树志：杏卷[M].北京：中国林业出版社，2003，12.

[5]宋曰钦.山杏蛋白的研究与开发利用[J].北京大业大学，2006.

[6]曹栋，裘爱泳，王兴国. 磷脂的结构、性质、功能及研究现状（2）[J].粮食与油脂，2004（ 6） ： 13-16.