甲基化p16基因及其表达蛋白在胶质瘤中表达的Meta分析

胡心仪 陈柏森 任诗齐 王子恒 曹翔宇 王为 杨宇辰 朱蕙霞

摘要：目的 系统分析p16基因甲基化、P16蛋白表达与胶质瘤发生发展的关系。方法 计算机检索PubMed、中国期刊全文数据库（CNKI）、维普、万方数据库等数据库，各数据库检索时间均为建库截至2018年2月。严格遵循文献筛选标准，收集有关p16基因甲基化、P16蛋白表达与胶质瘤发生发展关系的随机对照实验（RCT），用R语言软件以相对危险度（RR）及95%可信区间（CI）为效应指标进行Meta分析。结果 最终纳入文献21篇，Meta分析的结果显示：p16基因甲基化与胶质瘤病理分级的表达差异（RR=0.53；95%CI=0.34～0.81；P<0.01）、胶质瘤组和对照组中的P16蛋白表达的差异（RR=0.53；95%CI=0.47～0.60；P<0.01）、P16蛋白表达与胶质瘤病理关系的表达差异（RR=1.74；95%CI=1.35～2.26；P<0.01）均有統计学意义。结论 p16基因甲基化随着胶质瘤病理分级增高而增高，P16蛋白表达随着胶质瘤病理分级增高而降低。因此，可将p16基因甲基化程度及P16蛋白表达率作为联合指标判断脑胶质瘤的发生发展情况。

关键词：p16；Meta分析；胶质瘤；甲基化；临床治疗

胶质瘤是一种恶性脑肿瘤，约占全部中枢神经系统肿瘤的60%[1]，具有生长速度快、侵袭力强、有效规避人体免疫系统清除等特点。世界卫生组织（World Health Organization，WHO）将胶质瘤分为Ⅰ～Ⅳ级[2]，其中Ⅰ～Ⅱ级为低恶性程度胶质瘤，Ⅲ～Ⅳ级为高恶性程度胶质瘤。明确胶质瘤的分级有助于治疗方案的制定及疾病发展情况的判断，故本文将Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤设立为WHOⅠ～Ⅱ组，Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤设立为WHO Ⅲ～Ⅳ组进行研究。

现有的治疗方案包括手术切除、放疗、化疗选用以及抗肿瘤药物的使用难以治愈胶质瘤[3～4]。因此，寻找新的路径对胶质瘤进行诊断和治疗是当务之急。目前，研究提示p16基因与胶质瘤发生发展具有密切联系[5～8]。p16基因是一种新的抑癌基因，通过直接参与细胞的调控，负调节细胞的增殖与分裂[9]。p16基因也被称作是细胞周期的刹车装置，p16基因的失活会促使细胞的恶性增殖，从而导致恶性肿瘤的发生。启动子区CpG岛甲基化是p16基因失活的一种重要机制，p16基因甲基化后产生的P16蛋白结构改变、功能异常。已有相关文献研究了p16基因甲基化、P16蛋白表达与胶质瘤发生发展的关系[10～30]，但单个研究样本量小，不能指出p16基因与脑胶质瘤发生发展之间的确切关系。因此，本文选取关于p16基因甲基化、P16蛋白表达与胶质瘤发生发展的关系的随机对照实验（randomized controlled trial，RCT），采用Meta分析的方法，系统评价p16基因甲基化、P16蛋白表达与胶质瘤发生发展的关系，从而为胶质瘤早期的诊断和治疗提供实践依据。

1 材料与方法

1.1资料来源 检索PubMed、中国期刊全文数据库（CNKI）、万方、维普数据库等，筛选国内外p16基因与人脑胶质瘤相关的RCT，中文检索词为“神经胶质瘤”、“人脑胶质瘤”、“恶性胶质瘤”、“胶质细胞瘤”、“星形胶质瘤”、“间胶质瘤”、“少突胶质细胞瘤”、“胶质瘤”、“p16基因”、“P16蛋白”、“甲基化”，英文检索式为（（ARF）or（CDK4I）or（C-DKN2）or（CMM2） or（P19）or（P19ARF）or（T-P16））。检索时限截至2018年2月，所有检索策略通过多次预检索后确定。

1.2文献纳入与排除标准 纳入标准 ①所有纳入的研究病例均需有完整的临床病例数据；② 文献为病例实验研究；③病例术前未进行化疗或放疗；④统计方法恰当，数据可靠，结果表达清晰明确，可计算出相对危险度（RR）及95%可信区间（CI）。排除标准 ①文题、摘要与p16及胶质瘤无关；②纯综述或论述、评述类文献、动物实验研究及儿童相关研究文献；③不能通过原始文献内容或摘要推算出数据的研究；④未设立对照组的文章；⑤研究语种仅限于中、英文。

1.3质量评价 采用Jadad量表的质量评价标准对纳入研究的文献进行质量评分，评分项包括随访情况、意向性分析、是否采用盲法、是否随机分配、基线可比性，每项满分10分，其中，高于25分的文献为高质量文献，低于25分的为低质量文献。

1.4统计学分析 按Meta分析的要求整理、核对纳入文献中的数据，用R语言软件以相对危险度（RR）及95%可信区间（CI）为效应指标进行Meta分析。各纳入研究结果间的异质性采用χ2检验，若P>0.05，采用固定效应模型进行分析，若P<0.05提示存在统计学异质性，并分析异质性来源，确定是否能采用随机效应模型。

2结 果

2.1文献检索结果以及纳入研究的基本特征 初次检索得到文献3062篇，通过阅读题名和摘要后排除文献2894篇，初筛共得到168篇文献。调阅全文，按筛选标准最终纳入21个RCT。（图1）

2.2纳入研究的方法学质量评价 本研究纳入的文献有21篇，所有研究均采用了随机分组法和盲法，8篇文献明确描述了意向性分析，4篇文献描述了基线可比性，其中高质量文献20篇，低质量文献1篇。

2.3 Meta分析结果

2.3.1 p16基因甲基化与胶质瘤病理分级的Meta分析 纳入的10篇文献[21～30]中均报告了p16基因甲基化与胶质瘤病理分级关系。其中WHOⅠ～Ⅱ组中p16基因甲基化的共49例，WHO Ⅲ～Ⅳ组中p16基因甲基化的共119例，各项研究间具有统计学异质性（P=0.03，I?=51%）。因此，可以选用随机效应模型来进行Meta分析。结果提示，WHOⅠ～Ⅱ组和WHO Ⅲ～Ⅳ组中的p16基因甲基化差异具有统计学意义（RR=0.53；95%CI=0.34～0.81；P<0.01）（图2）。

2.3.2 P16蛋白表達情况与胶质瘤病理分级关系的分析结果：纳入的11篇文献中[10～20]均报告了P16蛋白表达情况与胶质瘤病理分级关系。其中WHOⅠ～Ⅱ组中P16蛋白表达阳性的共238例，WHO Ⅲ～Ⅳ组中P16蛋白表达阳性的共130例，各项研究间具有统计学异质性（P<0.01，I?=58%）。因此，可以选用随机效应模型来进行Meta分析。结果提示，WHO Ⅰ～Ⅱ组和WHO Ⅲ～Ⅳ组中的P16蛋白表达差异具有统计学意义（RR=1.74；95%CI=1.35～2.26；P<0.01）（图3）。

3 讨 论

脑胶质瘤是最常见的原发性颅脑肿瘤，其恶性增长的发生与肿瘤细胞周期失控直接相关。p16基因是细胞周期中的基本基因，直接参与细胞的调控，负调节细胞增殖与分裂。有研究发现脑胶质瘤中p16基因的启动子区域发生了CpG岛甲基化[31]，引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，最终导致p16基因及其产物P16蛋白表达异常。但由于单个研究样本量小，未能指出p16基因及P16蛋白与脑胶质瘤发生发展之间的详细关系。因此，本文研究p16基因甲基化及P16蛋白表达与胶质瘤病理分级的关联强度，系统评价p16基因甲基化、P16蛋白表达与胶质瘤发生发展的关系。

关于P16蛋白在胶质瘤中的表达情况，本研究纳入的文献中发现，P16蛋白表达与胶质瘤的病理分级呈负相关，即胶质瘤病理分级越高，P16蛋白表达越低（RR=0.53，P<0.01）。p16基因甲基化与胶质瘤病理分级的研究提示p16基因甲基化与胶质瘤的病理分级呈正相关，即胶质瘤的病理分级越高，p16基因甲基化程度越高（RR=0.53，P<0.01）。该Meta分析表明p16基因甲基化和P16蛋白表达在不同等级的胶质瘤中都具有明显的差异性，在WHOⅠ～Ⅱ组中，p16基因甲基化程度低，而P16蛋白表达率高；在WHO Ⅲ～Ⅳ组中，p16基因甲基化程度高，而P16蛋白表达率低。因此可考虑将P16蛋白表达情况和p16基因甲基化程度作为联合指标来反应胶质瘤的发生发展情况，从而提高早期临床诊断的灵敏度。

p16基因及表达产物P16蛋白对细胞周期的抑制作用和对细胞生长调节的影响使它们极有可能成为将来肿瘤基因治疗的候选靶点。本文Meta分析结果表明，p16基因甲基化越明显，脑胶质瘤恶性程度越高。提示在治疗方面可以考虑将特异性逆转p16基因高甲基化状态，来恢复p16基因正常表达作为一种治疗手段，为临床难以治愈脑胶质瘤的治疗方案提供新思路。

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