自动染色机在病理常规染色中的应用体会及改进

成克伦 姜森 成鑫 胡国梅

1 贵州航天医院病理科 （贵州 遵义 563000）

2 贵州航天医院检验科 （贵州 遵义 563000）

3 遵义市第一人民医院病理科 （贵州 遵义 563002）

内容提要： 目的：探讨国产派斯杰RS36型自动染色机在石蜡切片苏木精-伊红（Hematoxylin-Eosin，HE）染色和液基细胞学（Thinprep Cytologic Test，TCT)巴氏（Papanicolaou）染色中的应用及效果，为自动染色技术的运用积累经验。方法：参考该机型提供的全自动染色参考程序，根据染色效果，经过多次调试，对原程序进行适当调整和改进，编写适用于本科室的新程序。结果：染色效果有了进一步改善，对比度和清洁度提高。结论：派斯杰RS36型自动染色机能满足病理科日常染色工作的需要，适当的程序改进，能提高染色质量。

自动染色机以其稳定的染色效果，近年来逐渐在病理科普及。本科室使用的机型是国产派斯杰RS36型，在染色过程中，根据国内试剂标准和工作环境，进行了适当改进，摸索出了新的染色程序，效果有所改观，现将应用体会及程序改进总结如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

仪器与设备：常州派斯杰医疗设备有限公司生产的派斯杰RS36型自动染色机、通风柜。

试剂：二甲苯、梯度酒精、无水乙醇、苏木素染液、1%盐酸酒精分化液、水溶性伊红染液、橙黄G、EA50。

1.2 方法

石蜡切片和TCT细胞涂片，烘烤后放入染色机，进入各自自动染色程序，流程改进见表1、表2。常规HE染色程序耗时30min6s，巴氏染色程序耗时30min1s。

2.结果

HE和巴氏染色，组织及细胞色彩鲜艳、均匀，各种颜色着色适度，细胞核和细胞质层次分明，对比度好，形态清晰，结构完整，背景干净无污染，每批染色结果稳定一致，优良率在95%以上。

3.讨论

全自动染色机以自动化的优点已在许多病理实验室普及使用，逐渐替代了手工操作，有以下优点[1,2]：①工作效率提高：可同时进行多批量染色，运行后，不再需要人员操作，提高了工作效率，减轻了劳动强度。②质量稳定：各步骤由电脑程序控制，在相同的程序下染色结果较稳定，避免了人工染色所造成的不同批次片子的染色差异。同时把病理技术人员从繁琐的人工染色中解脱出来，也推动了染色的标准化。派斯杰RS36型自动染色机具有三排共36个染色缸，26个试剂站点，上载站点2个，下载站点3个，5个水洗站点，3个加热站点，10套染色程序，每次可染30张玻片，每小时染片量在400～600张左右，可以满足病理科日常染色工作的需要。在使用过程中做了一些改进，对步骤和试剂设定时间进行了适当个性化调整，并增加了2缸空缸停留，2缸循环运行，染色效果有进一步改善。

表1. HE自动染色流程

表2. 巴氏自动染色流程

在实际工作中，体会到要注意以下几点：①苏木素、伊红、橙黄G和EA50主要染液，根据染色效果的降低适时更换，一般染片量在2000张左右应予考虑。②其他试剂根据有无杂质、沉淀、浑浊、污染、清洁度以及整体染色质量进行更换，一般1个月左右更换1次。③更换试剂时，倒出试剂后要用自来水冲洗试剂缸，擦干净，凉干后再倒入新的试剂。④至少每周检查一次试剂量，染色量大时，要随时观察，补足蒸发的试剂量，每次更换做好记录，尤其是对没有试剂更换提醒的机型更要注意。⑤由于环境温度或染液浓度降低等因素，有时要对程序进行微调，需要关机重新启程，新程序才生效。有的染色机采用AAT智慧自适应自动变速控制系统，染液浓度下降后，每隔一定时间段，能自动增加某一染液的染色时间[3]。⑥为保证质量，每次染色前试染一张。对于小组织或某些实质细胞致密组织，伊红染色可能过淡，可编辑单独的程序进行染色，增加伊红染色时间或浓度，或用易着色的盐酸化伊红溶液[4]。⑦染色机最好放在通风柜内，避免染剂挥发污染室内空气。⑧室温过低时，开启加热功能，以防止脱苯不干净不利于水化，造成切片染色模糊或局部不着色。二甲苯可用无味环保透明剂替换，但需适当增加脱蜡时间。⑨石蜡切片和TCT细胞涂片染色时，试剂缸要分开设置不能混用，避免细胞涂片上的细胞脱落污染石蜡切片。

RS36型自动染色机提起染色架后没有暂停功能，玻片上残余试剂易滴入其他试剂缸造成污染，在主要染液苏木素、伊红、橙黄G和EA50邻近缸设置了2s左右的空缸停留，弥补了这一不足。该机型染色中不能上下抖缸，可在最后脱水的两缸无水乙醇中，设置几次循环运行，这样能提高玻片的清洁度。

自动染色机染色，是一项多步骤、多环节的染色技术，其结果受若干因素的影响，虽然技术日趋成熟，仍然需要不断改进、创新，力求高质量染色效果，为疾病的正确诊断提供有效的保障[5]。