同型半胱氨酸测定试剂盒（酶循环法）的检测评价

郭芳 应英 李梅 于丽丽 辽宁省医疗器械检验检测院 （辽宁 沈阳 110179）

内容提要： 目的：根据YY/T 1258-2015《同型半胱氨酸测定试剂（盒）（酶循环法）》和企业产品技术要求，检测评价同型半胱氨酸测定试剂盒（酶循环法）。方法：应用日立7100全自动生化分析仪对该试剂盒的外观、净含量、试剂空白吸光度、分析灵敏度、线性范围、测量精密度、准确度、稳定性等进行检测评价。结果：外观、净含量均符合要求；试剂空白吸光度为1.8；分析灵敏度为0.03/min；线性相关系数（r）为0.9999，[3.0,10.0]μmol/L范围内，线性偏差为-0.2μmol/L；(10.0，45.0]μmol/L范围内，线性偏差最大值为0.7%。重复测试（10.0±2.0）μmol/L和（20.0±4.0）μmol/L的样品，所得结果的重复性（变异系数CV）分别为2.2%和2.3%；3个不同批号试剂盒的批间相对极差为2.8%。不同浓度纯品溶液的回收率分别为92.1%和98.5%。取到效期后3个月内的试剂检测，稳定性符合要求。结论：同型半胱氨酸测定试剂盒（酶循环法）性能指标符合标准要求。

同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）是蛋氨酸的中间代谢产物，其依附于血管内壁[1]。近些年的研究发现，Hcy与动脉粥样硬化和心血管疾病的危险性成正相关，被认为是动脉粥样硬化导致的心血管疾病最显著的独立危险因素，同时，Hcy水平升高将刺激血管壁并可能引起动脉血管损伤，导致形成炎症和管壁斑块[2]。目前国内外普遍将Hcy作为常规检测项目，用于判断动脉粥样硬化和心脑血管疾病的危险性[3]。

Hcy的检测方法主要有高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等。近年来，由于具有快速、简便、灵敏度高、自动化程度高等特点，酶循环法发展迅速，已逐渐成为各级各类实验室常用的检测方法[4]。本文按照YY/T 1258-2015《同型半胱氨酸测定试剂（盒）（酶循环法）》和企业产品技术要求，对同型半胱氨酸测定试剂盒（酶循环法）进行检测评价，对检测过程中遇到的问题进行分析讨论。

1.材料与方法

1.1 仪器与材料

日立7100全自动生化分析仪；同型半胱氨酸测定试剂盒（酶循环法）（国内某生物科技公司）；质控品：心肌多项标志物检测用质控品（RANDOX，货号：CQ3100，批号：453728）。

1.2 方法

生化分析仪基本参数设置见表1。

校准程序：使用两个水平校准品，进行2点校准，采用线性校准模式。

表1. 生化分析仪基本参数设置

表2. Hcy测定试剂盒的线性范围检测结果

表3. Hcy测定试剂盒的测量精密度检测结果

表4. Hcy测定试剂盒的准确度检测结果

2.结果

2.1 外观

试剂R1为无色澄清液体，R2为浅黄色澄清液体，无沉淀及絮状悬浮物。

2.2 净含量

不少于标示值。

2.3 试剂空白吸光度

试剂空白吸光度为1.8。

2.4 分析灵敏度

在37°C、波长340nm、1cm光径条件下，测定吸光度变化率（ΔA/min）为0.03/min。

2.5 线性范围

线性相关系数（r）为0.9999，[3.0,10.0]μmol/L范围内，线性偏差为-0.2μmol/L；(10.0，45.0]μmol/L范围内，线性偏差最大值为0.7%。见表2。

2.6 测量精密度

重复测试（10.0±2.0）μmol/L和（20.0±4.0）μmol/L的样品，所得结果的重复性（变异系数CV）分别为2.2%和2.3%；分别用3个不同批号试剂盒测试（10.0±2.0）μmol/L的样品，所得结果的批间相对极差为2.8%。见表3。

2.7 准确度

不同浓度纯品溶液的回收率分别为92.1%和98.5%。见表4。

2.8 稳定性

取到效期后3个月内的试剂检测，外观项，试剂R1为无色澄清液体，R2为浅黄色澄清液体，无沉淀及絮状悬浮物。试剂空白吸光度为1.8，分析灵敏度为0.03/min，线性相关系数（r）为0.9998，[3.0,10.0]μmol/L范围内，线性偏差为-0.1μmol/L；(10.0，45.0]μmol/L范围内，线性偏差最大值为2.0%，（10.0±2.0）μmol/L和（20.0±4.0）μmol/L的重复性分别为2.8%和0.8%，准确度不同浓度的回收率分别为100.2%和109.0%。见表2～4。

2.9 结论

根据YY/T 1258-2015《同型半胱氨酸测定试剂（盒）（酶循环法）》和企业产品技术要求，同型半胱氨酸测定试剂盒（酶循环法）性能指标符合标准要求。

3.讨论

近些年的多项研究表明，Hcy与动脉粥样硬化和心脑血管疾病成正相关，是其独立危险因素。高Hcy血症有可能是脑梗死独立的致病因素，同时也可能是导致复发性脑梗死的重要危险因素[5]。因此Hcy的检测受到了越来越多的重视，随之对实验室检测质量的要求也越来越高[6]。

酶循环法是目前临床上用于测定血清Hcy较新的一种化学分析方法，其操作简单、可自动化等优点使得酶循环法试剂盒在临床检验中得到了较为广泛的应用。大量酶循环法试剂盒应运上市。本试验按照YY/T 1258-2015《同型半胱氨酸测定试剂（盒）（酶循环法）》和企业产品技术要求，对国内某生物科技公司生产的Hcy测定试剂盒（酶循环法）进行检测[7]。

在本试验中，采用速率法进行测试，反应方向为负反应，读取28点和34点数据，计算差值，换算吸光度变化率为0.03/min，大于标准规定值0.01。准确度因暂无国家标准物质，因此选用回收试验法，不同浓度纯品溶液的回收率分别为92.1%和98.5%，符合标准规定（100±15）%范围内。稳定性选用效期稳定性进行试验，产品技术要求规定试剂盒在2～8°C避光环境中密封保存，有效期为12个月。选取到效期后3个月内的试剂盒检测外观、试剂空白吸光度、分析灵敏度、线性范围、准确度、重复性，结果分别符合标准要求。

因此，结果说明该试剂盒各项性能指标均符合YY/T 1258-2015《同型半胱氨酸测定试剂（盒）（酶循环法）》和企业产品技术要求。