贞芪扶正颗粒的一体化综合性实验改革

刘小花， 师志强， 牟亚转， 周湘琳， 封士兰

(兰州大学 药学院， 兰州 730000)

0 引 言

药学是一门实践性很强的学科。现阶段药学实验课程基本是在各二级学科的基础上开设的，学科间的知识点渗透较少，涉及知识的深度和广度不够，教学过程中无法体现其系统性和连贯性[1-8]。这就迫切地需要从药物的研究与开发过程中研发一些一体化综合性实验项目，将药学各门专业课程有机整合起来，从而提高学生的创新能力与综合实验能力。

1 贞芪扶正颗粒制备一体化综合实验简介

贞芪扶正颗粒具有良好的临床效果[9-13]，其制备过程(见图1)可以开发成一个一体化综合性实验项目。项目的实施是以制备贞芪扶正颗粒为目标产物，第1步是从原料药开始质量追踪检验，其处方中的黄芪和女贞子分别按照国家标准进行检验[14]；第2步是贞芪扶正颗粒的提取与制备，将黄芪和女贞子进行煎煮提取，浓缩成稠膏，干燥成中间体粉末，再加一定辅料，制成颗粒，成品要求检验合格。在实验过程中，通过药物分析技术及时获取产品质量信息，保证实验方法设计合理和实验产品质量合格。

图1 贞芪扶正颗粒的一体化实验流程图

通过贞芪扶正颗粒制备一体化综合性实验项目的开展，可将药学各门专业课程有机整合起来(见图2)，对学生巩固所学知识、培养创新精神、提高动手能力及解决问题能力都有显著成效。

图2 一体化实验所连接的课程流程图

2 原料药的检验

2.1 黄芪的检验

实验所用黄芪药材为豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bge. var.mongholicus( Bge.) Hsiao的干燥根。

(1) 性状判别[14]。 使学生学习了解黄芪外观、形状、颜色、质地、有无纤维、气味等性状特征。

(2) 粉末特征鉴别。依照中国药典2015版[14]黄芪项下规定鉴别，学生应认识黄芪中石细胞、网纹导管和纤维等典型的粉末特征图(见图3)。

石细胞

网纹导管

黄芪纤维

(3) 薄层鉴别。方法依照中国药典2015版黄芪项下的规定，点样量为2 μL，在硅胶G 薄层板，展开剂为三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液，显示剂为10 %硫酸乙醇溶液，在105 °C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365 nm)下显相同的橙黄色荧光斑点，如图4所示。

(4) 水分测定。 测定的水分为7.8%(<10.0%, 通则0832第2法), 符合规定。

(5) 总灰分测定。测定总灰分为4.5%(<5.0 %，通则2302)，符合规定。

(6) 浸出物测定。 按照水溶性浸出物测定法(通则2201)项下的冷浸法测定浸出物为20.4%，>17.0%，浸出物符合规定。

(a) 日光下

(b) 365 nm紫外光下

1-黄芪甲苷； 2-黄芪药材； 3-贞芪扶正有糖颗粒； 4-贞芪扶正无糖颗粒

(7) 黄芪甲苷含量测定。 按照高效液相色谱法(通则0512)测定。根据中国药典2015版黄芪项下黄芪甲苷含量测定项规定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32∶68)为流动相；蒸发光散射检测器检测。 本品按干燥品计算，黄芪甲苷(C41H68014)平均含量为0. 051%，>0.040%，说明黄芪药材中黄芪甲苷的含量符合规定，如图5所示。

图5 黄芪药材中黄芪甲苷的HPLC图(ELSD检测器)

(8) 毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定。 按照高效液相色谱法(通则0512)测定。根据中国药典2015版黄芪项下毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定规定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A ，以0.2 %甲酸溶液为流动相B，0～20 min，流动相A 20%匀速上升至40%，20～30 min，流动相A40%，等度洗脱；检测波长为260 nm。 本品按干燥品计算，毛蕊异黄酮葡萄糖苷(C22H22O10) 平均含量为0.033%，>0.020%，说明黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量符合2015版药典规定，如图6所示。

图6 黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的HPLC图(DAD检测器)

2.2 女贞子的检验[14]

实验所用女贞子为木犀科植物女贞LigustrumlucidumAit. 的干燥成熟果实。

(1) 性状鉴别。学生可根据中国药典要求认识女贞子的性状。

(2) 粉末特征鉴别[14]。通过此实验学生可观察到女贞子的种皮细胞、内果皮纤维等粉末特征(见图7)，从而将药用植物学、生药学的一些技术和方法应用实践中。

图7 女贞子粉末特征图

(3) 化学鉴别[14]。依照中国药典女贞子项下的鉴别方法检验，对供试品溶液和对照品溶液进行制备，照薄层色谱法(通则0502)试验，点样量为1 μL，薄层板为硅胶G板，展开剂为三氯甲烷-甲醇-甲酸(40∶1∶1)，显色剂为10% 硫酸乙醇溶液，在110 °C加热至斑点显色淸晰。如图8所示，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(4) 杂质、水分和总灰分检查。检査杂质为2.4%(<3 %,通则2301)；水分为5.6%(<8.0 %,通则0832第2法)；总灰分为4.5%(<5.5%,通则2302)。杂质、水分和总灰分全部符合规定。

(5) 浸出物测定。按照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，用30 %乙醇作溶剂，醇浸出物为30.4%(>25.0%)，符合规定。

图8 女贞子药材TCL图

(6) 含量测定。 按照高效液相色谱法(通则0512)测定[14]。依照中国药典女贞子项下含量测定方法，以甲醇-水(40∶60)为流动相；检测波长为224 nm。本品按干燥品计算，特女贞苷(C31H42017)的平均含量为1.32%(>0.70%)，说明女贞子药材中特女贞苷的含量符合规定，如图9所示。

图9 女贞子药材的HPLC图(DAD检测器)

3 贞芪扶正颗粒的制备及检测

3.1 制 法[15]

黄芪和女贞子，加水煎煮3次，合并煎液，过滤，滤液浓缩，干燥，加辅料适量，制成颗粒，干燥，分装。

3.2 性 状

本品为黄棕色颗粒；味甜(含糖型)或味微苦(无糖型)。

3.3 鉴 别

取含量测定项下的供试品溶液，用黄芪药材的薄层鉴别条件展开和显色。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365 nm)下显相同的橙黄色荧光斑点(见图4)。

3.4 检 查

应符合颗粒剂项下有关的各项规定(附录IC)。

(1) 粒度照粒度和粒度分布测定法。(通则0982第二法双筛分法)测定，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15%，制备的有糖和无糖颗粒均符合规定。

(2) 水分。中药颗粒剂照水分测定法(通则0832)测定，有糖颗粒的水分为7.1%，无糖颗粒的水分为6.4%，均不超过8.0%，符合规定。

(3) 贞芪扶正有糖及无糖颗粒的溶化性均符合规定。

3.5 含量测定[16]

(1) 色谱方法[16]。SpursilTM C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈和水，梯度洗脱；柱温30℃；检测波长为254 nm；流速为1.0 mL/min；进样量：20 μL； ELSD温度为112.8 ℃，载气流速3.2 L/min。色谱图见图10、11。

图10 贞芪扶正颗粒与药材及对照品的HPLC-DAD图(254 nm)

图11 贞芪扶正颗粒与各对照品的HPLC-ELSD图

(2) 样品溶液制备方法[17]。取贞氏扶正颗粒约15 g(无糖型5 g)，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加甲醇150 mL溶解，加氨水15 mL，超声波1 h，滤过，滤液浓缩至干，加20 mL水溶解后，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度。

(3) 制剂含量测定。本品有糖颗粒每袋黄芪甲苷(C41H68O14)平均含量为1.23 mg，无糖颗粒每袋黄芪甲苷(C41H68O14)平均含量为1.24 mg，均>0.6 mg，说明制剂含量测定合格。

(4) 含量测定。采用HPLC-DAD-ELSD连用技术，可同时测定黄芪甲苷、特女贞苷和毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷3种成分含量。通过色谱峰的变化可比对原料药与制剂的化学成分变化。

4 实验效果与讨论

贞芪扶正颗粒的一体化综合实验是按照药学技术的系统性和内在联系组织实验教学，从中药材原生物状态到制成药品的全过程，体现药物研究、开发、应用的规律性以及技能的实用性，使学生了解并掌握药物研究的基本过程和操作方法。

本项目从中药原生植物黄芪和女贞子的认识开始，到生产到合格的药品截止，共分为若干个阶段。该实验可以将药用植物学与生药学、天然药物化学、药物分析学、中药制剂分析、药剂学等各门课程串联起来，培养学生掌握知识的综合能力以及对综合知识的应用能力。

目前贞芪扶正颗粒试行卫生部药品标准中药成方制剂标准，含量测定方法使用薄层扫描法测定黄芪甲苷含量，而本项目采用HPLC法测定黄芪甲苷含量，比法定标准先进和准确。

学生通过对文献的查阅；按照国家标准对原料药黄芪和女贞子进行检验，合格后才能对其进行煎煮提取，浓缩成稠膏，干燥，加一定辅料，制成颗粒，检验合格后，才能成为贞芪扶正颗粒的药品。在实验过程中，通过药物分析技术及时获取产品质量信息，保证实验方法设计合理、实验产品质量合格。 其中贞芪扶正颗粒的制备作为一体化实验的主线，是整个实验的汇聚点。

在实验室条件下制备颗粒，由于实验室的洁净度不够，因此制剂中微生物检验可能不合格，但制得的制剂并不食用，只是注重培养学生了解和掌握药品生产的全过程。尽管由于实验室条件达不到药品生产的条件，有一些缺点，但通过该项目的建设，打破了传统的药学实验教学模式，使各自为政的隶属于不同研究所的师资人员得到整合；学生对各种药学专业仪器设备的使用与操作，使隶属于各个研究所的仪器资源得到共享。

因为实验所用的黄芪药材购买时有重金属及有机氯农药残留的限量报告，其符合2015版药典规定。且一体化实验课时有限，所以此项目没有设计黄芪药材重金属及有机氯农药残留的检查项目。

5 结 语

该一体化实验无论从内容、方法的组合，实验手段的更新，还是知识面的扩展，都比传统实验优越，对学生巩固所学知识、培养创新精神、提高动手能力及解决问题的能力等方面都有很大促进。它是基于教学大纲的要求，在一个集中的时间内对所学知识进行系统化的汇总和串联，学生通过实验巩固了在前几个学期所学的专业课程，起到总复习的作用，并从药学学科的整体层面理解科学研究的方法，有利于学生毕业实习和毕业前进行的课题设计，有利于学生在以后的工作岗位或学习深造中快速上手和操作。