急性髓系白血病患者血清sPD-L1、VEGF表达及相关性

吴福群 阴常欣 邓绍团 牛诗琼 余建华 姚达娜

[摘要] 目的 探討急性髓系白血病患者血清可溶性程序性死亡因子配体-1（sPD-L1）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达及相关性。 方法 选择2015年1月～2018年1月广东省东莞康华医院（以下简称“我院”）收治的89例急性髓系白血病患者为研究对象，纳入观察组，另选取我院同期进行健康体检的健康受试者50名为对照组。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测两组受试者的sPD-L1、VEGF水平，并进行组间比较。对观察组患者进行2个月标准化治疗，根据疗效判断标准将患者分为完全缓解（CR）组36例、部分缓解（PR）组40例和未缓解（PD）组13例，对三组患者的sPD-L1、VEGF水平进行检测比较，并对sPD-L1与VEGF的相关性进行分析探讨。 结果 治疗前，观察组患者sPD-L1、VEGF水平均显著高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。观察组经治疗后，CR组和PR组患者sPD-L1、VEGF水平均显著低于PD组，且CR组患者sPD-L1、VEGF水平低于PR组，差异有统计学意义（P < 0.05）。经Pearson相关性检验分析，患者治疗前、治疗后血清sPD-L1与VEGF均呈显著的正相关性（r = 0.447、0.327，均P < 0.05）。 结论 急性髓系白血病患者sPD-L1、VEGF呈现高表达，随着预后效果的好转，其表达水平不断降低。因此，sPD-L1、VEGF水平的检测对于急性髓系白血病的诊治和预后评估有一定辅助作用和临床价值。

[关键词] 急性髓系白血病;可溶性程序性死亡因子配体-1;血管内皮生长因子;相关性

[中图分类号] R773.71          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）07（b）-0076-05

Expression and correlation of serum sPD-L1 and VEGF in patients with acute myeloid leukemia

WU Fuqun1，2   YIN Changxin3   DENG Shaotuan2   NIU Shiqiong2   YU Jianhua1   YAO Da′na1

1.Department of Hematology， Dongguan Kanghua Hospital， Guangdong Province， Dongguan   523080， China; 2.Department of Laboratory， the Seventh Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University， Guangdong Province， Shenzhen   518107， China; 3.Department of Hematology， Nanfang Hospital of Southern Medical University， Guangdong Province， Guangzhou   510515， China

[Abstract] Objective To investigate the expression and correlation of serum soluble programmed death ligand 1 （sPD-L1） and vascular endothelial growth factor （VEGF） of patients with acute myeloid leukemia. Methods Eighty-nine patients with acute myeloid leukemia admitted to Dongguan Kanghua Hospital （“our hospital” for short） from January 2015 to January 2018 were selected as research objects and enrolled into observation group， and 50 healthy subjects who underwent health examination in our hospital during the same period were selected as the control group. The sPD-L1 and VEGF levels of the two groups were detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and compared between the two groups. The patients in the observation group were treated with standardized therapy for 2 months， according to the criteria of curative effect， the patients were divided into complete remission （CR） group （36 cases）， partial remission （PR） group （40 cases） and proceed （PD） group （13 cases）， and the levels of sPD-L1 and VEGF in the three groups were detected and compared. The correlation between sPD-L1 and VEGF was also analyzed. Results Before treatment， the levels of sPD-L1 and VEGF in the observation group were significantly higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P < 0.05）. After treatment， the levels of sPD-L1 and VEGF in CR group and PR group were significantly lower than those in PD group， and the levels of sPD-L1 and VEGF in CR group were lower than those in PR group， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Pearson correlation test showed that sPD-L1 was positively correlated with VEGF （r = 0.447， 0.327， all P < 0.05）. Conclusion The expression of sPD-L1 and VEGF in acute myeloid leukemia patients is high， and the levels of sPD-L1 and VEGF are decreased with the improvement of prognosis. Therefore， the detection of sPD-L1 and VEGF has certain assistant effects and clinical value for the diagnosis， treatment and prognosis evaluation of acute myeloid leukemia patients.

[Key words] Acute myeloid leukemia; Soluble programmed death ligand 1; Vascular endothelial growth factor; Correlation

白血病是一类恶性血液系统疾病，是由于患者造血干细胞的恶性增殖、分化障碍、凋亡受阻，而使恶性增殖的造血干细胞在骨髓和其他造血组织中大量聚集，并进一步转移侵入其他非造血组织及旁系器官，并严重危及患者的生命[1]。急性髓系白血病是众多白血病分型中的一種，该类白血病主要以髓系造血干细胞恶性增殖为主，以骨髓与外周血中原始和幼稚髓性细胞异常增生为主要特征。患者发病后临床表现为贫血、自发性出血、感染、代谢异常、器官衰竭直至危及患者生命。近年来流行病学调查显示，该病的发病率约占白血病的30%，且婴幼儿童也是该病的高发人群，其恶性程度相比于其他白血病更高，表现为患者5年生存率低于其他白血病患者[2-3]。当前，该病的治疗难度仍然艰巨，研究人员对其关注度逐渐提高，对其发生机制的研究也在不断深入。多数报道显示，急性髓系白血病发病与机体内的血管再生能力、相关细胞的凋亡能力有密切关系[4]。血清可溶性程序性死亡因子配体-1（soluble programmed death ligand 1，sPD-L1）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）则是具有代表性的能够调控机体血管再生、细胞凋亡的生物蛋白标志物，其水平值的改变能够反映机体新生血管、细胞凋亡能力[5-6]。为此，本研究对急性髓系白血病患者的血清sPD-L1、VEGF进行检测分析，探讨sPD-L1、VEGF在患者体内的表达情况，以期为急性髓系白血病患者发病机制的研究提供帮助，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年1月～2018年1月广东省东莞康华医院（以下简称“我院”）收治的89例急性髓系白血病患者为研究对象，纳入观察组，其中男48例，女41例;年龄10～69岁，平均（45.37±13.89）岁;FAB分型：M1型18例，M2型23例，M3型20例，M4型10例，M5型18例。纳入标准：①患者符合《急性髓系白血病治疗的专家共识（第一部分）》[7]中关于急性髓系白血病的诊断标准，并经检查确诊为急性髓系白血病患者;②患者签署知情同意书，研究方案经医院伦理学委员会批准。排除标准：①确诊为其他类型的白血病患者;②妊娠或哺乳期妇女，精神状态异常患者;③并发全身性疾病、恶性肿瘤疾病患者;④患者入组前已接受相关药物治疗者。另选取同期在我院进行健康体检的健康受试者50名为对照组，其中男28名，女22名;年龄15～72岁，平均（47.68±15.31）岁。两组受试者性别、年龄等基础资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.2 检测方法

两组受试者在入院时采集空腹静脉血约5 mL，加入到含有抗凝剂的抗凝管中，采用TG12M型高速离心机（盐城市凯特实验仪器有限公司）进行离心，3000 r/min，离心10 min（离心半径13.5 cm），分离得到血清，采用酶联免疫吸附法（ELISA）对每位受试者的血清sPD-L1、VEGF水平进行检测，相关ELISA诊断试剂盒购置于北京博尔迈生物技术有限公司（生产批号：20141126），操作步骤严格按照说明书进行。观察组患者在经过2个疗程的标准化治疗后，采集患者的空腹静脉血，按上述同样操作方法检测患者血清中sPD-L1、VEGF水平。

1.3 观察指标与疗效判定标准

1.3.1 对观察组和对照组入院时sPD-L1、VEGF检测的水平值进行统计对比。

1.3.2 观察组患者经急性髓系白血病标准化治疗后，评价患者的治疗效果，按疗效将患者分为完全缓解（CR）组36例、部分缓解（PR）组40例和未缓解（PD）组13例。

1.3.3 临床疗效判断标准[8]。①CR组，患者骨髓象：原粒细胞Ⅰ型+Ⅱ型（原单+幼单或原淋+幼淋）≤5%，红细胞及巨核细胞正常。血象：血红蛋白>100 g/L，血小板>100×109/L，中性粒>1.5×109/L，外周血分类中无白血病细胞。临床表现：无白血病浸润所致的症状和体征，生活正常或接近正常。②PR组，患者原幼稚细胞在5%～20%之间;或临床表现、血象2项中有一项未达上述标准者。③PD组，患者骨髓象、血象及临床表现3项均未达上述标准者。

1.3.4 对CR、PR、PD三组患者的sPD-L1、VEGF水平进行统计比较。采用Pearson检验对患者的外周血sPD-L1与VEGF水平间的相关性进行统计分析。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件进行数据处理与分析。计量资料符合正态分布，采用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析，多重比较采用LSD-t检验。此外，采用Pearson相关检验进行指标间的相关性分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组治疗前各项指标水平比较

治疗前，观察组患者sPD-L1、VEGF水平均显著高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 观察组治疗后不同疗效患者各项指标水平比较

整体比较（单因素方差分析）知：各指标整体差异均有统计学意义（P < 0.05）。多重比较并结合主要数据分析：观察组患者经治疗后，CR组和PR组患者的sPD-L1、VEGF水平均显著低于PD组，且CR组患者sPD-L1、VEGF水平低于PR组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

2.3 sPD-L1与VEGF相关性分析

将本研究89例急性髓系白血病患者的sPD-L1与VEGF资料，按治疗前和治疗后分别进行Pearson相关检验，结果sPD-L1与VEGF均呈显著的正相关性（r = 0.447、0.327，P = 0.000、0.002）。见图1。

3 讨论

急性髓系白血病相比于其他白血病危害程度更高，发病急促且病情进展迅速，临床治疗的难度颇大，促使着研究人员对其进行进一步的深入研究，其发病机制也逐渐明朗化[9]。通过对一些生物标志物和生物活性因子的检测，初步发现急性髓系白血病患者体内增殖的异常造血干细胞凋亡過程受阻，另外新生血管的不断生成增加了造血干细胞养分的供给，为恶性造血干细胞的异常增生提供了便利条件，从而使得患者的造血功能被破坏[10-11]。随着研究的不断深入，人们发现在急性髓系白血病患者体内的异常造血干细胞增殖及凋亡过程中有多种生物细胞因子参与[12]。其中sPD-L1能够反映机体细胞凋亡状态，VEGF则是经典的评价患者新生血管形成的主要标志物[13-14]。因此，对急性髓系白血病患者sPD-L1、VEGF水平的检测分析，对于急性髓系白血病发病机制的研究及临床疾病的诊断治疗有重要的辅助作用。

本研究对急性髓系白血病患者与健康体检者的sPD-L1、VEGF水平进行检测分析，结果显示观察组患者的sPD-L1、VEGF水平均显著高于对照组，提示急性髓系白血病的发生可能与患者体内血清sPD-L1、VEGF水平有关。在患者经过2个疗程的标准化治疗后，CR组和PR组患者的sPD-L1、VEGF水平均显著低于PD组，且CR组患者sPD-L1、VEGF水平低于PR组，提示患者sPD-L1、VEGF水平的改变与患者的预后效果显著相关。随着患者预后效果的好转，sPD-L1、VEGF水平则依次降低。出现以上结果主要是因为，sPD-L1是一种跨膜转运糖蛋白，广泛存在于淋巴细胞等实体瘤细胞中[15-16]。sPD-L1在功能上与程序性细胞死亡受体（PD-L1）基本相似，其在机体内水平的升高可以更多地与PD-1受体结合，抑制患者T细胞活化，导致机体正常的免疫系统受到抑制，从而导致肿瘤细胞及白血病患者恶性增殖的造血干细胞逃过免疫杀伤，细胞的凋亡过程受阻，进一步导致急性髓系白血病患者的病情发生和加重[17-18]。VEGF是一种高效特异性促血管生成因子，又称之为血管通透因子，通过酪氨酸激酶受体产生作用，促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移增殖和血管形成[19-23]。VEGF水平的升高，可刺激白血病患者血液恶性肿瘤有丝分裂反应加快，并促进白血病恶性造血干细胞、祖细胞的自我更新，为异常增殖的恶性造血干细胞不断地提供增殖所需的养分[24-25]，从而促进急性髓系白血病病情的进展。根据以上两点研究的结果，推测急性髓系白血病患者可以采用PD-L1抑制剂和VEGF抑制剂进行药物治疗，这为此类疾病的临床治疗提供新的思路。

在相关性分析中，急性髓系白血病患者治疗前、后的sPD-L1与VEGF水平间呈明显的正相关性，提示影响肿瘤等恶性细胞生长的内部微环境（如sPD-L1）与恶性细胞增殖的外部环境（如VEGF）间密切相关，这是因为VEGF为白血病细胞的生存及发展提供了土壤，促进其不断分泌sPD-L1，而sPD-L1通过帮助白血病细胞逃避机体的抗肿瘤免疫，进而促进疾病的发展，故sPD-L1与VEGF间呈相辅相成的关系发展。此外本研究样本含量较小，后续将收集更多的样本进行研究，以期明确上述各指标在急性髓系白血病的诊治和预后中的评估价值。

综上所述，急性髓系白血病患者sPD-L1、VEGF呈现高表达，随着预后效果的好转，其表达水平不断降低。因此，sPD-L1、VEGF水平的检测对于急性髓系白血病的诊治和预后评估有一定的辅助作用和临床价值。

[参考文献]

[1]  梁立莉，黄丹，谢淑琼，等.浅谈急性髓系白血病的诊疗进展[J].世界最新医学信息文摘，2016，16（23）：65.

[2]  郑玉婷，李冰霞，孙玉晶，等.急性髓系白血病患者骨髓中WT1的表达及其对预后的影响[J].中国实验血液学杂志，2016，24（3）：649-654.

[3]  黄婷，杨桂玲.MicroRNA-21在急性髓系白血病骨髓细胞中的异常表达及意义[J].西安交通大学学报：医学版，2016，37（1）：98-102.

[4]  Chen Y，Li M，Liu J，et al. sPD-L1 expression is associated with immunosuppression and infectious complications in patients with acute pancreatitis [J]. Scand J Immunol，2017，86（2）：100-106.

[5]  朱荷艳，李慧慧.MicroRNA-145在急性髓系白血病患者中的表达及意义[J].重庆医学，2016，30（3）：377-379.

[6]  张桂华，徐金格，张秋荣，等.淋巴增强因子1在中危急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义[J].白血病·淋巴瘤，2017，26（3）：156-160.

[7]  中华医学会血液学分会白血病学组.急性髓系白血病治疗的专家共识（第一部分）[J].中华血液学杂志，2009，30（6）：429-431.

[8]  Cheson BD，Bennett JM，Kopecky KJ，et al. Revised recommendations of the International Working Group for Diagnosis，Standardization of Response Criteria，Treatment Outcomes，and Reporting Standards for Therapeutic Trials in Acute Myeloid Leukemia [J]. J Clin Oncol，2003，21（24）：4642-4649.

[9]  王晓雪，富威，梁颖，等.miR-148b在急性髓系白血病患者及细胞系中的表达与生物学功能[J].现代肿瘤医学，2017，25（3）：340-344.

[10]  韩丽，姚冬明，周静东，等.急性髓系白血病患者NKD1基因的表达及其临床意义[J].江苏大学学报：医学版，2016，26（6）：499-503.

[11]  黄春燕，查显丰，温旺荣.急性髓系白血病相关循环肿瘤标志物的临床应用[J].国际检验医学杂志，2018，49（10）：1212-1214.

[12]  Baker LC，Boult JK，Thomas M，et al. Acute tumour response to a bispecific Ang-2-VEGF-A antibody：insights from multiparametric MRI and gene expression profiling [J]. Br J Cancer，2016，115（6）：691-702.

[13]  吴梦茹，朱玥洁，赵静，等.不明原因反复性流产患者血清中sPD-1和sPD-L1与相关细胞因子的水平变化[J].免疫学杂志，2015，37（7）：603-607.

[14]  黄萍，郭俐宏，陈少秀.丹槐银屑浓缩丸对银屑病模型兔血管内皮生长因子及其受体表达的影响[J].国际中医中药杂志，2016，38（4）：345-349.

[15]  López-Cancio E，Ricciardi AC，Sobrino T，et al. Reported PreStroke Physical Activity is Associated with VEGF Expression and Good Outcomes after Stroke [J]. J Stroke Cerebrovasc Dis，2016，26（2）：425-430.

[16]  Lee SE，Lee JY，Han AR，et al. Effect of High VEGF-C mRNA Expression on Achievement of Complete Remission in Adult Acute Myeloid Leukemia [J]. Transl Oncol，2018，11（3）：567-574.

[17]  桂萍，宋盈，郭光云.恩度聯合顺铂腔内化疗对中晚期非小细胞肺癌患者外周血sPD-L1、CEA水平的影响[J].临床肺科杂志，2017，22（7）：1218-1221.

[18]  Wang J，Gao X，Du S，et al. Aqueous humor concentration of VEGF and retinal oxygen saturation after unilateral acute primary angle closure [J]. Acta Ophthalmol，2016， 94（4）：380-385.

[19]  秦晓铧，陈小宇，洪雅萍，等.急性髓系白血病精准诊疗模式的优化与探讨[J].中国医药科学，2018，8（1）：191-193，210.

[20]  张纯，董航，赵悦荣，等.急性髓系白血病患者血清中sPD-L1、VEGF的表达及意义[J].海南医学院学报，2018， 24（4）：512-515.

[21]  卢业健，邱兰兰，王莉莉，等.CD38在M2型急性髓系白血病预后分层中的意义[J].中国医药导报，2017，14（15）：10-13.

[22]  孙伟玲，郑丹丹，周永明，等.定清片对人急性髓系白血病HL-60细胞侵袭力的影响[J].西部中医药，2018，31（6）：10-12.

[23]  Shirzad R，Shahrabi S，Ahmadzadeh A，et al. Signaling and molecular basis of bone marrow niche angiogenesis in leukemia [J]. Clin Transl Oncol，2016，18（10）：1-15.

[24]  Lopes-Coelho F，Nunes C，Gouveia-Fernandes S，et al. Monocarboxylate transporter 1（MCT1），a tool to stratify acute myeloid leukemia（AML）patients and a vehicle to kill cancer cells [J]. Oncotarget，2017，8（47）：2803-2823.

[25]  Celik H，Koh WK，Kramer AC，et al. JARID2 Functions as a Tumor Suppressor in Myeloid Neoplasms by Repressing Self-Renewal in Hematopoietic Progenitor Cells [J]. Cancer Cell，2018，34（5）：741-756.e8.