Rho GTP酶结合蛋白2基因表达与卵巢癌的预后关系及机制分析

黄丹　周航　郑建清

【摘要】 目的：探讨卵巢癌组织Rho GTP酶结合蛋白2（RHPN2）表达变化与卵巢癌预后的关系。方法：用Kaplan-Meier plotter数据库分析卵巢癌组织和正常组织中RHPN2基因表达的差异，并分析不同RHPN2基因表达状态下卵巢癌的总生存差异，探索RHPN2基因表达的预后价值。

结果：Kaplan-Meier plotter数据库包含了1 653个病例样本。数据分析结果显示正常卵巢组织中RHPN2基因低表达，卵巢癌组织中RHPN2基因高表达。根据预设的截断值，308例为高表达组，347例患者为低表达。RHPN2基因低表达组卵巢癌中位总生存时间为52.03个月，高表达组为35.53个月，差异有统计学意义[风险比（HR）=1.47，95%CI（1.2，1.8），P=0.001]。结论：RHPN2基因高表达是降低卵巢癌总生存的不良预后因素。

【关键词】 卵巢癌; RHPN2; Kaplan Meier plotter数据库; 生存分析; 预后因素

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.19.069 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2019）19-0-02

Relationship between Expression of Rho GTPase-binding Protein 2 Gene and Prognosis of Ovarian Cancer and Its Mechanism/HUANG Dan，ZHOU Hang，ZHENG Jianqing.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（19）：-153

【Abstract】 Objective：To investigate the relationship between the expression of Rho GTPase binding protein 2（RHPN2） in ovarian cancer and its prognosis value.Method：The Kaplan-Meier plotter database was used to analyze the difference of RHPN2 gene expression in ovarian cancer tissues and normal tissues，and the total survival difference of ovarian cancer under different RHPN2 gene expression status was analyzed.The prognostic value of RHPN2 gene expression was explored.Result：The Kaplan-Meier plotter database contained 1 653 case samples.The results of data analysis showed that the RHPN2 gene was down-regulated in normal ovarian tissues，and the RHPN2 gene was highly expressed in ovarian cancer tissues.According to the preset cut-off value，308 cases were included in high expression group and 347 cases in low expression group.The median survival time of ovarian cancer in the low expression group of RHPN2 gene was 52.03 months，and that in the high expression group was 35.53 months，the difference was statistically significant[hazard ratio（HR）=1.47，95%CI（1.2，1.8），P=0.001].Conclusion：High expression of RHPN2 gene is a poor prognostic factor for reducing the overall survival of ovarian cancer.

【Key words】 Ovarian cancer; RHPN2; Kaplan-Meier plotter database; Survival analysis; Prognostic factors

First-authors address：Affiliated Hospital of Zunyi Medical College，Zunyi 563003，China

卵巢癌（ovarian cancer，OC）是最常見的妇科恶性肿瘤之一，在女性生殖器官恶性肿瘤中，卵巢癌的发病率占第三位，仅次于宫颈癌及子宫内膜癌，但由于早期诊断困难和化疗耐药，且易发生腹腔种植转移或累及肠道等，卵巢癌的死亡率居第一位，其五年生存率仅为30%左右[1]。45%～60%的病理确诊为卵巢癌的患者最终将死于卵巢癌[2-3]。卵巢癌的病因尚不十分明确，可能与遗传因素、内分泌因素等有关，近年来研究发现，卵巢癌的发生、发展与多种基因的突变、失活、表达异常有关。Rho GTP酶结合蛋白2（Rho GTPase binding protein 2，RHPN2）基因，即rhophilin2，定位于染色体19q12-13，是一种RhoA结合蛋白，但其生物学功能仍然模糊不清[4]。目前关于RHPN2功能的研究较少，而且尚无RHPN2与卵巢癌关系的报道，更不清楚RHPN2基因与卵巢癌预后的关系。本研究利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析卵巢癌组织RHPN2基因表达变化及其与卵巢癌预后的关系，并探索RHPN2基因在肿瘤生物学行为中的机制，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本文的数据分析是基于网络数据库进行的大数据分析，数据来源于Kaplan-Meier在线数据库（http：//kmplot.com/analysis）。目前该Kaplan-Meier数据库提供了1 648例卵巢癌患者的基因表达结果和生存资料，其中有655例患者提供了RHPN2基因的长期随访资料。使用者可以利用该数据库实现目的基因表达水平与肿瘤患者的总生存（OS）和无进展生存（PFS）的相关性分析[5]。

1.2 方法

卵巢癌组织RHPN2基因表达变化与卵巢癌预后关系数据分析的设定条件，（1）肿瘤类型：Ovarian Cancer;（2）目的基因：RHPN2，基因官方代码为：227196_at（Affy ID）;（3）基因表达分组条件：系统自行选择最佳截断值;其他设定为数据库默认设定。

1.3 观察指标

主要观察指标为RHPN2表达结果、不同RHPN2表达下卵巢癌患者的总生存（OS）。

1.4 统计学处理

利用KM plotter在线数据库通过R语言直接获得Kaplan-Meier生存曲线图，该生存曲线同时提供主要计算结果，包括组间风险比（HR）及其95%置信区间（95%CI）和相应P值。总生存时间以中位生存时间提供，单位为个月，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 数据检索结果

共检出5个正常组织样本和1 648个卵巢癌组织样本。正常组织RHPN2基因中位表达105（表达范围80～192），显著低于癌组织的中位表达1 606（表达范围20～20 059），差异有统计学意义（P=0.001）。共有655例带有RHPN2基因检测结果的卵巢癌患者具有长期随访结果。纳入分析的卵巢癌组织中RHPN2基因表达的截断值为1 704，根据预设的截断值，308例为高表达组，347例患者为低表达。

2.2 总生存结果

RHPN2基因低表达组卵巢癌中位总生存时间为52.03个月，高表达组为35.53个月，RHPN2基因高表达组预后显著差于低表达组，差异有统计学意义[HR=1.47，95%CI（1.2，1.8），P=0.001]，总生存曲线见图1。

3 讨论

在本文中，笔者旨在探索人类Rhophilin-2基因的预后价值。Rhophilin-2是一种在人体内普遍表达的Rho结合蛋白，是Rhophilin家族的新成员。 研究者首次在老鼠体内发现了一种可以和Rho蛋白GTP酶分子结合的蛋白，将其命名为RHPN1，而后在人体内也发现了一种与RHPN1高度同源，结构相似的Rho结合蛋白，将其命名为RHPN2，即Rhophilin-2。Rhophilin-2和Rhophilin-1的结构域结构具有49%的氨基酸同源性。Rhophilin-1和Rhophilin-2的Rho结合结构域内的氨基酸相似性也与它们观察到的RhoA结合特性相关。研究实验发现，Rhophilin-1和Rhophilin-2与GDP和GTP结合的RhoA结合，但不与其他相关的GTP酶如Rac1或RhoE结合。此外，Rhophilin-2的Rho结合位点中的双点突变有效地阻断了与GDP-和GTP-结合的RhoA的结合[6]。Danussi等[7]通过Multi-Reg技术鉴定了RHPN2，证实rhophilin-2是一种具有间充质特征的新型驱动基因。试验随访确定RHPN2促进神经干细胞（neural stem cells，NSC）的间充质转化，并增加不同神经胶质瘤细胞模型中肿瘤细胞的迁移和侵袭。重要的是，RHPN2扩增和过表达显著降低胶质瘤患者存活率，研究支持这种蛋白质参与恶性胶质瘤的侵袭性的特征[7]。目前，研究者多种恶性肿瘤，包括恶性脑胶质瘤[7]、乳腺癌[8]、结直肠癌[9]、肺癌[10]中发现RHPN2有不同程度的高表达。然而在卵巢中仍然很少见到与Rhpn2相关的研究报道[11]。

笔者利用Kaplan-Meier在线数据库，获得了大样本数据资料，结果发现，正常组织RHPN2基因中位表达105（表达范围80～192），显著低于癌组织的中位表达1 606（表达范围20～20 059），差异有统计学意义（P=0.001）。与蔡圣芸[11]的研究结果相似，其通過提取卵巢癌细胞的总RNA进行RT-PCR试验，检测RHPN2的表达情况，结果显示，在卵巢癌临床样本中，阳性率为45.83%（11/24），表达水平显著高于癌旁组织的20.83%（5/24），差异有统计学意义（P<0.05）[11]。此外，笔者发现，RHPN2基因低表达组卵巢癌中位总生存时间为52.03个月，高表达组为35.53个月;差异有统计学意义[HR=1.47，95%CI（1.2，1.8），P=0.001]。从生存曲线图可以看出，RHPN2基因高表达预后显著差于低表达。而这个结论与何嘉曦等[10-12]的发现相似，RHPN2高表达者比RHPN2低表达或表达阴性者生存期和无瘤生存期均明显延长，提示RHPN2基因表达水平的高低可预测卵巢癌患者的预后。

综合上述文献资料和笔者的研究结果，认为RHPN2基因高表达是降低卵巢癌总生存的不良预后因素之一，但是否可以作为卵巢癌预后的独立影响因素，还需要进一步的研究证实。

参考文献

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[10]何嘉曦.RHPN2通過调控Notch通路在肺腺癌中促进肿瘤生成[D].广州：广州医科大学，2016.

[11]蔡圣芸.卵巢癌预后相关新基因的鉴定及其功能研究[D].上海：第二军医大学，2016.

[12] Barger C J，Zhang W，Sharma A，et al.Expression of the POTE gene family in human ovarian cancer[J].Sci Rep，2018，8（1）：17136.

（收稿日期：2019-02-26） （本文编辑：郎序莹）