肠道病毒性脑炎儿童外周血NK细胞、T淋巴细胞亚群及相关细胞因子水平的变化

李永春，李小芹，张迎辉

1. 郑州大学附属儿童医院，河南省儿童医院，郑州儿童医院消化科，郑州 450000 2.郑州大学附属儿童医院，河南省儿童医院，郑州儿童医院肾病科，郑州 450000

病毒性脑炎是常见的中枢神经系统感染性疾病，常年均可发生，有时呈暴发流行，临床表现为发热、头痛、腹泻、恶心等，严重者出现意识障碍、脑膜刺激征等，甚至死亡，存活者也可能存在不同程度后遗症[1-2]。病毒性脑炎病原学包括肠道病毒、疱疹病毒、腮腺炎病毒等，其中，80%以上可明确病原学的病毒性脑炎由人类肠道病毒引起，儿童为高发人群[3]。早期诊断肠道病毒性脑炎(enteroviral encephalitis，EVE)并早期治疗是最有效的减少患儿后遗症发生、死亡的方法。有研究[4]报道，免疫功能紊乱与EVE发生、进展密切相关，因感染而活化的T淋巴细胞可通过血脑屏障进入中枢神经系统，产生大量的炎性介质，介导中枢神经损伤。但目前有关EVE患儿免疫功能的报道相对较少。因此，本研究拟探讨NK细胞、T淋巴细胞亚群水平变化在EVE中的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年10月至2017年10月河南省儿童医院神经科住院的EVE患儿136例，所有患儿符合病毒性脑膜炎诊断标准[5]，脑脊液肠道病毒核酸检测阳性，咽拭子、粪便等标本肠道病毒核酸检测阳性，伴随出现头痛、发热(≥37.5℃)、呕吐等症状。136例患儿中，男性81例，女性55例，年龄5个月～15岁，平均(5.61±1.71)岁。入院时病情严重程度：轻度91例，重度45例，其中2例轻度患儿入院后病情由轻转重。出院时12例遗留神经系统功能障碍，2例死亡。选取同期门诊体检的年龄、性别相匹配的健康儿童90例作为对照组，男性59例，女性31例，年龄4个月～13岁，平均(5.27±1.55)岁。所有研究对象均排除合并其他免疫系统疾病；入组前30 d有免疫抑制剂、皮质激素使用史；严重肝肾功能障碍；近期有输血史。

1.2 治疗方法及预后评估 EVE患儿入院后给予抗病毒治疗、20%甘露醇降颅内压治疗，根据患儿症状给予对症治疗，高热者用物理降温、药物降温，惊厥用安定、苯巴比妥肌注；病情严重者给予甲基强的松龙(辉瑞制药有限公司，MG0629200509)冲击治疗、静脉注射用丙种球蛋白(成都蓉生药业有限责任公司，S19993042)等治疗。以出院时未出现神经系统功能异常为预后良好，出院时遗留神经系统功能障碍或死亡为预后不良。

1.3 标本采集及检验 标本采集均经患儿家属知情同意。EVE组患儿于入院第2天采集空腹静脉血5 mL，对照组患儿于体检当天采集空腹静脉血5 mL，采用美国BD公司FACS Calibur流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群(CD4+细胞、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值)和NK细胞水平，试剂盒购自美国BD公司；采用放射免疫分析法检测相关细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α水平，试剂盒均购自上海信帆生物科技有限公司。本研究经医院伦理委员会审核批准。

2 结 果

2.1 预后情况分析 136例EVE患儿，122例(89.71%)预后良好，患儿头痛、发热、呕吐等临床症状完全或基本消失，肌力与肢体功能基本恢复正常，未遗留后遗症。14例(10.29%)预后不良，患儿头痛、发热、呕吐等临床症状无明显改善，肌力与肢体功能无好转或加重，有明显后遗症。

2.2 EVE组和对照组T淋巴细胞亚群、NK细胞水平比较 结果(表1)表明：EVE组CD4+T细胞、CD4+/CD8+比值及NK细胞水平低于对照组，CD8+T细胞水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。

指标EVE组(N=136)对照组(N=90)T淋巴细胞(%) CD4+34.61±4.18**41.03±5.37 CD8+25.16±2.66**20.09±2.03CD4+/CD8+1.29±0.82**2.13±1.06NK细胞(%)12.71±3.18**15.97±4.96细胞因子ρB/(pg·mL-1) IL-23.31±1.06**4.23±1.26 IL-642.16±5.31**13.29±3.18 TNF-α3.01±1.52**2.18±1.33

**P<0.01与对照组相比

2.3 EVE组和对照组患儿细胞因子水平比较 结果(表1)表明：EVE组IL-2水平低于对照组，IL-6、TNF-α水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.4 不同预后EVE患儿T淋巴细胞亚群、NK细胞比较 结果(表2)表明：预后良好组CD4+T细胞、CD4+/CD8+比值及NK细胞水平高于预后不良组，CD8+T细胞水平低于预后不良组，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.5 不同预后EVE患儿炎性细胞因子水平比较 结果(表2)表明：预后良好组IL-2水平高于预后不良组(P<0.05)，IL-6、TNF-α水平低于预后不良组，差异有统计学意义(P<0.01)。

指标预后良好(N=122)预后不良(N=14)t值P值T淋巴细胞(%) CD4+36.56±1.0532.01±0.9415.507<0.01 CD8+23.15±2.7128.06±2.346.502<0.01CD4+/CD8+1.61±0.891.12±0.671.9980.048NK细胞(%)13.05±3.5110.58±2.342.5640.012细胞因子ρB/(pg·mL-1) IL-23.59±1.092.94±1.022.1260.035 IL-640.96±4.6450.64±6.337.102<0.01 TNF-α2.81±1.253.62±1.532.2430.027

3 讨 论

EVE全年均可发病，以脑膜脑炎为主要症候群，发病期不仅会侵犯脑部，还常累及心脏、肺、肾等脏器官。EVE可通过唾液、粪便污染物品的密切接触传播，儿童为疾病高发人群，但其临床表现多样而复杂，缺乏特异性，常有误诊、漏诊发生[6]。目前，EVE的发病机制尚未完全明确。随着对免疫机制的深入研究，多项报道[7-8]指出，免疫功能紊乱与中枢神经系统疾病发生密切相关。有研究[9]认为，机体免疫力低下时，肠道病毒进入机体后在淋巴系统内繁殖，继而入侵中枢神经系统，导致变态反应性脑损伤。

外周血淋巴细胞亚群主要包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞，三者共同维持机体免疫稳态。其中，T淋巴细胞在调节人体免疫系统中起重要作用，可分泌多种细胞因子，调节并引起免疫系统中巨噬细胞和B细胞活化等一系列免疫反应。T淋巴细胞按照表面分化群抗原分为CD4+、CD8+两大亚群，其中CD4+T细胞作为辅助性T淋巴细胞，可促进B淋巴细胞和NK细胞功能，分泌IL-2、IL-4、IL-10等免疫抑制因子；CD8+T细胞作为抑制性T细胞，具有靶细胞杀伤抑制功能，CD4+/CD8+比值是反映机体免疫功能的重要指标，CD4+/CD8+比值下降越低，提示免疫功能低下。NK细胞主要分布于外周淋巴器官和血液循环系统，具有抗肿瘤、抗病毒感染、免疫调节等生物学活性。本研究结果发现，与正常对照组相比，EVE组患儿存在免疫功能紊乱，且预后不良组尤为明显(P<0.05)，说明EVE存在广泛的T淋巴细胞亚群、NK细胞数量及功能的降低。Pillai等[10]指出，病毒性脑炎患儿多伴随免疫功能低下，其中，CD4+/CD8+比值与患儿临床结局有关，本研究结果与其一致。

免疫细胞因子具有调节细胞生长、免疫应答和参与免疫反应等多种生物学功能[11]。IL-2由被抗原激活的CD4+、CD8+T细胞产生，生物学功能包括促进T细胞的增殖和分化、增强细胞毒性T细胞和自然杀伤细胞活性的作用。IL-6是由多种淋巴细胞和非淋巴细胞产生，具有广泛的生物学活性，在机体炎性反应、抗感染、自身免疫方面均起重要作用。关于细胞因子变化方面，EVE组IL-2水平低于对照组，IL-6、TNF-α水平高于对照组(P<0.05)，预后不良组变化尤为明显(P<0.05)，说明EVE患儿伴随机体炎症程度加重。有研究[12]报道，与正常儿童相比，肠道病毒71型感染引起的脑炎、手足口病等神经系统疾病患儿，脑脊液和血清中IL-6、TNF-α水平显著上升，与本研究结果一致。

综上所述，与正常对照组相比，EVE患儿外周血CD4+T细胞、CD4+/CD8+比值、NK细胞降低，CD8+T细胞、IL-6、TNF-α水平升高，且可能与患儿预后有关。