石墨炉原子吸收分光光度法测定天然牛黄和酶促牛黄中铬和铅的含量*

徐 滨 柳庆坤 任小荣 齐永秀 李 莉 李 珂

1.药学院，山东第一医科大学(山东省医学科学院)，山东 泰安 271016； 2.泰安市食品药品检验检测中心，山东 泰安 271000

中药中微量元素的研究发展迅速[1]，已有研究表明,中药的药效可能与其微量元素的种类和含量、存在状态以及配位化合物有一定的关系[2]。天然牛黄为一种常用名贵中药，具有镇静抗惊、清心开窍，息风解热、消炎解毒等作用，临床疗效显著。对其研究多集中于天然牛黄与各种替代品(如:人工培植牛黄、人工合成牛黄、牛额齿根等)的比较上。由于天然牛黄的药源十分紧缺，而社会上对牛黄的需求量大，长期以来药学工作者都在努力寻找天然牛黄的替代品。山东第一医科大学相关科研人员研制了一种新的牛黄替代品酶促牛黄[3-6]。酶促牛黄中所含无机元素以及与天然牛黄的无机元素对比分析研究尚无报道，本实验拟对酶促牛黄和天然牛黄进行铬和铅元素对比分析研究。

本实验采用石墨炉原子吸收分光光度法建立了牛黄中铬和铅的含量测定方法，分离效率高，专属性强，灵敏度高，能够为酶促牛黄的研发提供实验依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

Sartorious BT 25S型1/100000电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)，KQ-500DE型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)，AP-01P VACUUM PUMP(天津Autoscience公司)，溶剂过滤器(天津Autoscience公司)，Z2000原子吸收分光光度计，远红外快速恒温干燥箱，空气压缩机，元素Cr、Pb空心阴极灯及玻璃仪器。

1.2 材料和试剂

天然牛黄(山东省药材公司)，酶促牛黄(山东第一医科大学自制)，硝酸(优级纯)，元素Cr、Pb的标准储备液(浓度均为500 μg·mL-1)。

2 实验方法与结果

2.1 对照品溶液的配制

2.1.1铬对照品溶液的配制

分别吸取铬标准储备液置于10 mL容量瓶中，加1%硝酸稀释至刻度，配制成系列浓度为1.00、5.00、10.00、30.00、50.00 μg·mL-1的标准溶液。

2.1.2铅对照品溶液的配制

分别吸取铅标准储备液置于10 mL容量瓶中，加1%硝酸稀释至刻度，配制成系列浓度为10.00、50.00、120.00、180.00、 300.00 μg·mL-1的标准溶液。

2.2 供试品溶液的制备

2.2.1酶促牛黄供试品溶液

称取酶促牛黄约1.0 g，精密称定，置瓷坩埚内于马弗炉中420 ℃烘干、炭化、灰化、灼烧5 h，用1%硝酸溶液溶解残渣，定容于50 mL容量瓶即得酶促牛黄供试品溶液。

2.2.2天然牛黄供试品溶液

称取天然牛黄约1.0 g，精密称定，置瓷坩埚内于马弗炉中420 ℃烘干、炭化、灰化、灼烧5 h，用1%硝酸溶液溶解残渣，定容于50 mL容量瓶即得天然牛黄供试品溶液。

2.3 绘制标准曲线

2.3.1石墨炉原子吸收分光光度法测定的仪器条件见表1。

表1 石墨炉原子吸收分光光度法测定的仪器条件

2.3.2绘制铬标准曲线

吸取“2.1.1”项下系列标准溶液适量，配制成系列浓度为1.00、5.00、10.00、30.00、50.00 μg·L-1的铬对照品溶液。进样测定，得铬的回归方程为y=0.008 9x+0.028 1(r=0.999 0)，表明Cr在1.00～50.00 μg·L-1范围内线性关系良好。

2.3.3绘制铅标准曲线

吸取“2.1.2”项下系列标准溶液适量，配制成系列浓度为10.00、50.00、120.00、180.00、300.00 μg·L-1的铅对照品溶液。进样测定，得铅的回归方程为y=0.002 0x+0.008 9(r=0.999 1)，表明Pb在10.00～300.00 μg·L-1范围内线性关系良好。

2.4 方法学考察

2.4.1精密度试验

分别取Cr、Pb对照品溶液重复进样6次，结果Cr、Pb吸光度的RSD分别为2.12%、2.17%，表明本法的精密度良好。

2.4.2稳定性试验

取同一酶促牛黄供试品溶液，于室温分别放置0、1、2、3、6、12、24 h后进样测定，测得Cr、Pb吸光度的RSD分别为2.61%、2.32%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.4.3重复性试验

取同一批酶促牛黄样品，按照“2.2.1”方法制备6份供试品溶液，进样测定，结果测得Cr、Pb的RSD分别为2.53%、2.34%，表明本法的重复性良好。

2.4.4回收率试验

分别取适量酶促牛黄样品6份，精密称定，分别加入Cr、Pb的标准溶液适量，测定其回收率。结果见表2，回收率均在规定范围之内，表明本法的准确度良好。

表2 加标回收率测定结果(n=6)

2.5 样品含量测定

按“2.2”项下方法分别制备酶促牛黄和天然牛黄供试品溶液，进样、测定，按“2.3.2”和“2.3.3”项下标准曲线计算两种牛黄中Cr、Pb的含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果(n=3，mg)

3 讨 论

3.1 样品前处理方法的选择

常用的样品前处理方法包括干法灰化和湿法消解两种。干法灰化具有以下优点：干法灰化使用程序升温的炉子，将样品放于灰化器皿中，灰化可自动完成；酸用量少，适用于样品中微量元素含量测定；残渣中有机成分极少，适用于多种含量测定方法如AAS、ASV、ICP-MS等[7-9]。湿法消解法是化学方法消解,用的是强氧化剂氧化样品,消解比较完全,有机物完全分解,形成无机盐,消化液无色澄清透明。但是,在消化过程中形成大量酸雾，产生气溶胶,易使被测的元素丢失,结果偏低[10]。不同的前处理方法存在着各自的优缺点，选用何种处理方法，取决于被测元素的性质。本实验采用程序升温干法灰化法对样品进行处理，一方面可减少这些试剂造成的干扰；另一方面，程序升温灰化法可以准确控制烘干温度、炭化温度和灰化温度，减少样品中铅的损失，保证测量的准确性[7]，还可以减少分析人员受到各种酸液的危害，减少对环境的污染。

3.2 灰化温度的选择

高温灰化有机物时,如果温度过高(超过550 ℃)会造成某些重金属元素(如镉、铅、锌、锡等)的逸散损失,温度过低又会导致灰化不完全[7],一般选择的灰化温度为400～550℃,本实验中采用的灰化温度为420 ℃。灰化所需的时间也因样品的性质而定,灰化时间过短,无法使样品灰化完全而造成损失,灰化时间太长,则会影响样品处理的效率。本实验发现在420 ℃温度下灰化5 h即能使样品完全灰化。因此采用干法灰化处理天然牛黄和酶促牛黄所选择的灰化温度为420 ℃,灰化时间5 h。

3.3 试剂的选择

测定无机元素，尤其采用石墨炉原子吸收分光光度法，普通试剂本底高，采用优级纯硝酸试剂。