商洛连翘中连翘苷和连翘酯苷A含量比较研究

赵志新,赵月梅

(商洛学院 生物医药与食品工程学院，陕西 商洛 726000)

作为木犀科连翘属植物，连翘(Forsythiasuspense(Thunb.) Vahl)主产于陕西、河南和山西等省份，主要以果实入药，常用于清热解毒，消肿散结等病之治疗[1]。商洛地处秦岭腹地，其独特的气候、土壤等条件适宜于连翘的生长，同时连翘被商洛市政府列为重点发展的“五大商药”之一[2]。目前主要通过测定连翘苷及连翘酯苷A的含量对其药效成分进行评价，这也是2015版药典所采用的标准。连翘苷为连翘的干燥果实和叶中的提取物，是较早分离出来的主要活性成分，易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂；连翘酯苷A主要来自于连翘干燥的果实与叶子中，它可溶于水、乙醇、甲醇，但难溶于乙醚，氯仿[3]。

长期以来，连翘药材来源主要以野生资源为主，采收混乱，是造成连翘品质不稳定的重要因素[4]。因此笔者采集不同月份商洛地区种植的连翘叶和果实，通过高效液相色谱法(HPLC)检测连翘苷和连翘酯苷A的含量，以期对不同生长期及不同药用部位连翘药材品质进行评价，为确定商洛连翘合理采收期提供借鉴，同时也有利于对连翘及其相关药品进行质量控制。

1 材料与方法

1.1 供试材料

以我校商洛张村种植基地的连翘为实验材料，分别于2017年8月3日、9月3日和10月3日采集连翘果实和叶子，带至实验室105℃杀青30 min，然后80℃烘干至恒重，粉碎后过40目筛，密封瓶保存备用[5]。

1.2 仪器与试剂

液相色谱仪为日本岛津公司生产的LC-20A，液相用溶剂过滤器为ap-99015；连翘苷标准品及连翘酯苷A标准品为上海金穗生物科技有限公司生产，甲醇、乙醇为分析纯(A.R.)。

1.3 试验方法

1.3.1 连翘苷色谱条件与标准曲线制作 色谱条件：填充剂为C18色谱柱；流动相为乙腈-水(体积比为25∶75)；色谱检测波长277 nm；理论塔板数不低于3000(以连翘苷峰计算)。对照品溶液的制备：取连翘苷标准品，加甲醇制成0.2 mg·mL-1溶液。

供试品溶液的制备：分别称取不同月份的连翘果实及叶子的样品粉末0.1 g，加入甲醇1.5 mL，过夜。将浸渍过夜的样品溶液，使用250 W，40 kHz超声器处理30 min，室温冷却，若有损失，用甲醇补足，摇匀过滤，精确量取过滤后的溶液0.5 mL，放入烘箱，将溶液蒸至近干，加在中性氧化铝柱(100～120目)上，然后使用70%乙醇进行冼脱，将洗脱液浓缩至干，后用50%甲醇溶解，转移至5 mL容量瓶中，摇匀过滤，取过滤后的溶液，即为连翘苷供试品溶液。

标准曲线：使用3、5、10、20、40和50 μL的对照品溶液，按上述色谱条件，检测连翘苷峰值。以进样量X(μg)对峰面积Y进行回归，得连翘苷回归方程为Y=571499X-6008.3，R2= 0.9993。回归方程显示，上样溶液在0.30～4.50 μg有良好的线性关系。

1.3.2 连翘酯苷A色谱条件与标准曲线制作 色谱条件：填充剂为C18色谱柱；流动相为乙腈-0.4%冰醋酸(体积比为15∶85)；色谱检测波长为330 nm；理论塔板数不低于5000(以连翘苷峰计算)。对照品溶液的制备：取连翘酯苷A对照品，精密称量，后加甲醇制成0.1 mg·mL-1溶液。

供试品溶液的制备：分别称取不同月份的连翘果实及叶子样品粉末0.1 g，加入70%甲醇3 mL，密塞，使用250 W，40 kHz超声器处理30 min，室温冷却，再称定重量，若有损失，用70%甲醇补足。摇匀过滤，即得连翘酯苷A供试品溶液。

标准曲线：使用3、5、10、20、40、和50 μL的对照品溶液，按上述色谱条件，检测翘酯苷A峰值。以进样量X(μg)对峰面积Y进行回归，得连翘酯苷A回归方程为Y=581726X-732634，R2=0.9998。回归方程显示，上样溶液在0.50～4.00 μg具有良好的线性关系。

2 结果与分析

2.1 不同部位连翘苷和连翘酯苷A动态变化研究

从图1可以看出，连翘叶中连翘苷的含量从8月到10月份逐渐增加，从1.22%增加到1.47%再到1.59%；而在果实中，连翘苷的含量变化不大，从0.27%增到0.36%再回落到0.33%。同时可以明显看到，从8到10月份中，连翘叶中的连翘苷含量(平均值1.43%)显著高于果实中(平均值0.32%)。

图1 叶和果实中连翘苷的动态变化

图2为连翘酯苷A的动态变化趋势，可以看出在8-10月份中，叶中连翘酯苷A的含量稳步增加，从3.73%到4.26%再到4.85%；在连翘果实中，连翘酯苷A的含量从8月份的3.71%增加到9月份的4.13%，然后10月份稍微下降到4.08%。同时可以看到，从8到10月份中，连翘叶中的连翘酯苷A含量(平均值4.18%)稍微高于果实中(平均值3.97%)，二者差别不是很大，特别是在8月份的时候。

图2 叶和果实中连翘酯苷A的动态变化

2.2 同一部位连翘苷和连翘酯苷A比例动态变化研究

设定连翘苷含量为1，用对应月份同一部位连翘酯苷A含量相对于连翘苷的比例作图，分别获得连翘叶中连翘苷和连翘酯苷A比例动态变化(图3)，以及连翘果实中连翘苷和连翘酯苷A比例动态变化(图4)。从连翘叶中可以明显看出(图3)，从8到10月份，连翘酯苷A比例相对稳定，为3倍左右；而在连翘果实中(图4)，连翘酯苷A比例有所下降，从8月份的13.74倍下降到10月份的12.36，但下降幅度不明显。

图3 连翘叶中连翘苷和连翘酯苷A比例动态变化

图4 连翘果实中连翘苷和连翘酯苷A比例动态变化

3 讨论

研究采用高效液相色谱法，测定商洛地区种植的不同月份的连翘果实和叶中连翘苷和连翘脂苷A的含量。结果显示，从8到10月期间，连翘苷和连翘酯苷A在叶中的积累逐步增加，而这二者在连翘果实中含量则变化不大，这与李卫健[4]、王进明[6]等人结果相一致。这样的结果可能是9月份以后果实逐渐老化，有效成分积累趋于稳定，而此时叶子还在生长，有效成分积累并未停止，故建议商洛地区所种植连翘采收期应在9月份以后，这是有效成分积累稳定，也有利于药材的质量控制。连翘叶中连翘苷的含量数倍于果实中，故也应考虑连翘叶作为入药部位的可能性。

同时研究表明，连翘属植物叶子与果实的成分比较相似，同时连翘叶中的其他有药效物质，包括木质素、咖啡酰糖苷等的含量比连翘果实中高[7]，因此对于连翘叶资源的必将是较好的植物资源利用方向，同时对于连翘叶取代连翘果实入药也是一个值得研究的问题。

笔者研究了连翘同一器官(叶或果实)中连翘苷和连翘酯苷A比例的动态变化，显示连翘酯苷A含量是连翘苷含量的数倍，特别是在连翘果实中，连翘酯苷A是连翘苷的13倍左右。由于中药药效是多种有效成分之间相互作用的结果，考虑到药材中不同有效成分之间的量及其比例会影响药材药效的好坏[4]，所以对连翘有效成分含量及各成分间比例的研究，也应是连翘质量控制的指标。而传统中医使用连翘果实而不是叶入药，可能跟连翘酯苷A与连翘苷的比例有关系，同时相关的问题值得深入研究。