“消银解毒颗粒”对银屑病血热证外周血T细胞亚群Th17及其相关炎性反应因子调控作用的研究

张凯辉　张润田　段行武　陈曦

摘要 目的：探討“消银解毒颗粒”对银屑病血热证患者外周血Th17淋巴细胞及其相关炎性反应因子的调控作用。方法：选取2017年6月至2018年5月北京中医药大学东直门医院收治的血热证寻常型银屑病患者20例和健康志愿者10例作为研究对象。患者被随机分为消银解毒组和复方青黛组，分别给予消银解毒颗粒和复方青黛胶囊治疗，并以白凡士林缓解皮肤干燥。于入组前和治疗第8周末，用流式细胞术检测正常人组、消银解毒组、复方青黛组的外周血Th17细胞的表达;用qPCR法检测外周血IL-17mRNA、IL-22mRNA、IL-23mRNA的表达水平。结果：治疗前，消银解毒组与复方青黛组PASI、瘙痒评分差异无统计学意义，治疗后，2组PASI、瘙痒评分均有下降。治疗前，消银解毒组与复方青黛组外周血Th17细胞均高于健康志愿者组（P<0.05），消银解毒组与复方青黛组2组差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后，消银解毒组与复方青黛组2组外周血Th17细胞水平与治疗前比较均降低（P<0.05）;消银解毒组与复方青黛组2组治疗前后外周血Th17细胞水平的差值差异无统计学意义（P>0.05）。治疗前，消银解毒组和复方青黛组治疗前患者外周血中IL-17mRNA、IL-22mRNA、IL-23mRNA表达均与健康志愿者组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。消银解毒组治疗后与治疗前比较，差异有统计学意义（P<0.05），复方青黛治疗后与治疗前比较，差异有统计学意义（P<0.05）。消银解毒饮和复方青黛治疗前治疗后比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：消银解毒颗粒与复方青黛胶囊临床疗效相当;2种药物均能降低银屑病患者外周血Th17细胞水平，并降低外周血IL-17mRNA、IL-22mRNA、IL-23mRNA的表达，从而发挥治疗作用。

关键词 消银解毒颗粒;复方青黛胶囊;血热证;银屑病;Th17淋巴细胞;炎性反应因子;调控

Study on the Regulation of Xiaoyin Jiedu Granule on Peripheral Blood T Cell Subset Th17 and Its Related Inflammatory Factors in Psoriasis Blood-Heat Syndrome

Zhang Kaihui，Zhang Runtian，Duan Hanwu，Chen Xi

（Department of Dermatology，Dongzhimen Hospital，Beijing University of Chinese medicine，Beijing 101100，China）

Abstract Objective：To investigate the regulation of Xiaoyin Jiedu Granule on peripheral blood Th17 lymphocytes and related inflammatory factors in patients with psoriasis blood-heat syndrome.Methods：A total of 20 patients with blood-heat syndrome psoriasis vulgaris and 10 healthy people in Dongzhimen Hospital，Beijing University of Chinese medicine from June，2017 to May，2018 participated in the experiment.The patients were randomly divided into the Xiaoyin Jiedu group and the compound Qingdai group，respectively，and they were treated with Xiaoyin Jiedu Granules and compound Qingdai Capsules，and were given white petrolatum to relive skin dryness.Before the enrollment and the 8th week of treatment，the expression of Th17 cells in peripheral blood of normal people group，Xiaoyin Jiedu group and compound Qingdai group was detected by flow cytometry.The expression of IL-17 mRNA，IL-22 mRNA and IL-23 mRNA in peripheral blood was detected by qPCR.Results：Before treatment，the peripheral blood Th17 cells in the Xiaoyin Jiedu group and the compound Qingdai group were higher than the normal group （P<0.05）.There was no significant difference between the Xiaoyin Jiedu group and the compound Qingdai group （P>0.05）.After treatment，the levels of Th17 cells in the peripheral blood of the Xiaoyin Jiedu group and the compound Qingdai group were decreased than those before treatment （P<0.05）.There was no significant difference in the levels of Th17 cells between the 2 groups before and after treatment in the Xiaoyin Jiedu group and the compound Qingdai group （P>0.05）.Before treatment，the expressions of IL-17 mRNA，IL-22 mRNA and IL-23 mRNA in peripheral blood of the patients in the Xiaoyin Jiedu group and the compound Qingdai group were significantly different from those in the healthy control group （P<0.05）.There was significant statistical difference between before and after treatment of the Xiaoyin Jiedu group （P<0.05）.The difference between before and after treatment of the compound Qingdai group was statistically significant （P<0.05）.For the difference value d，there was no significant difference between Xiaoyin Jiedu Decoction and compound Qingdai before treatment （P>0.05）.Conclusion：The efficacy of Xiaoyin Jiedu Granule is equivalent to that of compound Qingdai Capsule.Both drugs can reduce the level of Th17 cells in peripheral blood of patients with psoriasis，and reduce the expression of IL-17 mRNA，IL-22 mRNA and IL-23 mRNA in peripheral blood，thereby playing the therapeutic effects.

Key Words Xiaoyin Jiedu Granule; Compound Qingdai Capsule; Blood heat syndrome Psoriasis; Th17 Lymphocytes; Inflammatory response factor; Regulation

中图分类号：R275.9文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.04.020

银屑病是一种临床常见的以红斑鳞屑为主要表现的慢性炎性反应性皮肤病，免疫应答在本病发病过程中处于核心地位。本病的发生是由非特异性免疫系统中的各种细胞因子刺激激活T细胞，使T细胞在真皮浅层浸润，与表皮角质形成细胞、毛细血管上皮细胞形成负反馈放大效应，形成银屑病的皮肤异常病理改变。

既往研究认为Th（T helper）1细胞主导的免疫反应是银屑病发病的关键，该细胞通过其代表性炎性因子IL-2、干扰素γ（IFN-γ）等介导完成皮肤的炎性反应，包括角质形成细胞过度增生，小血管增生和中性粒细胞浸润。近年研究表明，新型T细胞亚群Th17细胞在银屑病的发病过程中也有重要作用。转化生子因子β（Transforming Growth Factorbβ，TGF-β）和白细胞介素6（IL-6）共同激活CD4+T细胞内的信号转导和转录激活因子3（STAT3）通路，使视黄酸相关孤儿核受体ROR-γt和ROR-α活化，进而分化成为Th17细胞，该细胞以分泌IL-17为特征，同时分泌IL-22、IL-23等炎性反应因子，与银屑病发病关系密切[1-2]。

北京中医药大学东直门医院国家级名老中医金起凤教授，创制银屑病经典验方“消银解毒饮”。消银解毒颗粒是消银解毒饮的颗粒剂形式，临床应用多年，对血热证银屑病疗效显著，不良反应小，并可有效控制疾病复发[3]。此方由水牛角、牡丹皮、赤芍、银花、蚤休、生甘草、全蝎等组成，功效为凉血熄风、清热解毒，对银屑病血热证患者疗效确切。本研究拟采用流式细胞术及qPCR法，通过比较银屑病患者治疗前后与正常对照组外周血Th17细胞的分化比例的差异及IL-17mRNA、IL-22mRNA、IL-23mRNA的表达水平的改变，探讨“消银解毒颗粒”对银屑病血热证外周血Th17细胞及其相关炎性反应因子的调控作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年6月至2018年5月北京中医药大学东直门医院皮肤科门诊收治的寻常型银屑病血热证患者20例作为研究对象，随机分为消银解毒组和复方青黛组，每组10例。选取10例北京中医药大学东直门医院医护人员为无任何皮损的健康志愿者组。健康志愿者组中男3例，女7例，年龄29～65岁，平均年龄（38±9.12）岁;消银解毒组中男5例，女5例，年龄21～67岁，平均年龄（43±10.34）岁，病程0.8～7年，平均病程（4.7±1.6）年;复方青黛组中男6例，女4例，年龄21～65岁，平均年龄（38±12.63）歲，病程0.6～8年，平均病程（5.1±1.3）年。3组患者的性别及年龄、两给药组的病程差异均无统计学意义（P>0.05），可进行比较。本项研究由北京中医药大学伦理委员会批准（伦理审批号：No.BJZYYDX-LL-2014017）。受试者入组前均签署知情同意书。

1.2 诊断标准 西医诊断标准：符合《中国临床皮肤病学》[4]寻常型银屑病诊断标准。中医辨证分型标准：符合中华中医药学会皮肤科分会《寻常型银屑病（白疕）中医药循证临床实践指南（2013版）》[5]银屑病血热证辨证标准。其中主症：1）皮损鲜红;2）新出皮疹不断增多或迅速扩大。次症：1）心烦易怒;2）小便黄;3）舌质红或绛;4）脉弦滑或数。具备全部主症和1项以上次症则确定为血热证。

1.3 纳入标准 1）符合中西医诊断标准;2）年龄18～65岁;3）近3个月内未系统服用过维A酸、免疫抑制剂、雷公藤、糖皮质激素等药物，未使用窄波UVB照射治疗;4）近2周内未使用任何外用药物者。

1.4 排除标准 1）妊娠或哺乳期;2）有心血管、脑血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病;3）有精神类疾病。

1.5 治疗方法 20例寻常型银屑病患者随机分为消银解毒组和复方青黛组，消银解毒组给予消银解毒颗粒（北京康仁堂股份有限公司制备），由水牛角20 g、生地黄15 g、牡丹皮15 g、赤芍15 g、土茯苓20 g、白鲜皮12 g、忍冬藤12 g、生甘草6 g等药物组成，口服，每日1剂，连续用药8周。复方青黛组给予复方青黛胶囊（陕西医药控股集团天宁制药，国药准字Z20010157），口服，3次/d，3粒/次，连续用药8周。若皮疹干燥瘙痒可外用医用白凡士林。入组时和实验结束后，采集患者外周血进行检测。

1.6 观察指标 1）入组前后评估受试者的银屑病面积及严重程度评分（PASI）和瘙痒评分（Itching Scores）。在研究开始及结束时进行血常规和肝肾功能检测以避免不良反应事件的发生。2）以流式细胞术分别检测2组银屑病患者治疗前后外周血中Th17的分化比例，并与正常人对照组进行比较。3）以qPCR（实时定量反转录聚合酶链式反应）法分别检测2组银屑病患者治疗前后外周血中IL-17mRNA、IL-22mRNA、IL-23mRNA的表达水平，并与正常人对照组进行比较。

1.7 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析，计量资料以均值±标准差（±s）表示，其中2组间比较，符合正态分布者进行独立样本t检验，非正态分布者进行非参数检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 消银解毒颗粒能降低患者PASI评分和瘙痒评分 治疗前，消银解毒组患者和复方青黛组患者PASI评分差异无统计学意义（P>0.05）。治疗8周后，消银解毒组患者和复方青黛组患者与治疗前比较PASI评分均明显下降（P=0.002<0.01;P=0.005<0.01）。治疗前，消银解毒组和复方青黛组患者瘙痒评分差异无统计学意义（P>0.05）。治疗8周后，消银解毒组和复方青黛组患者与治疗前比较瘙痒评分均下降（P=0.020<0.05;P=0.006<0.01）。以上2类评分治疗后组间比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2 消银解毒颗粒和复方青黛胶囊能降低患者Th17分化比例 消银解毒组和复方青黛组治疗前患者血清中Th17数量均与健康志愿者组比较，差异有统计学意义（P=0.001<0.01，P=0.04<0.05）。消银解毒组治疗后与治疗前比较，差异有统计学意义（P=0.005<0.01），复方青黛组治疗后与治疗前比较，差异有统计学意义（P=0.017<0.05）。消银解毒组和复方青黛组组间比较，差异无统计学意义（P=0.57>0.05）。见表2。

2.3 消银解毒颗粒和复方青黛胶囊能降低患者外周血IL-17mRNA、IL-22mRNA、IL-23mRNA的表达 入组前消银解毒组和复方青黛组治疗前患者外周血中IL-17mRNA、IL-22mRNA、IL-23mRNA的表达均与健康志愿者组比较，差异有统计学意义（P=0.000<0.01，P=0.000<0.01）。消银解毒组治疗后与治疗前比较，差异有统计学意义（P=0.000<0.01），复方青黛组治疗后与治疗前比较，差异有统计学意义（P=0.000<0.01）。消银解毒组和复方青黛组组间比较，差异无统计学意义（P=0.449>0.05）。见表3。

3 讨论

中医对银屑病的病因病机有独特的认识且临床疗效良好。中医认为“脉络盛，色变”，在银屑病临床辨证诊疗过程中，“血分有热”贯穿银屑病疾病发展的始终。现代诸医家虽所用方药略异，但皆以“清热凉血”法作为核心治则。金起凤教授，综和各家所长，在“血热”的基础上，引入“毒蕴”理论，认为银屑病是由素体血热，又外感毒邪，正邪相搏、结于肌肤而发，指出“血热毒蕴”是银屑病发生的核心病机。后有学者通过实验研究指出，银屑病患者体内的T淋巴细胞及其细胞因子可能是银屑病中医病机制论中“热毒”的来源[6]。在我们关于银屑病发病的机制学研究中发现：T淋巴细胞亚群的异常分化，特别是Th17等炎性反应细胞亚群以及相关炎性反应因子IL-17、IL-22、IL-23、TNF-α等的高表达是血热证银屑病的重要病理特征，这可能是中医“血热毒蕴”理论的重要客观物质基础。

“血热毒蕴”病机制论指导下，金教授以犀角地黃汤为基础，创制银屑病经典验方消银解毒饮。本研究以消银解毒饮的改良颗粒剂型消银解毒颗粒为干预药物，此药是采用中药配方颗粒制剂形式的临床新药，具有方便快捷的优势。该方具有清热凉血、解毒散瘀之功，方中君药为水牛角，具有凉血消斑之功;以生地黄、牡丹皮、赤芍为臣药，共奏清热散瘀之功效;以土茯苓、白鲜皮、忍冬藤等为佐药，以达除湿止痒、解毒通络之效;甘草调和诸药为使药。现代药理研究证实水牛角可有效替代古方中犀牛角起到消炎、镇静、改善患者凝血的作用[7]。土茯苓可以显著抑制上皮细胞的有丝分裂，并促进银屑病细胞分化和抑制增生[8]。本实验临床研究结果显示消银解毒颗粒可较好改善患者皮损，降低PASI评分。

试验所用阳性对照药物复方青黛胶囊，其主要成分为：青黛、蒲公英、马齿苋、贯众、丹参、山楂（焦）、紫草、五味子（酒）、白鲜皮、土茯苓、建曲、白芷、乌梅、粉萆薢。该药临床广泛应用于银屑病的治疗，具有清热解毒、祛风止痒、化瘀消斑等功效[9]。现代药理学研究表明，该药能抑制表皮角质形成细胞过度增生，同时可抑制中性粒细胞的免疫应答，并对皮损微循环进行有效改善。临床研究显示复方青黛胶囊治疗血热证寻常型银屑病临床疗效确切[10]。本研究中我们发现血热证寻常型银屑病患者PASI评分及瘙痒评分得到有效改善，病情明显好转，同时患者体内免疫炎性反应受到抑制。

银屑病是一种T细胞和树突状细胞与抗原呈递细胞、嗜中性粒细胞、角质形成细胞、血管内皮以及皮肤神经系统经过复杂相互作用所引发的疾病。固有免疫系统中的树突状细胞作为主要的始动细胞，在受到外源性抗原刺激后，能分泌大量IL-23及其他炎性反应因子，IL-23诱导CD4+T细胞活化并向Th17分化，同时使Th17细胞分泌特异性炎性反应因子IL-17和IL-22。其中，IL-17可刺激多种细胞产生集落刺激因子（G-CSF）、IL-6、IL-8等炎性因子，也调动中性粒细胞募集[11]，具有较强的致炎效应，这也符合银屑病的基本病理改变。Witowki等通过研究发现，银屑病患者血清中的IL-17表达显著高于正常人，并在银屑病的皮损中检测出IL-17的mRNA表达[12]。

通过本研究，我们发现消银解毒颗粒可较好改善血热证银屑病患者皮损，降低PASI评分瘙痒评分，临床疗效与治疗银屑病经典药物复方青黛胶囊疗效相当。且消银解毒颗粒可以明显减少患者外周血中Th17的细胞数量，并降低外周血IL-17mRNA、IL-22mRNA、IL-23mRNA的表达水平。综上可知，消银解毒颗粒可能通过减少Th17的细胞数量，降低IL-17mRNA、IL-22mRNA、IL-23mRNA表达，抑制与Th17相关的众多的细胞因子和炎性反应递质的基因表达而发挥其对血热证银屑病的“凉血解毒”治疗作用。

参考文献

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