柬埔寨柯拉斯那沉香的化学成分研究

夏录录 李薇 梅文莉 杨理

摘 要：该文采用 ODS、硅胶、Sephadex LH-20 等柱色谱技术，对柬埔寨野生柯拉斯那沉香（Aquilaria crassna）进行了研究。结果表明：从柬埔寨柯拉斯那所产沉香的乙醇提取物中进行分离共得到了10个化合物，包括一对对映异构体（9a/9b）。经波谱解析分别鉴定为6-甲氧基-2- [2-（3-羟基-4-甲氧基苯）乙基]色酮（1）、6-甲氧基-2- [2-（3-甲氧基-4-羟基苯）乙基]色酮（2）、6，7-二甲氧基-2-（2-苯乙基）色酮（3）、6-羟基-2-（2-苯乙基）色酮（4）、6-羟基-2- [2-（4-甲氧基苯）乙基]色酮（5）、8-氯-6-羟基-2- [2-（3-羟基-4-甲氧基苯）乙基]色酮（6）、8-氯-6-羟基-2- [2-（4-甲氧基苯）乙基]色酮（7）、oxidoagarochromone B（8）、4′-demethoxyaqusisnenoned（9）。其中，化合物6、7和9均为首次从柯拉斯那沉香中分离得到。活性测试结果显示，化合物1和2对乙酰胆碱脂酶具有一定的抑制活性，化合物2对人慢性髓原白血病细胞K562具有较弱的抑制作用。

关键词：柬埔寨， 沉香， 柯拉斯那， 化学成分， 乙酰胆碱脂酶抑制活性， 细胞毒活性

中图分类号：Q946.91， R285.5

文献标识码：A

文章编号：1000-3142（2019）04-0540-08

Abstract：Ten compounds， including one pair of enantiomers （9a/9b）， were isolated from the ethanol extract of agarwood originating from Aquilaria crassna in Cambodia by comprehensive chromatographic techniques including ODS， silica gel and Sephadex LH-20. On the basis of spectroscopicdata， they were identified as 6-methoxy-2- [2-（3-hydroxy-4-methoxyphenyl） ethyl] chromone （1）， 6-methoxy-2- [2-（3-methoxy-4-hydroxyphenyl） ethyl] chromone （2）， 6，7-dimethoxy-2-（2-phenylethyl） chromone （3）， 6-hydroxy-2-（2-phenylethyl） chromone （4）， 6-hydroxy-2- [2-（4-methoxyphenyl） ethyl ] chromone（5）， 8-chloro-6-hydroxy-2- [2- （3-hydroxy-4-methoxyphenyl） ethyl]chromone （6）， 8-chloro-6-hydroxy-2- [2- （4-methoxyphenyl） ethyl] chromone （7）， oxidoagarochromone B （8）， 4′-demethoxyaqusisnenoned （9）. Compounds 6， 7 and 9 were isolated from agarwood of A. crassna for the first time. Among those， compounds 1 and 2 showed inhibitory activities against acetylcholinesterase. Compound 2 had weak inhibitory effect on K562 cell lines.

Key words：Cambodia， agarwood， Aquilaria crassna， chemical constituents， acetylcholinesterase inhibitory activity， cytotoxic activity

沉香為瑞香科（Thymelaeaceae）沉香属（Aquilaria）或拟沉香属（Gyrinops）植物含有树脂的干燥芯材（中国药典委员会，2015）。沉香是传统的名贵中药和香料，其味辛、苦，性微温，具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘等功效，主要用于治疗胸腹胀闷疼痛、胃寒呕吐呃逆、胃虚气逆喘急等（中国药典委员会，2015）。现代药理学研究发现，沉香具有镇痛、镇静、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、细胞毒、抑菌、降糖、抗抑郁等药理作用（戴好富，2017;杨洋等，2016;康科星等，2017）。目前报道的沉香属植物约有23种，主要分布于中国、泰国、印度、缅甸、老挝、柬埔寨、马来西亚、印度尼西亚等东南亚国家（戴好富和梅文莉，2015）。国内外学者对沉香的化学成分研究始于20世纪50年代，目前已鉴定出了300多个化学成分，主要是倍半萜类和2-（2-苯乙基）色酮类化合物（Chen et al.， 2012;戴好富，2017;Naef，2015;邵杭等，2015;Shao et al.， 2016;向盼等，2017;Xiang et al.， 2017）。

柯拉斯那沉香树（A. crassna）主要分布于柬埔寨、泰国、老挝、越南等国家（戴好富和梅文莉，2015）。目前关于柯拉斯那沉香的化学成分和生物活性研究报道较少，本课题组前期对产自老挝的柯拉斯那沉香进行了研究，报道了少量倍半萜类和2-（2-苯乙基）色酮类化合物，部分化合物具有一定的乙酰胆碱脂酶抑制活性和降血糖活性（康科星等，2017;王红妮等，2016;杨洋等，2016;Yang et al.， 2017）。本研究选用柬埔寨野生柯拉斯那沉香为材料，从其乙醇提取物中分离鉴定了10个2-（2-苯乙基）色酮类化合物（图1），其中化合物6、7和9均为首次从柯拉斯那沉香中分离得到。初步揭示了柬埔寨柯拉斯那沉香的化学成分，为其进一步开发利用提供了科学依据。

1 材料与仪器

1.1 材料

沉香样品于2017年11月购于柬埔寨金边，经中国热带农业科学院热带生物技术研究所王军博士鉴定其基源植物为柯拉斯那（Aquilaria crassna），标本编号为（JPZ20171101），保存于中国热带农业科学院热带生物技术研究所。

1.2 仪器和试剂

仪器：柱层析硅胶G（200～300目，60～80目）（青岛海洋化工厂）;旋转蒸发仪（德国 Heidolph Laborota）;Sephadex LH-20（德国Merck公司）;ODS（20～45

SymbolmA@m）（日本 Fuji公司）;高效液相色谱仪（Agilent 1260）（美国安捷伦科技有限公司）;色谱柱（C18，250 mm×4.6 mm，ID）（日本 Nacalai Tesque公司）;Rudolph Autopol III polarimeter（美国 Rudolph Research Analytical）;半制备高效液相色谱仪（SUMMIT P680A）（美国dionex公司）;半制备色谱柱（C18，250 mm×10.0 mm，ID）（日本 COSMOSIL公司）;ELX-800酶标仪（美国宝特公司）;Bruker AV-500型超導核磁共振波谱仪，TMS为内标。

试剂：乙酰胆碱酯酶、碘化硫代乙酰胆碱、二硫代二硝基苯甲酸（DNTB）、他克林（美国 Sigma 公司）;人慢性髓原白血病细胞株K562（中国科学院上海生命科学研究院细胞库）。

2 提取与分离

将干燥的柬埔寨柯拉斯那沉香样品（928.0 g）用95% 乙醇加热回流提取3次（每次3 h，每次加入乙醇5 L）减压浓缩，得乙醇浸膏375.2 g。用水将乙醇提取物分散形成悬浊液，用石油醚进行萃取，得到浸膏440.0 mg，剩余部分经减压柱色谱，以氯仿-甲醇（1∶0～0∶1）梯度洗脱，得到20个流份（Fr.1～Fr.20）。

Fr.9 （6.9 g） 经Sephadex LH-20（石油醚∶氯仿∶甲醇 = 2∶1∶1）洗脱，得到3个流份（Fr.9-1～Fr.9-3）。Fr.9-3（5.0 g）经硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯（50∶1）洗脱，得到9个流份（Fr.9-3-1～Fr.9-3-9）。Fr.9-3-6（306.5 mg）经硅胶柱色谱，以石油醚-氯仿-丙酮（100∶10∶1）洗脱，得到14个流份（Fr.9-3-6-1～Fr.9-3-6-14）。Fr.9-3-6-14（41.0 mg）通过半制备高效液相色谱仪（C18柱，35%乙腈水，流速4 mL·min-1，检测波长244 nm）洗脱，得到化合物 8（4.5 mg，保留时间12.8 min）。

Fr.12经ODS柱色谱，以甲醇-水（3∶7～1∶0）梯度洗脱，得到12个流份（Fr.12-1～Fr.12-12）。Fr.12-7（1.5 g）析出部分白色固体，依次用石油醚、氯仿、丙酮、甲醇清洗得白色固体172.0 mg，再经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇（200∶1～0∶1）梯度洗脱，得到4个流份（Fr.12-7-1～Fr.12-7-4）。Fr.12-7-4（42.0 mg）通过半制备高效液相色谱仪（C18柱，65%甲醇水，流速4 mL·min-1，检测波长222 nm）洗脱，得到化合物 6（5.9 mg，保留时间11.0 min）。Fr.12-7-2（29.4 mg）通过半制备高效液相色谱仪（C18柱，32%乙腈水，流速4 mL·min-1，检测波长242 nm）洗脱，得到化合物5（4.0 mg，保留时间41.7 min）和化合物 4（4.4 mg，保留时间47.2 min）。Fr.12-10（1.9 g）经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，得到5个流份（Fr.12-10-1～Fr.12-10-5）。Fr.12-10-1（552.7 mg）经ODS，以甲醇-水（3∶7～1∶0） 梯度洗脱，得到7个流份（Fr.12-10-1-1～Fr.12-10-1-7）。Fr.12-10-1-3（139.4 mg）通过半制备高效液相色谱仪（C18柱，32%乙腈水，流速4 mL·min-1，检测波长222 nm）洗脱，得到4个流份（Fr.12-10-1-3-1～Fr.12-10-1-3-4）。Fr.12-10-1-3-3（19.0 mg）通过半制备高效液相色谱仪（C18柱，32%乙腈水，流速4 mL·min-1，检测波长222 nm）洗脱，得到化合物 7（1.9 mg，保留时间21.2 min）。Fr.12-10-1-6（36.3 mg）通过半制备高效液相色谱仪（C18柱，45%乙腈水，流速4 mL·min-1，检测波长244 nm）洗脱，得到化合物9（7.0 mg，保留时间12.8 min）。

石油醚萃取物（440.0 mg）经Sephadex LH-20（甲醇）得到3个流份（Fr.21～Fr.23）。Fr.22（321.2 mg）经ODS（甲醇-水，3∶7～1∶0）梯度洗脱，得到6个流份（Fr.22-1～Fr.22-6）。Fr.22-5（90.8 mg）经硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮（80∶1）洗脱，得到4个流份（Fr.22-5-1～Fr.22-5-4）。Fr.22-5-4（20.0 mg）经半制备高效液相色谱仪（C18柱，60%甲醇水，流速4 mL·min-1，检测波长198 nm）洗脱，得到化合物1（1.5 mg，保留时间11.5 min）和化合物 2（1.7 mg，保留时间13.3 min）。Fr.22-5-3（15.0 mg）通过半制备高效液相色谱仪（C18柱，58%甲醇水，流速4 mL·min-1，检测波长232 nm）洗脱，得到化合物 3（1.1 mg，保留时间21.6 min）。

5 讨论

迄今为止，关于柬埔寨所产沉香化学成分研究的文献报道仅有一篇，且只得到了几个简单的2-（2-苯乙基）色酮和倍半萜类化合物（Alkhathlan & Al-Hazimi，2005）。本研究采用多种色谱技术，从柬埔寨柯拉斯那沉香乙醇提取物中分离得到10个2-（2-苯乙基）色酮类化合物， 其中， 化合物6、7和9为首次从柯拉斯那沉香中分离得到，丰富了柬埔寨所产沉香的化学成分。目前，从沉香中分离鉴定出的含氯取代的2-（2-苯乙基）色酮和2-（2-苯乙基）色酮二聚体数量较少（Yagura et al.， 2003;Liao et al.， 2016;Gao et al.， 2012;Wu et al.， 2012;戴好富，2017;Huo et al.， 2018;Xiang et al.， 2017;Yang et al.， 2017）。本研究得到了两个含氯取代的2-（2-苯乙基）色酮和两个2-（2-苯乙基）色酮二聚体：8-氯-6-羟基-2- [2-（3-羟基-4-甲氧基苯）乙基]色酮（6）、8-氯-6-羟基-2- [2-（4-甲氧基苯）乙基]色酮（7）和4′-demethoxyaqusisnenoned（9），为研究不同产地沉香的化学成分差异提供了一定依据。本研究活性测试结果显示，化合物1和2对乙酰胆碱脂酶具有一定的抑制活性，化合物2对人慢性髓原白血病细胞具有较弱的抑制活性，为柬埔寨柯拉斯那沉香的进一步研究和开发利用提供了一定的理论依据。

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