GC-MS/MS法测定金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药中麝香酮的含量

王晓蕾　袁浩　王常顺　刘永利

摘 要：为了全面有效地评价眼药的内在质量，针对眼药质量标准中均未设置与人工麝香相关质控指标的现状，研究了GC-MS/MS法测定金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药中麝香酮含量的方法。采用P-5MS毛细管柱（30 m×025 mm×025 μm），分流进样，分流比为3∶1，进样量为1 μL，程序升温，选择电子轰击源（EI源），多反应监测模式（MRM）进行测定，监测离子对及电压为m/z 23830>9810（CE6），m/z 20920>9520（CE 12），m/z 20920>10920（CE 9）。结果表明，麝香酮保留时间为1030 min，线性范围为5318～1 3296 ng（r=0999 4），金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药的加样回收率（n=9）分别为952%，955%和951%，RSD值分别为15%，19%和12%。研究方法简便准确，重复性良好，可用于金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药中人工麝香含量的控制，为全面评价眼药质量提供技术支撑。

关键词：中药化学;麝香酮;含量测定;GC-MS/MS法;眼药

中图分类号：R282.5   文献标志码：A

Abstract：In order to comprehensively and effectively evaluate the internal quality of eye drops， a GC-MS/MS method is established to determine the content of muscone in inniu eye medicine， Boyunsan eye medicine and Teling eye medicine in view of the current situation that no quality control index related to artificial musk is set in the quality standard of eye medicines. P-5MS capillary column （30 m×0.25 mm×0.25 μm） is used for split injection with a split ratio of 3∶1， an injection volume of 1 μL， and programmed temperature. The electron bombardment source （EI source） and the multiple reaction monitoring mode （MRM） are selected. The monitored ions and voltage are： m/z 238.30>9810 （CE6），m/z 209.20>95.20 （CE 12），m/z 209.20>109.20 （CE 9）. The results show when the retention time of muscone is 10.30 min，the linear range is of 53.18～1 329.6 ng（r=0.999 4）. The recovery rate （n=9） of inniu eye medicine， Boyunsan eye medicine and Teling eye medicine are 95.2%， 95.5% and 95.1%， with RSD of 1.5%， 1.9% and 1.2%， respectively. The method is simple， accurate and has good repeatability. It can be used to control the content of artificial musk in inniu eye medicine， Boyunsan eye medicine and Teling eye medicine， providing technical support for comprehensive evaluation of the quality of eye medicine.

Keywords：chemistry of Chinese material medica;muscone;determination of content;GC-MS/MS method;eye medicine

金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药为传统眼用制剂，三者的处方中含有大量炉甘石、冰片，且皆含有人工麝香。人工麝香为天然麝香的代用品，以麝香酮为主要成分，其主要药理作用、物理性状与天然麝香相似，具有开窍醒神、活血通经、消肿止痛等功效[1-7]。金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药的现行质量标

准中大多是关于测定处方量较大的冰片的方法[4]，均未设置与人工麝香相关的质控指标，故无法全面控制眼药的内在质量。本研究采用GC-MS/MS法测定眼药中麝香酮的含量，以期全面有效地评价药品質量。

1 主要仪器与试药

1.1 仪器

GCMS-TQ8040气相色谱-三重四极杆质谱联用仪，日本岛津公司提供;P-5MS毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），美国Agilent公司提供;AE240，AE163电子天平，Mettler公司提供;超纯水仪，美国Millipore公司提供。

1.2 试剂试药

正己烷、乙酸乙酯，均为GC纯，Merck公司提供;水，超纯水，美国Millipore公司提供;其余试剂均为分析纯。

对照品：麝香酮，中国食品药品检定研究院提供，批号为110719-201716，标示含量为99.9%（质量分数，下同）。

1.3 样品

金牛眼药4批，批号为08160301，08160302，08160303，20141201;拨云散眼药4批，批号为8160701，8160702，8160703，20140902;特灵眼药3批，批号为8160701，8160702，8160703。

2 方法與结果

2.1 对照品溶液的制备

取麝香酮对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1 mL含麝香酮500 ng的溶液，摇匀，即得对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取样品0.1 g，加乙酸乙酯3 mL，涡旋15 min，离心（4 000 r/min）5 min。精密吸取上清液1 mL，置于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.3 色谱条件

进样口温度为200 ℃，采用分流进样方式，分流比为3∶1，载气为高纯氦气，恒线速度模式，流速为2 mL/min，进样量为1 μL。升温程序如下：初始100 ℃（保持1 min），以12 ℃/min升至200 ℃（保持3 min），再以20 ℃/min升至280 ℃（保持8 min）。

2.4 质谱参考条件

离子源：电子轰击源（EI源）;采集方式：多反应监测模式（MRM）;离子源温度：280 ℃;质谱传输接口温度：250 ℃;碰撞气体：氩气;检测器电压：07 kV;溶剂延迟时间：20 min。监测离子对及电压：

[WTBX]m/z 23830>9810（CE6），m/z 20920>9520（CE 12），m/z 20920>10920（CE 9）。采集时间为1001～1061 min。在上述条件下测得的图谱如图1所示。

2.5 线性关系考察

精密量取麝香酮对照品溶液适量，加入乙酸乙酯，稀释成系列对照品溶液，质量浓度分别为53.18，106.37，265.92，531.84，1 329.6 ng/mL。按拟定的色谱条件进行测定，以[WTBX]对照品进样量X为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，麝香酮量在53.18～1 329.6 ng/mL之间呈现良好的线性关系，回归方程为Y= 461.4X- 7 422.1（r=0999 4）。

2.6 精密度试验

取同一批样品：金牛眼药（批号为8160303）、拨云散眼药（批号为8160701）、特灵眼药（批号为8160701），分别精密称取0.05，0.10，0.15 g各3份，按“2.2”项方法制备供试品溶液，进样测定。结果表明，金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药中麝香酮的含量分别为0.072，0.077和0.071 mg/g，RSD值分别为2.2%，1.6%和2.2%，表明本方法的精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0，1，3，7，20，24 h进样测定，记录峰面积积分值。结果表明，金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药的麝香酮峰面积积分值的RSD值分别为1.9%，1.5%和1.9%，表明供试品溶液室温下放置，至少在24 h内是稳定的。

2.8 准确度试验

取已知含量的金牛眼药（批号为8160303）、拨云散眼药（批号为8160701）、特灵眼药（批号为8160701），各精密称取9份，每份约0.05 g，每3份为1组，分别精密加入用乙酸乙酯配制的低、中、高3个浓度的麝香酮对照品溶液3 mL，按“2.2”项方法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率。结果表明，金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药的回收率分别为95.20%，95.50%和95.10%，RSD值分别为15%，19%和1.2%，表明本方法的回收率良好。详见表1—表3。

3 样品测定

取金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药样品共11批，根据“2.2”项方法制备供试品溶液，

按“2.3”和“2.4”项条件进行测定，用外标法计算麝香酮含量，结果见表4。

4 讨 论

4.1 方法选择

文献报道中关于麝香酮的检测分析方法很多[8-14]，如高效液相衍生化法、薄层双波长扫描法、气相色谱法等[15-20]，但未见眼用散剂中关于人工麝香含量测定的报道。金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药处方中均含有大量矿物类药、冰片及多味贵细药，其中人工麝香处方量很小，用气相色谱法测定时消耗的样品量较大，且色谱图中杂质较多，尤其是冰片量大，造成色谱图中的干扰大。采用GC-MS/MS法，在很大程度上减少了样品的消耗，通过优化升温程序，可保证麝香酮具有良好的峰形和响应性。选用多反应监测模式进行测定，通过设置监测离子对及采集时间段，避免了杂质的干扰，具有更高的选择性。

4.2 提取方法考察

金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药的处方中均含有大量矿物类药、冰片及多味贵细药，用气相色谱法测定时消耗样品量较大。在选择提取溶剂时考察了极性较小的正己烷、乙酸乙酯两种溶剂，两种溶剂对样品含量的测定基本没有影响，但正己烷提取液易析出晶体，干扰测定结果且不易保存，故最终选用乙酸乙酯作为提取溶剂。采用超声、涡旋两种提取方式对3种眼药中麝香酮含量的影响进行了考察，结果表明两种方式相差不大，故选择提取方式为涡旋15 min。对涡旋10，15，20 min的考察结果表明，10 min时提取的含量略低，而15 min和20 min时提取的含量基本无差别，为确保提取完全且又能节约资源，选择提取时间为15 min。

4.3 质谱参数选择 

一级质谱全扫描时得到麝香酮的分子离子峰238.30，在二级质谱扫描时发现其碎片离子的灵敏度较低，故又在一级质谱图中的223.30与209.30中选择了较高的209.30，即将失掉C25的结构作为定性离子对的母离子，最终通过二级质谱扫描优化了质谱参数，确定了最终方法中的测定离子对及电压。

5 结 论

金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药处方中均含有多味名贵药材，用气相色谱法测定时样品的消耗量较大。本文探索了一种采用GC-MS/MS测定金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药中麝香酮含量的方法，选用多反应监测模式进行测定，通过设置监测离子对及采集时间段，避免了杂质的干扰，具有更高的选择性，且通过了方法学验证。研究方法可同时应用于金牛眼药、拨云散眼药、特灵眼药中人工麝香的质量控制，为全面控制药品质量提供了技术支撑。

鉴于本方法在研究过程中收集到的样品数量较少，后期将继续收集不同批次的样品进行深入研究，对处方中的

其他味药进行相应研究，以获取更多统计数据，为全面评价眼药质量提供技术支撑。

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