西藏藏木香中主要活性成分研究

林长彬 白玛玉珍 强巴卓嘎 欧珠 旦宗 陈建 夏陈 邓俊琳

摘 要：对13份西藏藏木香中黄酮、多酚、土木香内酯、异土木香内酯含量进行测定，结果表明：13份西藏藏木香中土木香内酯和异土木香内酯最高含量分别为44.22、45.45mg/g，不同藏木香样品之间土木香内酯和异土木香内酯含量均存在显著差异，且土木香内酯和异土木香内酯的含量呈极显著正相关（P<0.01）;13份西藏藏木香中多酚与黄酮含量均较高，最高含量分别为1 602.24、60.66mg/100g，且多酚含量均高于黄酮含量。

关键词：西藏;藏木香;活性成分;产地;比较

本研究通过对13份西藏藏木香中土木香内酯、异土木香内酯、黄酮、多酚等活性成分含量进行测定并分析，为西藏藏木香功能性食品的研究与开发提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

通过对西藏藏木香种植现状的考察調研，发现其种植主要集中在山南地区，林芝以及日喀则也部分种植，因此，本试验主要以山南、林芝以及日喀则为采样地，采集到13份西藏藏木香作为试验样品（表1）。样品经粉碎、过40目筛，于-18℃冻藏备用。

1.2 试剂

土木香内酯、异土木香内酯、芦丁和没食子酸对照品，北京索莱宝科技有限公司;福林酚，北京索莱宝科技有限公司;色谱纯乙腈、甲醇（MREDA美国）、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、无水乙醇、甲醇、磷酸等（均为分析纯），成都市科龙化工试剂厂。

1.3 仪器与设备

FA2104型电子天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司;FW-100高速万能粉碎机，北京科伟永兴仪器有限公司;TD-4Z型台式低速离心机，四川蜀科仪器有限公司;KH2200DE型数控超声波清洗器，昆山禾创超声仪器有限公司;ELX-800型号酶标仪，美国伯腾仪器有限公司;1260型高效液相色谱仪，美国Agilent公司;UV-6100型号紫外分光光度计，上海元析仪器有限公司。

1.4 方法

1.4.1 总黄酮含量的测定 参照陈克克等[1]的方法，提取样品中的黄酮，于510 nm波长处测定吸光值。以芦丁溶液的质量浓度（μg/mL）为横坐标（x）、吸光值为纵坐标（y），绘制标准曲线。芦丁线性回归方程为：y=5.208x+0.041，R2=0.999。

1.4.2 多酚含量的测定 参照Okarter等[2]和Nuntla等[3]的方法，分别提取样品中的游离多酚和结合多酚，参照Chu等[4]的方法，在10mL试管中，加入10μL的没食子酸标准溶液或适当稀释后的多酚样品提取液，加入20μL福林酚试剂，混合均匀。放置5min后，加入质量分数为5% Na2CO3溶液160μL。室温下避光反应60min后，在765nm波长下测定混合液吸光值。以没食子酸溶液的质量浓度（mg/L）为横坐标（x）、吸光值为纵坐标（y），绘制标准曲线。没食子酸线性回归方程为：y=0.004x+0.082，R2=0.999。

1.4.3 土木香内酯和异土木香内酯的含量测定 土木香内酯和异土木香内酯的测定采用高效液相色谱法，参考肖远灿等[5]的方法稍作修改，取藏木香药材粉末1.00g于100mL具塞三角瓶中，加80%甲醇溶液8mL，40℃超声40min后，冷却，在6 000r/min条件下离心10min，收集上清液，残渣再提取2次，合并3次提取液并定容至25mL量瓶中，稀释5倍后摇匀经微孔滤膜过滤后进样分析。色谱条件：色谱柱ZORBAX Eclipse XDB-C18（250mm×4.5mm，5.0μm），流动相：乙腈-0.04%磷酸溶液（55∶45）、检测波长200nm、体积流量0.8mL/min、柱温30℃，进样量5μL。以峰面积为纵坐标（y）、相应异土木香内酯和土木香内酯含量为横坐标（x），作回归曲线，绘制标准曲线。异土木香内酯回归曲线方程及相关系数为：y=22.597x-46.018，R2=0.999 6;土木香内酯回归曲线方程及相关系数为：y=21.981x-44.369，R2=0.999 6（附图）。

1.5 数据处理

所有实验结果以平均值±标准差表示，显著性差异用多重比较法中的标记字母法表示，采用SPSS 19.0软件进行数据分析，显著性水平为P<0.05。

2 结果与分析

2.1 黄酮含量

由表2可知，黄酮含量在27.60～60.66mg/100g内，与杨月琴等[6]所采集的青海省藏木香中黄酮含量（28.00mg/100g）以及赵永明等[7]通过优化土木香根中总黄酮提取工艺，在最佳工艺条件下可得到的总黄酮浸出量（14.41mg/g）相比，本试验所采集到的13份西藏藏木香中均含有较高的黄酮，最高可达到60.66mg/100g。此外，13份藏木香中黄酮含量变异系数为22.92%，较大的变异系数说明不同地区藏木香中黄酮含量差异较大，结合表3可以看出，不同区域的藏木香中黄酮含量可能是由于不同地域品种在不同生态条件下合成存在差异所致。这可能是由于地域差异所导致的生长条件对藏木香中黄酮含量具有显著的影响[8]。

2.2 多酚含量

多酚含量的高低对于藏木香的保健价值同样具有重要的意义[9]。目前尚未有文献对藏木香中多酚含量进行测定分析，由表2可知，13份藏木香中多酚含量在461.11～1 602.24mg/100g之间，并且其含量的变异系数为37.02%，说明多酚含量较受地域条件影响更大。与黄酮含量表现相一致的是，西藏不同区域的藏木香中多酚含量之间同样存在显著差异，其中，山南地区的藏木香中多酚含量普遍较高，此外，还发现西藏藏木香中多酚含量均高于黄酮含量。

2.3 土木香内酯和异土木香内酯含量

不同的生长条件对藏木香中有效成分的含量有明显的影响[10]。由表4可知，利用高效液相色谱法对西藏不同区域的13份藏木香进行测定，发现土木香内酯的含量在13.57～44.22mg/g内，而异土木香内酯含量在12.21～45.45mg/g内，这与文献所报道的范围基本一致[5，11-13]，但其含量普遍较高，这可能是由于测定方法之间的差异所造成的。陈晓红[14]利用GC法测定了不同产地的藏木香中异土木香内酯含量为28mg/g。赵永明等[15]利用HPLC法优化工艺测定土木香根中土木香内酯和异土木香内酯提取量分别为30.53、19.67mg/g，同时较高的含量也可能是西藏藏木香品种优良所造成的。不同区域的藏木香中异土木香内酯和土木香内酯含量之间表现出显著差异，这说明环境因素对藏木香中异土木香内酯和土木香内酯含量有着较大的影响，因而有研究认为，可以试图通过严格控制和调整种植条件来提高藏木香中有效成分的含量[13]。對不同生长年份的藏木香中土木香内酯与异土木香内酯含量进行比对分析，发现这2种物质含量在藏木香中呈现如下规律：1年生的藏木香（山南拉康，Z4）>2年生的藏木香>3年生藏木香（山南日当，Z6），即藏木香生长越久，其土木香内酯与异土木香内酯含量可能越少，这与续艳丽等[16]的研究结果相反（随着生长年份的增加，藏木香中土木香内酯和异土木香内酯逐渐增加）。由于本试验中1年、3年生藏木香采样量太小，对于藏木香生长年份对其土木香内酯与异土木香内酯的影响，还有待进一步研究。此外，除了编号为Z3、Z6、Z7、Z8、Z10、Z11的藏木香外，其余藏木香中异土木香内酯含量均高于土木香内酯含量，这与文献所报道的藏木香中异土木香内酯含量高于土木香内酯含量相一致[16-17]。通过相关性分析还发现，藏木香中异土木香内酯和土木香内酯含量之间呈现极显著正相关（P<0.01），相关系数高达0.907 1，这说明异土木香内酯和土木香内酯具有较强的关联性，这为藏木香中有效成分的开发利用研究提供了科学依据。

3 结论与展望

本研究结合目前对藏木香中主要活性成分的研究现状，对13份西藏藏木香中的黄酮、多酚、异土木香内酯和土木香内酯的含量测定分析发现，西藏藏木香中多酚、黄酮含量普遍较高，其中异土木香内酯和土木香内酯含量与文献报道的基本一致，但其含量普遍高于其他产地藏木香，表现极高的药用价值与保健价值，这为今后西藏藏木香作为保健食品的开发与利用提供了科学依据。

参考文献

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（责任编辑 李婷婷）