精芪双参胶囊处方中各药味的药效支撑作用研究

马子君，姜文月*，曲佳乐，苏 婷 ，崔宪利

(1.吉林省现代中药工程研究中心有限公司，吉林长春 130012；2.吉林长白山药业集团股份有限公司，吉林白山 134300)

精芪双参胶囊，主要治疗心脑血管疾病。精选黄芪、丹参、人参、黄精四味中药组方，心脑同治，具有补气养阴、活血化瘀、养心安神之功效，用于心脑血管疾病平稳期治疗兼预防，尤其对于亚健康人群心脑血管病的预防及心脑血管病引起的脑血栓等症的后期治疗，疗效确切，反馈良好。

中药组方遵循传统的君臣佐使配伍原则，处方各药味配伍协同发挥疗效。本研究采用现代药理实验，论证组方各药味的药效支撑作用，通过处方药味敲除法分别制备同工艺阴性样品，利用亚硝酸钠中毒引起的小鼠组织缺氧模型，从提高机体抗缺血缺氧能力的角度分析处方中各药味补气养阴功效；利用盐酸肾上腺素所致大鼠急性血瘀模型，从改善血液黏度、延长凝血时间的角度分析处方中各药味活血化瘀功效。通过研究，首次以现代药理实验阐述精芪双参胶囊抗缺氧、活血化瘀的药效作用，以及组方各药味协同配伍的药效支撑作用，为产品药效物质基础研究及质量标准提升提供支撑。

1 材料与方法

1.1 试验药物

精芪双参胶囊(批号：150819，有效期36个月)，由吉林长白山药业集团股份有限公司提供。

1.2 动物

Wistar大鼠(SPF级，体重180～220 g)、ICR小鼠(SPF级，体重18～22 g)，动物合格证为SCXK(吉)-2016-0003，购自长春市亿斯实验动物技术有限责任公司。

1.3 试剂

乙醇(批号：170512)、羧甲基纤维素钠(批号：170608)、亚硝酸钠(批号：170512)，购自北京化工厂；氯化钠注射液(批号：1509290509，购自吉林省都邦药业股份有限公司)；盐酸肾上腺素注射液(批号：1605201，购自天津金耀药业有限公司)。

1.4 仪器

RE52CS旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；XMTD-7000电热恒温水浴锅(天津天泰仪器有限公司)；真空干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；ME204E电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；超声清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；HH-S4数显恒温水浴锅(宁波新芝生物科技股份有限公司)；电子天平(JY2003，舜宇恒平仪器)；血液流变仪(LBY-N6，普利生公司)。

1.5 实验方法

1.5.1 样品制备 精芪双参胶囊处方：黄芪、丹参、人参、黄精。

精芪双参生产工艺：以上四味，取50%量人参、黄芪粉碎成细粉，过筛，混匀；其余黄芪、黄精加水煎煮2次，第一次2 h，第二次1.5 h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20(80 ℃)，加入乙醇使含醇量达到65%，放置过夜，滤过，滤液备用；丹参加70%乙醇回流2次，第一次3 h，第二次2 h，合并提取液，滤过，与上述滤液合并，回收乙醇，并浓缩至相对按照上述生产工艺，以1倍处方量，分别制备缺少黄芪、丹参、人参、黄精的阴性样品，依次标记为黄芪阴性密度为1.20(50 ℃)的稠膏，加入50%量的人参、黄芪细粉，混匀，干燥后粉碎，过筛，再干燥，加入余下的人参黄芪细粉，混匀，制粒，装胶囊，制成1 000粒，即得。

按照上述生产工艺，以1倍处方量，分别制备缺少黄芪、丹参、人参、黄精的阴性样品，依次标记为黄芪阴性、丹参阴性、人参阴性、黄精阴性，各样品制备相对得率，见表1，置于干燥器内阴凉处存储。

1.5.2 给药剂量及配制 精芪双参临床用药剂量为一次4粒(0.23 g/粒)、一日3次，即2.76 g/人/d，折算至小鼠为0.42 g/kg/d、大鼠0.29 g/kg/d。本文采用临床给药剂量的2.5倍进行实验，即精芪双参胶囊组小鼠给药剂量为1.00 g/kg，大鼠给药剂量为0.72 g/kg。黄芪阴性组、丹参阴性组、人参阴性组、黄精阴性组，按全方减药味后的制备量进行给药，各组给药剂量，见表1。各组样品溶于0.5%羧甲基纤维素钠的生理盐水中，充分混悬，每次灌胃给药前新配置，灌胃体积10 mL/kg。

表1 样品制备及给药剂量

1.5.3 小鼠亚硝酸钠中毒缺氧药效筛选模型 雌性ICR小鼠，随机分为模型组、精芪双参组、黄芪阴性组、丹参阴性组、人参阴性组、黄精阴性组，每组8只。模型组每日灌胃0.5%羧甲基纤维素钠的生理盐水，其余各组灌胃对应样品，连续给药7 d，末次灌胃给药30 min后，各组分别腹腔注射亚硝酸钠溶液0.2 g/kg，造成小鼠中毒性组织缺氧模型，立即记录从腹腔注射开始至小鼠腹式呼吸消失的时间，即为小鼠存活时间[1-4]。

1.5.4 大鼠急性血瘀药效筛选模型 雌性Wistar大鼠，随机分为空白组、模型组、精芪双参组、黄芪阴性组、丹参阴性组、人参阴性组、黄精阴性组，每组8只。空白组、模型组每日灌胃0.5%羧甲基纤维素钠的生理盐水，其余各组灌胃对应样品，连续给药27 d，于第27天大鼠皮下注射盐酸肾上腺素注射液0.8 mg/kg，连续注射2次，间隔时间为4 h，并于第一次皮下注射2 h后，将大鼠置于0～2 ℃冰水中游泳4 min，造成大鼠急性血瘀模型，禁食不禁水，于最后一次皮下注射盐酸肾上腺素12 h后，10%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，测全血黏度(150 s-1、60 s-1、10 s-1、5 s-1)[5-8]。

采用玻片法测定凝血时间：取各组大鼠腹主动脉血0.1 mL，滴于玻片中央，立即计时，每隔30 s，用针头将血滴由外向内轻轻挑动一次，直至血滴挑出血丝为止，记录时间，即为凝血时间。如凝血时间超过30 min，按30 min计算[9-11]。

1.6 统计学处理

2 结果与讨论

2.1 小鼠亚硝酸钠中毒缺氧模型药效评价结果

经灌胃给药7 d后，各给药组及模型组动物状态均良好，毛发顺滑，饮水饮食及大小便正常，腹腔亚硝酸钠中毒后，各给药组小鼠存活时间结果，见表2。

组别剂量(g/kg)存活时间(min)模型组-26.06±3.60精芪双参组1.0534.09±3.23##黄芪阴性组0.8928.74±6.05△丹参阴性组0.4227.25±3.54△△人参阴性组0.9533.83±7.03#黄精阴性组0.9233.61±6.43#

注：与模型组比较：# #P<0.01，#P<0.05；与精芪双参组比较：△△P<0.01，△P<0.05。

精芪双参胶囊药效分析：与模型组比较，精芪双参组极显著延长亚硝酸钠中毒小鼠的存活时间(P<0.01)，表明精芪双参胶囊具有抗组织缺氧的功能。

缺少黄芪、丹参的阴性处方组药效分析：与精芪双参组小鼠存活时间比较，黄芪阴性组、丹参阴性组具有显著性差异(P均<0.05)；与模型组比较，黄芪阴性组、丹参阴性组小鼠存活时间略长，但无显著差异(P>0.05)；实验表明缺少黄芪或丹参的阴性处方与精芪双参胶囊相比药效显著降低，不具备延长亚硝酸钠中毒小鼠存活时间的作用，无明显抗组织缺氧功能，提示处方中黄芪、丹参是精芪双参胶囊抗组织缺氧的主要药味。

缺少人参、黄精的阴性处方组药效分析：与精芪双参组比较，人参阴性组、黄精阴性组延长亚硝酸钠中毒小鼠存活时间略低，但不具有统计学意义(P>0.05)；与模型组比较，人参阴性组、黄精阴性组显著延长小鼠存活时间(P<0.05)，实验表明缺少人参、黄精的阴性处方仍具有显著的抗组织缺氧药效作用，且与精芪双参胶囊相当，仅有轻微下降(P>0.05)，提示处方中人参、黄精两味药在精芪双参胶囊抗组织缺氧药效方面贡献较小。

2.2 大鼠急性血瘀模型药效评价结果

经灌胃给药27 d后，动物状态良好，毛发顺滑，饮水饮食及大小便正常，急性血瘀造模后，各组药效实验结果，见表3。

组别剂量(g/kg)全血黏度(mPa·s)150s-160s-110s-15s-1凝血时间(min)空白组———3.34±0.214.30±0.196.30±0.127.82±0.076.79±0.12模型组———4.30±0.12**5.30±0.46**8.71±0.17**11.78±0.13**3.89±0.40**精芪双参组0.753.65±0.18##4.40±0.10##7.91±0.44##9.85±0.72##4.74±0.40##黄芪阴性组0.604.22±0.08△△4.93±0.31△△8.70±0.12△△11.63±0.25△△3.80±0.10△△丹参阴性组0.304.27±0.07△△4.99±0.32△△8.74±0.13△△11.74±0.10△△4.02±0.55△△人参阴性组0.653.74±0.13##4.50±0.22##7.94±0.11##10.00±0.23##4.57±0.09##黄精阴性组0.623.76±0.11##4.50±0.20##7.96±0.01##9.97±0.18##4.69±0.08##

注：与模型组比较：##P<0.01，#P<0.05；与精芪双参组比较：△△P<0.01，△P<0.05。

结果显示，大鼠经过注射盐酸异丙肾上腺素联合冰浴造模后，全血黏度不同切率(150 s-1、60 s-1、10 s-1、5 s-1)与空白组相比，均显著升高(P<0.01)，凝血时间显著降低(P<0.01)，表明急性血瘀模型复制成功。

精芪双参胶囊药效分析：与模型组比较，精芪双参组各切率下全血黏度及凝血时间均显著降低(P<0.01)，表明精芪双参胶囊显著降低盐酸肾上腺素引起急性血瘀大鼠全血黏度，延长凝血时间表明产品具有活血化瘀的功能。

缺少黄芪、丹参的阴性处方组药效分析：与精芪双参组相比，黄芪阴性组、丹参阴性组各切率下全血黏度及凝血时间差异显著(P<0.01)；与模型组比较，黄芪阴性组、丹参阴性组大鼠各切率下全血黏度及凝血时间无显著差异(P>0.05)，表明缺少黄芪或丹参的阴性处方与精芪双参胶囊相比药效显著降低，已不具备改善急性血瘀状态下机体的全血黏度及凝血时间的显著药效作用，提示处方中黄芪、丹参是精芪双参胶囊活血化瘀的主要药味。

缺少人参、黄精的阴性处方组药效分析：与精芪双参组比较，人参阴性组、黄精阴性组对全血黏度及凝血时间存在一定改善趋势，但不具有统计学意义(P>0.05)；与模型组比较，两组各切率下全血黏度显著降低(P<0.01)、凝血时间显著延长(P<0.01)，证明缺少人参、黄精的阴性处方仍具有显著的活血化瘀药效作用，与精芪双参胶囊相当，仅有轻微下降(P>0.05)，提示处方中人参、黄精两味药在精芪双参胶囊活血化瘀药效方面贡献较小。

3 结论

精芪双参胶囊在抗组织缺氧、活血化瘀方面疗效显著，通过处方药味敲除法，将缺少各味药的阴性处方分别作用于亚硝酸钠中毒引起的缺氧模型、盐酸肾上腺素引起急性血瘀模型，结果表明精芪双参胶囊黄芪、丹参两味君臣药的药效支撑作用突出，可作为产品药效物质基础研究及质量标准提升的主要研究对象。