加工温度对昭通天麻和天麻片品质影响的探索

刘金美，胡德分，丁培超，崔琼芳，周明月，余显伦,＊

（1.昭通市天麻研究院，云南昭通 657000；2.勐腊海关检验检疫技术中心，云南勐腊 666300；3.昭通市天麻特产局，云南昭通 657000）

天麻（Gastrodia elata Bl.）为兰科天麻属植物的干燥块茎，是一味名贵中药材，具有息风止痉、平肝潜阳、祛风通络的功效，药理作用有抗痉挛、抗惊厥、镇静催眠、镇痛、促智抗衰老、增加脑血流量、改善供血、神经保护等。临床多用于头痛眩晕、肢体麻木、小儿惊风、癫痫、抽搐、破伤风等症。

目前，昭通市场上的天麻产品除了少量的药品和保健品外，大部分以鲜天麻和初加工产品（如天麻片，干天麻和天麻粉）进行销售，通过调研发现，鲜天麻的初加工过程，大部分是在各产地由麻农自己加工，由于受加工和检测条件的限制，无法测定天麻素的含量，仅凭天麻的外观判断其品质。因加工方法的不同，加工出来的天麻初加工产品质量差异较大[1-3]。李德勋等[4]调查和考察昭通天麻传统加工工艺时发现，影响天麻药材中天麻素含量的因素为烘烤温度。袁胜浩等[5]研究天麻中天麻素含量的影响因素时发现，天麻素含量经炮制后明显增高，蒸制是提高天麻素含量最有效的方法，随蒸制温度升高，天麻素含量增加；除此之外，天麻素含量还与烘烤的温度有关，具体的相关性还有待进一步研究。徐顶巧等[6]研究表明，对于鲜天麻在干制过程中各因素对天麻素含量的影响顺序为烘干温度＞蒸煮时间＞放置时间，且随温度升高，天麻素含量增加。但是温度也不是越高越好，季德等[7]研究发现温度过高，天麻内部会出现空心，表皮会有起泡现象。因此，为了指导药农正确的掌握天麻加工技术，本实验参照传统的天麻药材加工方法，考察加工温度对昭通天麻初加工产品的天麻素和对羟基苯甲醇含量的影响。

1 仪器和试剂材料

1.1 仪器

岛津LC-20AT型高效液相色谱仪（SPD-20A 型紫外检测器）（岛津企业管理（中国）有限公司）；FST-PF-UP菲尔普斯超纯水仪；CP124C电子天平（上海奥豪斯仪器有限公司）；RE-3000旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；GZX-9240MBE电热鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；SK250LHC超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；JP-500C-8高速多功能粉碎机（永康市久品工贸有限公司）。

1.2 试剂材料

1.2.1 试剂

天麻素和对羟基苯甲醇对照品，生产厂家为南京森贝伽生物科技有限公司；乙腈、甲醇，均为色谱纯（64271 Darmstdt，Merck KGaA 德国公司）；无水乙醇（AR），生产厂家为成都市科隆化学品有限公司；磷酸（AR），生产厂家为重庆川东化工（集团）有限公司。

1.2.2 材料

鲜天麻样品，2016年11月4日采自昭通市彝良县小草坝乌葩岭。

2 方法

2.1 样品处理方法

2.1.1 样品前处理

将采挖回来的无病虫害、无伤的鲜天麻洗净，晾干水分，测定鲜重，常压蒸制透心。

2.1.2 天麻片样品处理方法

天麻片样品处理方法见表1。

2.1.3 天麻样品处理方法

天麻样品处理方法见表2。

表1 天麻片样品处理方法

2.2 检测方法

2.2.1 色谱条件

填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）；流速：1 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：10 μL；检测波长：220 nm；理论塔板数按天麻素峰值计算应不低于5 000。

表2 天麻样品处理方法

2.2.2 标准曲线的制备

将天麻素和对羟基苯甲醇对照品于105 ℃鼓风干燥箱内干燥1 h，分别精密称定天麻素对照品5 mg、对羟基苯甲醇对照品 2.5 mg，置于 100 mL 容量瓶中，加乙腈-水（3∶97）混合溶液制成每1 mL含天麻素50 μg、对羟基苯甲醇25 μg的混合溶液，作为天麻素对照品和对羟基苯甲醇对照品储备液。精密吸取天麻素对照品和对羟基苯甲醇对照品储备液 2、4、6、8、10 mL 分别置于 10 mL 容量瓶中，用乙腈-水（3∶97）混合溶液稀释至刻度，由此配成天麻素浓度为10、20、30、40、50 μg/mL和对羟基苯甲醇浓度为5、10、15、20、25 μg/mL的5个不同浓度的对照品溶液。按“2.2.1”项下色谱条件进样，记录峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标，以对照品溶液浓度（X）为横坐标，建立标准曲线。

2.2.3 样品溶液的制备

取天麻样品粉末（过三号筛），精密称取2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，称定重量，超声处理（功率 120 W，频率 40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液10 mL，浓缩至近干无醇味，残渣加乙腈-水（3∶97）混合溶液溶解，转移至25ml容量瓶中，用乙腈-水（3∶97）混合溶液稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用。

2.3 测定方法

参照《中国药典》2015年版第四部的通则0512项[8]，采用高效液相色谱法测定天麻素和对羟基苯甲醇。天麻素和对羟基苯甲醇总含量不得少于0.25%。多组间比较采用SPSS 20.0系统分析软件One-way AVONA方差分析。

3 结果与分析

3.1 对照样品的标准曲线

以峰面积（Y）为纵坐标，以对照品溶液浓度（X）为横坐标，天麻素线性回归方程为Y=17 521.5X-17 619.8（r=0.999 9），对羟基苯甲醇线性回归方程为 Y=30 618.3X-36 237.6（r=0.999 9），天 麻 素 浓度在10.00～50.00 μg/mL和对羟基苯甲醇浓度在5.00～25.00 μg/mL范围内线性关系良好。

3.2 方法学考察

3.2.1 稳定性试验

取一供试品溶液，于 0、2、4、6、8、12、24 h各进样1次，测得天麻素浓度分别为48.198、47.973、48.185、48.163、48.201、48.206、48.212 μg/mL，RSD为0.18%；对羟基苯甲醇浓度为23.372、22.986、23.412、23.403、23.392、23.336、23.384 μg/mL，RSD为0.65%。说明供试品溶液在24 h 内稳定。

3.2.2 精密度试验

取天麻素和对羟基苯甲醇对照品溶液，重复进样5次，以天麻素和对羟基苯甲醇浓度进行计算，RSD为0.45%，说明仪器精密度良好。

3.2.3 加样回收率试验

精密称取已知含量的同一天麻样品1 g，共5份，分别精密加入等量的天麻素和对羟基苯甲醇对照品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，检测天麻素和对羟基苯甲醇含量，测得天麻素的平均加样回收率为99.5%，RSD为3.63%；测得对羟基苯甲醇的平均加样回收率为99.7%，RSD为2.83%。

3.2.4 重复性实验

称取同一天麻样品粉末5份，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，检测天麻素和对羟基苯甲醇含量，其RSD分别为1.86%和2.30%。

3.3 不同加工温度对天麻初加工产品天麻素和对羟基苯甲醇含量的影响

3.3.1 不同加工温度对鲜天麻成片的天麻素和对羟基苯甲醇含量的影响

鲜天麻洗净，蒸制后切成纵片，置于实验方案中预设的恒温和变温温度烘干，测定结果如表3所示。在变温条件下，以先65 ℃后50 ℃（表3P6）烘干的天麻片天麻素和对羟基苯甲醇含量之和最高，为0.6118%；恒温条件下，以55 ℃（表3P2）烘干的天麻片天麻素和对羟基苯甲醇含量之和较高，为0.4854%，天麻片在设置的恒温温度下，天麻素和对羟基苯甲醇含量之和随着温度的升高呈先升后降的趋势。各组之间天麻素含量和对羟基苯甲醇含量存在显著性差异。

3.3.2 不同加工温度对干天麻的天麻素和对羟基苯甲醇含量的影响

鲜天麻洗净、蒸制后，置于实验方案中预设的恒温和变温温度条件下烘干，检测结果如表4所示。恒温条件下，在所设的温度范围内，天麻素和对羟基苯甲醇含量随温度的升高而增加，以65 ℃（表4中K4）烘干天麻的天麻素和对羟基苯甲醇的含量之和最高，为0.6945%；同时，天麻素的含量是随温度的升高而增加，以65℃（表4中K4）烘干天麻的天麻素的含量最高，值为0.5701%；变温条件下，以先50 ℃后65 ℃（表4中K5）烘干天麻的天麻素和对羟基苯甲醇含量之和最高，为0.6812%，天麻素含量以65 ℃（表4中K5）最高，为0.4846%。各组之间天麻素含量和对羟基苯甲醇含量存在显著性差异。

表3 不同温度干天麻片天麻素和对羟基苯甲醇含量统计表（%，n=3）

表4 不同温度干天麻中天麻素和对羟基苯甲醇含量统计表（%，n=3）

4 结论

综上所述，恒温条件下，天麻片的干燥温度以55℃为最佳温度；变温条件下，以先65 ℃后50 ℃为最佳加工温度；干天麻的干燥温度以65 ℃和先50 ℃后65 ℃为最佳温度。温度如若再高，天麻片会出现焦黄的现象，天麻片边卷曲；天麻在短时间内迅速脱水，天麻表皮会出现褶皱多而深、内部空心和起泡现象；温度到达65 ℃时，无论是天麻片还是干天麻，天麻素含量才有明显增加的趋势。季德等[7]研究结果表明：微波干燥组、微波红外联用组天麻素含量显著增高，对羟基苯甲醇、巴利森苷含量减少，说明较高温度会引起成分间的相互转化，本实验结果与这一结论相一致，但天麻素和对羟基苯甲醇及其他有效成分之间的转化机理还有待进一步研究。