系统性红斑狼疮患儿血清sCTLA4、TNF-α水平表达及其临床意义

信 军，康 乐，张艺森，张 剑

(河南省驻马店市中心医院新生儿科，河南 驻马店 463000)

系统性红斑狼疮(SLE)是一种累及多系统的自身免疫性疾病，发病机制复杂，多认为以各种免疫异常为特征，包括T细胞和B细胞活化失调及循环中B细胞多克隆活化，产生大量自身反应性抗体和大量免疫复合物，导致机体多器官损伤[1]。研究证实[2，3]，T细胞活化需要双信号，B7-CD28通路构成的协同刺激信号作为T细胞活化的第二信号参与多种免疫性疾病及肿瘤的发病过程。细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA4)属免疫球蛋白超家族成员，可与CD28竞争性与B7结合，阻止T细胞进一步活化[4]。sCTLA4是CTLA4的可溶形式，目前关于sCTLA4的报道较少。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种具有多种生物学活性的细胞因子，研究发现它在免疫系统细胞间具相互联系的介导作用，在自身免疫性疾病中或可起到一定作用[5]。本研究检测SLE患儿血清中sCTLA4、TNF-α的水平表达，并分析sCTLA4、TNF-α在SLE发病中的作用及意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料2017年10月至2018年10月我院就诊的SLE患儿40例(SLE组)，均符合《系统性红斑狼疮诊断标准及治疗进展》诊断标准[6]，且排除全身严重急性感染、合并其他自身免疫性疾病、肿瘤及严重心、肺、肾脏疾病者。男9例，女31例，年龄5～16岁[(10.85±4.26)岁]；病程1月至3年[(12.55±5.60)年]；根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分[7]将患儿分为活动期组(SLEDAI评分≥10分，22例)和静止期组(SLEDAI评分<10分，18例)。选取同期同年龄组无过敏性疾病及肿瘤疾病家族史的健康儿童40例为对照组，男11例，女29例，年龄6～16岁[(11.24±4.72)岁]。本研究获得医院伦理委员会批准，两组性别、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法采集两组研究对象晨间空腹状态静脉血3 ml，1500 r/min离心10 min，分离血清后冻存于-80 ℃冰箱。择期行双抗体夹心ELISA方法测定血清标本中sCTLA4、TNF-α水平。

1.3 统计学方法应用SPSS 19.0软件处理数据。计数资料比较采用χ2检验；计量资料比较采用t检验；相关性分析采用Spearman相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SLE组与对照组血清sCTLA4、TNF-α水平比较SLE组血清sCTLA4、TNF-α水平高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 SLE组与对照组血清sCTLA4、TNF-α水平比较

2.2 活动期组与静止期组血清sCTLA4、TNF-α水平比较活动期组血清sCTLA4、TNF-α水平高于静止期组(P<0.05)。见表2。

表2 活动期组与静止期组血清sCTLA4、TNF-α水平比较

2.3 SLE患儿血清sCTLA4、TNF-α水平与SLEDAI评分的相关性分析SLE患儿血清sCTLA4、TNF-α水平均与SLEDAI评分显著正相关(r=0.770，0.757，P<0.05)。见图1、图2。

图1 SLE患儿血清sCTLA4与SLEDAI评分的相关性分析

图2 SLE患儿血清TNF-α水平与SLEDAI评分的相关性分析

3 讨论

SLE发病原因至今未明，多认为是在易患基因基础上受多种因素作用的结果，其中B细胞慢性持续性多克隆激活是激活是其发病的主要原因，病变可涉及多种组织、器官及系统，发病过程中伴多种细胞因子间的失衡[8]。产生自身抗体的B细胞活化需要T细胞表达的细胞因子和共刺激分子辅助，而T细胞活化需要双信号刺激：T细胞抗原受体(TCR)识别由抗原提呈细胞(APC)提呈的抗原肽复合物而传递的信号为第一信号，T细胞上共刺激受体与T细胞表面多个黏附分子相互作用时产生的辅助信号为第二信号。目前越来越多的研究发现[9，10]，第二信号的表达是建立在第一信号正常传递的基础上，第一信号传递受阻，则免疫反应无法进行；但若仅有APC作用的第一信号传递正常而缺少第二信号，就无法有效激活T细胞，导致T细胞克隆无反应或程序化细胞死亡，使机体丧失免疫监视作用，从而使免疫性疾病发病。刘芝翠等[11，12]研究发现，T细胞活化的第二信号异常参与多种免疫性疾病及肿瘤行疾病的发病。

B7-CD28通路构成的协同刺激信号在T细胞活化受机体多细胞因子调节过程中起着重要作用，可维持机体免疫平衡稳定性，是免疫学研究的热点[13]。而CTLA4属免疫球蛋白超家族成员，在氨基酸水平与CD28具有高度同源性，皆带有两个胞外结构域，但与CD28分子功能却截然相反，可与CD28竞争性与B7结合，干扰B7与CD28介导的共刺激，产生负性调节信号，抑制T细胞活化、增殖。Dahal等[14]研究发现，SLE、类风湿性关节炎(RA)等自身免疫性疾病的T细胞表面CD28、CTLA4的表达都发生了变化，提示这些共刺激分子异常表达或许与自身免疫性耐受的丧失导致的自身免疫性疾病相关。王璇等[15]动物研究对实验小鼠注射CTLA-4拮抗剂基因起到了治疗自身免疫性甲状腺炎的效果。sCTLA4是CTLA4的可溶形式，可通过干扰T细胞活化的第二信号参与多种免疫性疾病的发病。本研究对比发现，SLE组患儿血清sCTLA4水平显著高于对照组，活动期组患儿血清sCTLA4水平显著高于静止期组，且SLE患儿血清sCTLA4水平与SLEDAI评分显著正相关，提示SLE患儿血清sCTLA4水平异常升高，且随病情严重程度加重而持续升高，可推测sCTLA4在SLE患儿的发病及病情进展过程中可能具重要作用。

TNF-α是由活化的单核-巨噬细胞及T、B细胞分泌的细胞因子，具有多种生物学活性。国内外多项研究[16，17]已证实TNF-α可诱导角朊细胞和血管内皮细胞表达细胞间黏附分子，从而提供中性粒细胞与淋巴细胞的黏附位点，但其大量产生可导致机体免疫平衡被破坏，与其他炎症因子介导多种病理损伤，在炎症及自身免疫反应中具重要调控作用。本研究对比发现，SLE组患儿血清TNF-α水平显著高于对照组，活动期组患儿血清TNF-α水平显著高于静止期组，且SLE患儿血清TNF-α水平与SLEDAI评分显著正相关，与既往研究相符[18]，认为TNF-α水平异常升高可能会影响机体免疫紊乱，参与SLE的发生发展。

综上所述，sCTLA4、TNF-α参与了儿童SLE的发病过程，且与SLEDAI评分密切相关，可考虑作为监测儿童SLE病情活动严重程度的参考指标，有助于疾病的病情及预后评估。