miRNA-223在子宫肌瘤组织中的表达及临床意义分析

李焱 陈青龙 朱虹 祝健婵 钟彦培 熊小琴

【摘要】 目的：探讨miRNA-223在子宫肌瘤组织中的表达及临床意义。方法：选取2018年1-6月在本院行子宫肌瘤剔除术的子宫肌瘤患者60例为子宫肌瘤组，另选同期到本院体检的30例健康女性为正常对照组。采用RT-PCR法检测两组血清、子宫肌瘤组织和瘤旁正常组织中miRNA-223的表达，并分析miRNA-223表达与子宫肌瘤患者临床病理特征的关系。结果：子宫肌瘤组miRNA-223表达水平明显高于正常对照组（P<0.05）;子宫肌瘤组织miRNA-223表达水平明显高于瘤旁正常组织（P<0.05）;子宫肌瘤组织中miRNA-223的表达水平与年龄、肌瘤大小、肌瘤个数、病理类型及月经情况均有关（P<0.05）;由ROC曲线可知，其曲线下面积为0.847，95%CI（0.628，1.395），当miRNA-223的截断值为≥6.50时，其诊断敏感度为91.43%，特异度为80.26%。结论：miRNA-223在子宫肌瘤组织中呈高表达，其表达可能与子宫肌瘤的发生发展密切相关。

【关键词】 子宫肌瘤; miRNA-223; RT-PCR; 表达

【Abstract】 Objective：To investigate the expression and clinical significance of miRNA-223 in hysteromyoma.Method：60 patients with hysteromyoma who underwent hysteromyomectomy in our hospital from January to June 2018 were selected as hysteromyoma group，30 healthy women who came to our hospital for physical examination at the same time were selected as normal control group.RT-PCR was used to detect the expression of miRNA-223 in serum of two groups，the expression of miRNA-223 in hysteromyoma and normal tissue adjacent to tumors，the relationship between the expression of miRNA-223 and the clinicopathological characteristics of patients with hysteromyoma were analyzed.Result：The expression level of miRNA-223 in hysteromyoma group was significantly higher than that of normal control group（P<0.05）.The expression level of miRNA-223 in hysteromyoma tissue was significantly higher than that of normal tissue adjacent to tumors（P<0.05）.The expression level of miRNA-223 in hysteromyoma was correlated with age，size of leiomyoma，number of leiomyomas，pathological type and menstruation（P<0.05）.The ROC curve showed that the area under the curve was 0.847，95%CI（0.628，1.395），when the cut-off value≥6.50，the diagnostic sensitivity and specificity were 91.43% and 80.26% respectively.Conclusion：miRNA-223 is highly expressed in uterine fibroids，and its expression may be closely related to the occurrence and development of uterine fibroids.

【Key words】 Hysteromyoma; miRNA-223; RT-PCR; Expression

First-authors address：Jiangmen Peoples Hospital，Jiangmen 529020，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.13.006

子宮肌瘤是妇科临床最常见的疾病之一，其是一种良性肿瘤，常见的临床表现为疼痛、子宫出血、白带增多、月经不调、不孕、流产、贫血、腹部包块及压迫症状等，严重影响女性的身心健康[1]。目前，尚不清楚子宫肌瘤的确切病因，以往的研究显示正常肌层的细胞突变、性激素及局部细胞因子间的相互作用与子宫肌瘤的发生有关[2-3]。miRNA是一类长度为18～24个核苷酸的内源性小RNA[4]，近年来的研究表明，miRNA参与细胞代谢、增殖、分化及凋亡等的调控，并与肿瘤的发生发展密切相关[5]。最近研究发现，miRNA-223在多种女性特发性肿瘤，如乳腺癌、卵巢癌及子宫内膜癌等中发挥作用[6]，因此，本研究进一步探讨了miRNA-223在子宫肌瘤组织中的表达及临床意义。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1-6月在本院行子宫肌瘤剔除术的子宫肌瘤患者60例为子宫肌瘤组，另选同期到本院体检的30例健康女性为正常对照组。纳入标准：根据《妇产科学》且术后病理诊断为子宫肌瘤[7];年龄25～55岁;术前3个月内未接受激素治疗。排除标准：合并严重心肝肾功能不全者，精神疾病者，凝血功能障碍者及其他妇科疾病者。本研究经医院伦理学委员会审批，且研究对象均知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 试剂与设备 Trizol总RNA提取试剂盒、逆转录酶试剂盒、miR-223引物购自生工生物工程（上海）股份有限公司;qRT-PCR检测试剂盒由广州锐博生物科技有限公司提供;实时荧光定量PCR仪购自ABI公司;紫外分光光度计购自赛默飞公司。

1.2.2 样本采集 于术后15 min内收集患者新鲜子宫肌瘤组织和瘤旁正常组织（距子宫肌瘤组织边缘≥2 cm）作为检测样本，立即经液氮冷冻处理，并于-80 ℃的冰箱中保存待用。两组均采集晨起空腹外周静脉血3 mL，3 000 r/min，4 ℃，离心10 min后，分离血清至无RNA酶EP管中，也于-80 ℃保存待用。

1.2.3 逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR） （1）组织和血清总RNA的提取：超声匀浆后按照TRIzol试剂盒说明书操作，提取组织和血清中总RNA，DEPC水溶解，检测RNA的完整性、纯度及浓度。（2）逆转录反应：按照逆转录试剂盒操作说明书操作，将miR-223反转录为cDNA，反应体系为20 μL，依次加入以下试剂：总RNA 1 μL、10×RT buffer 1.5 μL、1 μmol/L逆转录特异性引物 3μL、50 U/μL反轉录酶（MultiScribeTM Reverse Transcriptase）1.0 μL、20 U/μL RNA酶抑制剂0.19 μL、100 mmol/L dNTPs 0.15 μL，加DEPC水补至20 μL。反应条件：16 ℃ 30 min，42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 s，产物置于-20℃保存。（3）PCR扩增：按照PCR试剂盒操作说明书进行PCR扩增。反应体系为20 μL，并依次加入以下试剂：逆转录产物cDNA 1 μL、引物1 μL、RT混合液（TaqMan GEx MASTER Mix）10 μL，加双蒸水补至20 μL。反应条件：95 ℃反应30 s，95 ℃反应15 s，60 ℃反应30 s，共30个循环。（4）采用ΔCt值法对PCR结果进行分析，?Ct值=Ct值（miRNA-223）-Ct值（内参基因）。

1.3 观察指标 记录两组血清miRNA-223的相对表达量;记录子宫肌瘤组织和瘤旁正常组织中miRNA-223的相对表达量。

1.4 统计学处理 使用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验，组内比较采用配对t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基线资料比较 子宫肌瘤组年龄25～54岁，平均（35.6±2.5）岁;正常对照组年龄26～53岁，平均（34.7±2.9）岁。两组患者年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组血清中miRNA-223表达水平比较 子宫肌瘤组miRNA-223表达水平为（4.29±0.34），明显高于正常对照组的（1.03±0.25），差异有统计学意义（t=51.481，P=0.000），见图1。

2.3 子宫肌瘤组织、瘤旁正常组织中miRNA-223表达水平比较 子宫肌瘤组织miRNA-223表达水平为（6.94±0.76），明显高于瘤旁正常组织的（1.54±0.37），差异有统计学意义（t=49.484，P=0.000），见图2。

2.4 子宫肌瘤患者miRNA-223表达与临床病理特征的关系分析 子宫肌瘤组织中miRNA-223的表达水平与年龄、肌瘤大小、肌瘤个数、病理类型、及月经情况均有关（P<0.05），见表1。

2.5 瘤组织中miRNA-223对子宫肌瘤的诊断效

能 由ROC曲线可知，其曲线下面积为0.847，95%CI（0.628，1.395），当miRNA-223的截断值为≥6.50时，其诊断敏感度为91.43%，特异度为80.26%，见图3。

3 讨论

子宫肌瘤是育龄期女性多发的一种良性肿瘤，研究显示，我国子宫肌瘤的发病率呈逐年增多和年轻化的趋势[8]。普遍认为，子宫肌瘤的发生发展是由多因素、多环节共同作用所决定[9]。以往的研究显示正常肌层的细胞突变、性激素及局部细胞因子间的相互作用与子宫肌瘤的形成和生长有关[10-11]，此外，子宫肌瘤的发病还可能与年龄、妊娠史、流产史、遗传因素等因素有关[12]。然而，目前尚不十分清楚子宫肌瘤的确切病因[13]。

miRNA是一类长度为18～24个核苷酸的内源性小RNA，在正常生理状态下，机体内miRNA的表达具有严格的组织时序特异性，但在肿瘤环境下miRNA往往表达异常，发挥类似抑癌基因作用[14-16]。

有研究显示，miRNA参与细胞代谢、增殖、分化及凋亡等的调控，并与肿瘤的发生发展密切相关[17-18]。最近的研究发现，miRNA-223在多种女性特发性肿瘤，如乳腺癌、卵巢癌及子宫内膜癌等中发挥作用[19]，然而miRNA-223在子宫肌瘤中的表达情况报道较少，因此，本研究探讨了miRNA-223在子宫肌瘤组织中的表达及临床意义。

本研究结果显示，子宫肌瘤组miRNA-223表达水平明显高于正常对照组（P<0.05）;子宫肌瘤组织miRNA-223表达水平明显高于瘤旁正常组织（P<0.05），这提示miRNA-223的高表达可能在子宫肌瘤的发生发展过程中起到促进作用，这与miRNA-223在其他女性特发性肿瘤组织中的表达情况相似[20-21]。进一步采用ROC曲线分析发现，瘤组织中miRNA-223对子宫肌瘤的诊断敏感性和特异性均较高。本研究结果还显示，子宫肌瘤组织中miRNA-223的表达水平与年龄、肌瘤大小、肌瘤个数、病理类型及月经情况均有关（P<0.05），这进一步提示miRNA-223可能参与子宫肌瘤的发生发展。

综上所述，miRNA-223在子宫肌瘤组织中呈高表达，其表达可能与子宫肌瘤的发生发展密切相关。存在的不足之处，本次研究纳入的样本量较少，今后会加大样本量的收集，对miRNA-223与子宫肌瘤的发生发展领域进行深入研究，以期为子宫肌瘤的临床诊治提供更有价值的参考依据。

参考文献

[1] Donnez J，Dolmans M M.Uterine fibroid management：from the present to the future[J].Hum Reprod Update，2016，22（6）：665-686.

[2] Ikhena D E，Bulun S E.Literature Review on the Role of Uterine Fibroids in Endometrial Function[J].Reprod Sci，2018，25（5）：635-643.

[3] Silberzweig J E，Powell D K，Matsumoto A H，et al.Management of Uterine Fibroids：A Focus on Uterine-sparing Interventional Techniques[J].Radiology，2016，280（3）：675-692.

[4] Slattery M L，Herrick J S，Pellatt D F，et al.MicroRNA profiles in colorectal carcinomas，adenomas and normal colonic mucosa：variations in miRNA expression and disease progression[J].Carcinogenesis，2016，37（3）：245-261.

[5]张鑫，惠越，张燕，等.MicroRNA-21与细胞损伤及凋亡的研究进展[J].重庆医学，2017，46（1）：120-123.

[6]郭婧澜，叶婷.miRNA在泌尿系统肿瘤发病、诊断及治疗中的作用研究进展[J].山东医药，2016，56（35）：108-111.

[7]谢幸，苟文丽.妇产科学[M].8版.北京：人民卫生出版社，2013.

[8]欧阳晨捷.子宫肌瘤的发病机制研究进展[J].中南医学科学杂志，2016，44（6）：708-711.

[9]刘素芳，姜泽允，郑凤俊，等.子宫肌瘤剔除术对不孕女性妊娠的影响及影响术后妊娠的相关因素分析[J].重庆医学，2017，11（A01）：8-11.

[10] Li Y，Ran R，Guan Y，et al.Aberrant Methylation of the E-Cadherin Gene Promoter Region in the Endometrium of Women With Uterine Fibroids[J].Reprod Sci，2016，23（8）：1096-1102.

[11] Song L，Shen L，Mandiwa C，et al.Induced and Spontaneous Abortion and Risk of Uterine Fibroids[J].J Womens Health（Larchmt），2017，26（1）：76-81.

[12] Hartmann K E，Velez Edwards D R，Savitz D A，et al.

Prospective Cohort Study of Uterine Fibroids and Miscarriage Risk[J].Am J Epidemiol，2017，186（10）：1140-1148.

[13]陈超，李冬华，王满元，等.子宫肌瘤细胞凋亡机制及药物靶点治疗研究要点探析[J].医学研究杂志，2017，46（3）：8-10，17.

[14]彭可可，欧阳伶宣，邓朝谦，等.MicroRNA研究概述[J].动物医学进展，2016，37（4）：110-114.

[15] Jayawardana K，Schramm S J，Tembe V，et al.Identification，Review，and Systematic Cross-Validation of microRNA Prognostic Signatures in Metastatic Melanoma[J].J Invest Dermatol，2016，136（1）：245-254.

[16]王思念，吕进，张巧云，等.miRNA与肿瘤侵袭转移[J].现代肿瘤医学，2016，24（3）：485-487.

[17] Ganju A，Khan S，Hafeez B B，et al.miRNA nanotherapeutics for cancer[J].Drug Discovery Today，2017，22（2）：424-432.

[18] Zhang Y，Lin J，Huang W，et al.The effect of circulating miR-223 on surveillance of different cancers：a meta-analysis[J].Onco Targets Ther，2017，10（2）：3193-3201.

[19]魏永宝，杨金瑞，尹焯，等.miR-223生物学功能及在肿瘤中作用[J/OL].创伤与急诊电子杂志，2016，4（3）：166-184.

[20] Wang F F，Zhang X J，Yan Y R，et al.FBX8 is a metastasis suppressor downstream of miR-223 and targeting mTOR for degradation in colorectal carcinoma[J].Cancer Lett，2017，388（7）：85-95.

[21] Pinatel E M，Orso F，Penna E，et al.miR-223 is a coordinator of breast cancer progression as revealed by bioinformatics predictions[J].PLoS One，2014，9（1）：859-864.

（收稿日期：2018-09-29） （本文編辑：董悦）