人工胃液和人工肠液中药用炭片对肾衰宁片的吸附作用研究*

崔 彦，余 莲，马玉蓉，谢 红

（重庆市第五人民医院药剂科，重庆 400061）

肠道吸附毒素是治疗慢性肾脏疾病的常用方法，临床常用药物为药用炭片，可从肠道吸附各种尿毒症毒素，降低患者体内毒素水平，延缓肾功能恶化速度[1]。慢性肾病患者常需同时使用多种药物，但目前缺少关于药用炭片对这些药物吸附能力的报道。本研究中参照以往的成果[2-3]，并经过改进，采用药物溶出度仪模拟人工胃液和人工肠液环境，考察药用炭片在其中对肾衰宁片中有效成分盐酸小檗碱和丹参素钠的吸附情况。现报道如下。

1 仪器与试药

仪器：1100型高效液相色谱仪，包括G1314可变波长紫外检测器和G1311一元泵（美国Agilent公司）；RCZ-8B型智能药物溶出仪（天津天大天发科技有限公司）。

试药：药用炭片（河北长天药业有限公司，批号为48161120，规格为每片0.3 g）；肾衰宁片（山西德元堂药业有限公司，批号为71218008，规格为每片0.36 g）；盐酸小檗碱对照品（上海安普实验科技股份有限公司，批号为R3550010，含量为98.8%）；丹参素钠对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110855-200506，含量为99.6%）；胃蛋白酶（批号为 170408，规格为 1 ∶10 000）、胰酶（批号为170415，规格为1∶250）均购自上海如吉生物科技发展有限公司；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

盐酸小檗碱：色谱柱为Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈 -0.4%磷酸溶液（32 ∶68，V/V），流速为 1.0 mL/min，检测波长为 345 nm，柱温为 40 ℃，进样量为 20 μL[4]。

丹参素钠：色谱柱同上，流动相为甲醇-1%磷酸溶液（4 ∶96，V/V），流速为 0.8 mL/min，检测波长为281 nm，柱温为 35 ℃，进样量为 20 μL[5]。

2.2 溶液制备

人工胃液：取稀盐酸（取盐酸234 mL，加水稀释至1 000 mL，即得）16.4 mL，加水约800 mL及胃蛋白酶10 g，摇匀，加水稀释成 1 000 mL，即得[6]119。

人工肠液：取磷酸二氢钾6.8 g，加水500 mL使溶解，得磷酸二氢钾溶液（用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.8）；另取胰酶10 g，加水使溶解，得胰酶溶液；上述2种溶液混合，加水稀释至1 000 mL，即得[6]325。

对照品溶液：取盐酸小檗碱对照品14.34 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，制成盐酸小檗碱质量浓度为0.028 7 g/L的对照品溶液。称取丹参素钠对照品18.32 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，加50%甲醇定容，摇匀，制成丹参素钠质量浓度为0.073 3 g/L的对照品溶液。

供试品溶液：参照2015年版《中国药典（四部）》通则0931“溶出度与释放度测定法”中第三法（小杯法）[7]121测定，溶出介质200 mL（人工胃液或人工肠液），恒温控制在（37.0±0.5）℃，转速 100 r/min，将药用炭片 6片和肾衰宁片5片同时投入同一溶出杯（规格为250 mL）中，同时将肾衰宁片5片单独投入盛有相同体积溶出介质的另一溶出杯中，分别于0.5，1.0，2.0，4.0 h时取一定量溶出液，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。自取样至滤过在30 s内完成。量取的溶出介质的体积之和如超过总体积的1%时则补充等温度等体积的溶出介质。

阴性对照溶液：取按处方比例除丹参、大黄、黄连外的其他药材和辅料制作的制剂，按供试品溶液制备方法操作，即得。

图1 高效液相色谱图（盐酸小檗碱，人工胃液）

图2 高效液相色谱图（丹参素钠，人工胃液）

2.3 方法学考察

专属性试验：取2.2项下对照品溶液、阴性对照溶液各适量，按2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图。详见图1至图4。可见，阴性对照品溶液在与盐酸小檗碱对照品和丹参素钠对照品溶液相同保留时间处无干扰峰，表明方法专属性良好。

线性关系考察：1）盐酸小檗碱，取2.2项下盐酸小檗碱对照品溶液，加流动相依次稀释10，100，200，500，1 000倍，制成系列对照品溶液，各精密量取20 μL，按2.1项下盐酸小檗碱色谱条件进样测定，记录峰面积。以盐酸小檗碱质量浓度（X，μg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=120 536X+9.099 9，r=0.999 9（n=5）。结果表明，盐酸小檗碱检测质量浓度线性范围为0.028 7～28.680 0 μg/mL。2）丹参素钠，取2.2项下丹参素钠对照品溶液，加流动相依次稀释 5，10，20，50，100，150 倍，制成系列对照品溶液，各精密量取20 μL，按2.1项下丹参素钠色谱条件进样测定，记录峰面积。以丹参素钠质量浓度（μg/mL，X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=11 454X-3.849，r=0.999 8（n=6）。结果表明，丹参素钠检测质量浓度线性范围为0.732 8～73.280 0 μg/mL。

图3 高效液相色谱图（盐酸小檗碱，人工肠液）

图4 高效液相色谱图（丹参素钠，人工肠液）

中间精密度：由2名分析员分别在不同日期，按2.2项下方法制备供试品溶液，将5片肾衰宁片单独投入盛有人工胃液或人工肠液的溶出杯中，溶出4 h取样，再按2.1项下色谱条件在不同仪器上进样测定6次，记录峰面积。结果人工胃液和人工肠液中，盐酸小檗碱峰面积的RSD分别为1.08%和2.23%（n=12），丹参素钠峰面积的RSD分别为1.65%和1.78%（n=12），表明本试验中间精密度良好。

重复性试验：依法制备供试品溶液，将5片肾衰宁片单独投入盛有人工胃液或人工肠液的溶出杯中，平行操作6份，精密吸取每个溶出杯中的供试品溶液，再按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果人工胃液和人工肠液中，盐酸小檗碱峰面积的RSD分别为1.42%和2.53%（n=6），丹参素钠峰面积的RSD分别为2.13%和1.99%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密量取2.2项下供试品溶液、人工胃液、人工肠液各6份，分成6组，分别加入高、中、低质量浓度的盐酸小檗碱对照品溶液及丹参素钠对照品溶液，再按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果见表1和表2。

表1 盐酸小檗碱加样回收试验结果（n=9）

稳定性试验：取供试品溶液适量，分别于室温下放置 0，2，4，8，10，12，24 h 时按 2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果人工胃液和人工肠液中，盐酸小檗碱峰面积的RSD分别为2.54%和3.18%（n=7），丹参素钠峰面积的RSD分别为3.89%和3.26%（n=7），表明供试品溶液在室温下放置24 h内基本稳定。

表2 丹参素钠加样回收试验结果（n=9）

吸附率测定：取样品适量，依法制备供试品溶液，再按2.1项下色谱条件进样测定，平行测定5份，记录峰面积，并计算吸附率[吸附率=（1-吸附后溶液中盐酸小檗碱或丹参素钠峰面积/未吸附溶液中盐酸小檗碱或丹参素钠峰面积）×100%][7-8]。结果见表3至表6。

表3 人工胃液中盐酸小檗碱吸附情况（n=5）

表4 人工胃液中丹参素钠吸附情况（n=5）

表5 人工肠液中盐酸小檗碱吸附情况（n=5）

表6 人工肠液中丹参素钠吸附情况（n=5）

3 讨论

慢性肾脏病可导致各种代谢产物和毒素在体内蓄积，并引起系列临床症状和并发症。治疗的重要目标是清除毒素，改善症状。药用炭有发达的孔隙结构，对尿素、肌酐、尿酸有良好的吸附能力，可有效减少慢性肾病患者体内的各种毒素[9]。

本研究中分别采用人工胃液和人工肠液作介质，以模拟人体胃部和肠道环境，考察药用炭片在胃部和肠道中对与其合并服用的药物肾衰宁片中有效成分盐酸小檗碱和丹参素钠的吸附情况。结果表明，置同一溶出杯后，药用炭片对盐酸小檗碱和丹参素钠的吸附率随着时间的推移均逐渐增高，在人工胃液中2h可完全吸附盐酸小檗碱。人体胃排空时间为0.5～2.0h，由此推测，为减少药用炭片对肾衰宁片中有效成分的吸附，建议服用两药之间至少间隔2h。此外，由于人工肠液中药用炭片对肾衰宁片的吸附率低于人工胃液中，建议可将肾衰宁片制成肠溶制剂，以减少有效成分吸附。