藿夏胶囊的提取和成型工艺研究*

梁丽莉 ，王柳萍 ，林忠秋 ，黄光明 ，谭承梅 ，杨 斌 ，黄兴振 △

（1.广西医科大学药学院，广西 南宁 530021； 2.广西中医药大学药学院，广西 南宁 530299；3.广西医科大学第一附属医院，广西 南宁 530000）

藿夏胶囊源于民间验方，主要由淫羊藿、夏枯草等中药提取物组方。方中淫羊藿Epimedium brevicornuMaxim.多用于高血压、乳房肿块等症的临床治疗。淫羊藿苷抗肿瘤作用显著，可抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞分化、促进细胞凋亡及增强机体免疫力等[1]。夏枯草Prunella vulgarisL.为唇形科双子叶植物夏枯草的干燥果穗，有软坚散结、清火明目功效[2]。本课题组前期开展的安全性和药效学研究结果显示，在藿夏胶囊治疗剂量下，试验动物多项生理指标及临床检验指标均未显示出毒性反应。血清药理学试验结果表明，其含药血清对人大细胞肺癌H460细胞的抑制率24 h时达65.7%，48 h时达68.84%（P<0.01）。为建立藿夏胶囊的质量标准，本研究中采用正交试验法优选其提取工艺并确定成型工艺，为该制剂提供合理的提取和制剂成型方案。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-20A型高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；H2050R型医用离心机（湖南湘仪实验仪器开发有限公司）；101-1型电热鼓风恒温干燥箱（绍兴道墟浦鸿烘箱电炉厂）；AL-104型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器<上海>有限公司）；BJ-800A型多功能粉碎机（湖州德清拜杰电器有限公司）；YPGSD250型综合药品稳定性试验箱（上海苏盈试验仪器有限公司）。

1.2 试药

淫羊藿、夏枯草药材（北海天洄技术有限公司），经广西中医药大学药学院王柳萍教授鉴定为正品；淫羊藿苷对照品（批号为110737-201516，含量为95.0%)、迷迭香酸对照品（批号为 111871-201505，含量为95.0%），均购于中国食品药品检定研究院；乙腈、甲醇均为色谱纯，稀乙醇、三氟乙酸均为分析纯，硬脂酸镁、可溶性淀粉、糊精、磷酸钙等均为药用辅料级，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 提取工艺

2.1.1 吸水率试验

称取处方量药材（70.5 g，m1），加 12 倍量水，分别浸泡 30，60，90，120，150，180 min 后滤过蒸干，并称定药材质量(m2)。按公式W=（m2-m1）/m1×100%计算药材的吸水率。结果药材的吸水率为处方量的3倍。

2.1.2 含量测定

溶液制备：称取处方量药材（70.5 g），加3倍量水，浸泡30 min，回流提取，合并滤液，1 000 r/min离心10 min，减压抽滤，浓缩定容至250 mL，60℃烘干粉碎，得供试品，以水溶解，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液，置4℃保存，备用。取淫羊藿苷、迷迭香酸对照品各适量，分别加甲醇溶解，即得单一对照品溶液。

淫羊藿苷含量测定：色谱条件为色谱柱JADE-PAK ODS柱（250 mm×4.6mm，5μm），流动相乙腈-水（30∶70，V/V），流速 1 mL/min，检测波长 270 nm，柱温 30℃，进样量10 μL。取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成不同质量浓度的系列对照品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积，以峰面积积分值（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y1=0.000 013 22X1-0.064 32（r=0.999 3）。结果表明，淫羊藿苷质量浓度在0.1～5.0 μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好。取对照品溶液、供试品溶液各适量，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图1。结果理论板数按淫羊藿苷峰计大于6 000，分离度不小于1.5，基线分离良好。按标准进行精密度试验、稳定性试验、加样回收试验，结果日内、日间精密度试验的RSD分别为1.07%和1.36%（n=6），稳定性试验的RSD为0.44%（n=5），供试品溶液室温放置8 h内基本稳定；加样回收率为98.70%～100.50%，RSD为 1.48%（n=6）。

迷迭香酸含量测定：色谱条件为色谱柱JADE-PAK ODS-AQ 柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm），流动相甲醇 -0.1%三氟乙酸溶液（42 ∶58，V/V），流速 1 mL/min，检测波长330 nm，柱温35℃，进样量10 μL。取迷迭香酸对照品适量，加稀乙醇制成不同质量浓度的系列对照品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积，以峰面积积分值（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y2=0.000 015 00X2+0.114 9（r=0.999 4）。结果表明，迷迭香酸质量浓度在0.5～10.0 μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好。取对照品溶液、供试品溶液各适量，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图1。结果理论板数按迷迭香酸峰计大于6 000，分离度不小于1.5，基线分离良好。按标准进行精密度试验、稳定性试验、加样回收试验，结果日内、日间精密度试验的RSD分别为1.34%和1.57%（n=6）；稳定性试验的RSD为 0.84%（n=6），供试品溶液室温放置8 h内基本稳定；加样回收率为99.30%～101.40%，RSD为1.15%（n=6）。

样品含量测定：取供试品适量，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，平行3次，记录峰面积并计算含量。

2.1.3 干膏率测定

取供试品溶液100 mL，置蒸发皿中，80℃水浴锅蒸干水分，100～105℃烘箱中干燥3 h，移至干燥器中，放冷30 min，取干膏，精密称定，按公式W1=m干膏/m生药×100%计算供试品的干膏率（%），式中W1为干膏率，m为质量。

2.1.4 单因素分析

参照文献[3-5]，对药材提取影响较大的因素为提取时间、提取次数和提取水量，故分别对其做单因素分析。选择3个因素最佳的3个水平，提取时间分别为 1.0 h，1.5 h，2.0 h，提取水量分别为 10 倍，12 倍，14倍，提取次数分别为1次，2次，3次。

图1 高效液相色谱图

2.1.5 正交试验

以提取时间（因素 A）、提取水量（因素 B）、提取次数（因素 C）为 3因素，采用L9（34）正交试验法优选提取工艺。以淫羊藿苷含量（F1）、迷迭香酸含量（F2）及干膏率（F3）的综合评分作为指标[6-7]，三者的权重系数分 别 为 0.3，0.3，0.4。综 合 评分 =（F1×0.3+F2×0.3+F3×0.4）×100%。因素与水平见表 1，正交试验设计及结果见表2，方差分析结果见表3。可见，3个因素对有效成分的提取率均无显著影响。直观分析结果表明，影响水提效果强度的因素依次为提取次数>提取时间>提取水量。得提取工艺最优条件为A3B1C3。即10倍量水（首次为13倍）提取3次，每次2 h。

表1 因素与水平

表2 正交试验设计及结果

表3 方差分析结果

2.2 成型工艺

2.2.1 流动性考察

采用固定漏斗法测定[8]，平行3次。结果供试品的休止角平均值为45.5°(>40°)，提示流动性不佳，不适合直接装填于空胶囊中。

2.2.2 填充剂种类

供试品黏性大，制粒困难，易吸湿，故需添加适宜的填充剂[9]。本试验中选用的填充剂分别为糊精、可溶性淀粉、硬脂酸镁和磷酸钙，供试品与各填充剂比例均为1∶3（m/m），50%乙醇制软材后过14目筛制粒，60℃干燥。以软材质量、颗粒状态为指标进行考察。结果以磷酸钙作为填充剂时制得的软材质量好，颗粒成型性佳，故以其为填充剂制粒。

2.2.3 填充剂比例

在填充剂种类相同的前提下，填充剂比例的不同可造成制得颗粒成型性出现差异。将供试品与磷酸钙分别按 1 ∶2，1 ∶3，1 ∶4，1 ∶5（m/m）的比例混合[10]，50%乙醇制软材后过14目筛制粒，60℃干燥。以软材质量、颗粒状态为指标进行考察。结果当提取物与磷酸钙的比例为1∶4时（m/m），所制得的软材质量好，颗粒成型性佳，故选择供试品与磷酸钙的混合比例为1∶4（m/m）。

2.2.4 润湿剂体积分数

在不使用黏合剂的情况下，润湿剂直接影响颗粒的质量[11]。供试品与磷酸钙按1∶4（m/m）混合后，加入相同体积而体积分数不同的乙醇作为润湿剂。通过制粒情况、干燥后颗粒状态和相对湿度为50%时的吸湿率等指标对乙醇体积分数进行考察。结果见表4。可见，乙醇体积分数对吸湿性影响不大，但体积分数越高，含水量越少，颗粒越散，成型性越差。乙醇体积分数为50%时制粒情况最好，故本试验中选用50%乙醇作为润湿剂。

表4 不同乙醇体积分数的考察结果

表5 乙醇用量的考察结果

2.2.5 润湿剂用量

根据湿法制粒“握之成团、触之即散”的经验原则操作。供试品与磷酸钙以1∶4（m/m）混合后，分别以表5中不同比例的50%乙醇作为润湿剂，通过制粒情况、休止角、干燥后颗粒状态和相对湿度为50%时的吸湿率等指标对润湿剂乙醇的用量进行考察，结果见表5。可见，当供试品与乙醇润湿剂的比例为1∶0.48(m/V，g/mL)时制得的颗粒均匀，休止角小于40°，流动性较好，相对湿度为50%时吸湿率最低，故本试验中选用原料与乙醇的比例为1∶0.48(m/V)。

2.2.6 颗粒干燥温度

干燥温度也是影响颗粒成型质量的关键因素。取3份用上述方法制得的等量颗粒（30 g），分别置40，60，80℃恒温干燥箱干燥1 h，以颗粒状态、颗粒含水量为指标确定最适干燥温度，水分含量要求符合2015年版《中国药典（四部）》通则 0103“胶囊剂”项下规定[12]。结果干燥温度为60℃时，颗粒无黏连，含水量为5.64%。

2.2.7 颗粒临界相对湿度（CRH）[13]

分别取若干份同等质量的供试品和颗粒，干燥至恒重后转入恒重称量瓶内，平铺于底部，分别放入恒温25℃，相对湿度分别为40%，50%，60%，70%，80%，90%的药物试验稳定箱中，12 h后取出，精密称定，计算吸湿百分率，以相对湿度为横坐标、颗粒吸湿百分率为纵坐标，作不同湿度条件下颗粒吸湿率的曲线图，用切线法求得CRH。结果见图2。在相同条件下，颗粒的吸湿率总是低于粉末的吸湿率，供试品与填充剂混合制成颗粒后吸湿性降低。由颗粒两端点的切线方程求得颗粒CRH为63.83%。因此在实际生产过程中，车间环境相对湿度应控制在该值以下。

2.2.8 颗粒堆密度测定

采用量筒法[14]。将制得的干燥颗粒缓慢加入干燥至恒重的10 mL量筒中，颗粒加至约9.6 mL，记录体积并称定总质量，精密称定，计算颗粒堆密度，平行操作6次。结果颗粒的堆密度为0.440 g/mL。

图2 浸膏粉末与颗粒的吸湿性对比

2.2.9 空胶囊的规格选择[15]

民间验方的干膏用量应为每天1.2 g，结合颗粒的堆密度和填充剂的比例，按公式胶囊壳的可装量=颗粒的堆密度×胶囊壳的容积计算，本试验确定胶囊每粒装0.33g，每天3次，每次6粒，故本试验中选用0号胶囊壳。

3 讨论

中药材多需经过炮制，且药材本身密度大，炮制后缝隙多，易吸水，为提高加液量的准确性，需确定药材本身的吸水率，故进行吸水性试验[16]。由本试验结果可知，该处方自身的吸水率为处方量的3倍，故首次提取需加13倍量水。

藿夏提取物多为糖类和黄酮类，黏性大，流动性不佳，制粒困难，故需加入适当的辅料使其容易制粒。通过对休止角、吸湿性和颗粒成型性的考察发现，磷酸钙可提高供试品吸湿性，因此选择磷酸钙作为辅料。与淀粉等辅料不同的是，磷酸钙作为脆性物料，其吸湿后可以形成结晶水，不会在很大程度上影响主药的形态，不仅利于主药的长期保存，同时也能使主药具有良好的成型性。

CRH可用于设定生产和贮存时的湿度范围，从而限制环境中水分对固体制剂的影响。经测定，颗粒的CRH为63.83%，因此，胶囊成型的环境相对湿度应控制在该值以下，防止颗粒吸湿而潮解导致药物降解变质，从而影响药物的疗效并减少不良反应。

综上所述，该工艺合理可行，所制得颗粒成型较好。