Napsin A在淋巴瘤中的表达及临床意义

朱 锋 尹进强 杨 玲

泰山医学院附属医院，山东 泰安 271000

Napsin A属于天门冬氨酸蛋白酶家族，参与Ⅱ型肺泡细胞的表面活性B蛋白的产生和成熟过程，也可以作为溶酶体蛋白酶参与肾脏蛋白质的代谢过程[1-3]。Napsin A不仅表达于肺泡上皮细胞和肾脏近曲小管的上皮细胞[4]，且在大多数肺腺癌和部分肾细胞癌中均阳性表达[5]。因此，Napsin A被认为是肺腺癌的特异性和敏感性的分子标记，常常用于原发性肺腺癌的鉴别诊断。随着对Napsin A的研究深入，一些研究发现在卵巢透明细胞癌和甲状腺癌组织中也存在一定程度的表达[6-7]。但目前鲜见Napsin A在淋巴组织中的表达的相关报道。为探讨Napsin A在淋巴瘤中的表达情况，我们采用免疫组织化学的方法检测了Napsin A在淋巴组织和淋巴瘤中的表达，并进一步探讨其与临床特征的关系。

1 资料与方法

1.1临床资料

收集2010年至今在我院确诊为淋巴瘤的210例组织标本和30例淋巴组织反应性增生的组织标本。两位病理学家根据最新的WHO诊断标准进行病理诊断[8]。淋巴瘤的石蜡标本包括：弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffused large B cell lymphoma，DLBCL)50例，间变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma，ALCL)60例，霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma，HL)30例，外周T细胞淋巴瘤(Peripheral T-cell lymphoma，PTCL) 60例，其他成熟B细胞类型的淋巴瘤10例。其中ALK阳性的ALCL40例，ALK阴性的ALCL20例。收集患者资料包括：年龄、性别、血清LDH、病理类型、临床症状、影像学资料、疗效预后等。

1.2免疫组化

对福尔马林固定后石蜡包埋的各种肿瘤样本和反应性淋巴样组织样本，进行4um切片，应用免疫组织化学S-P法染色。通过Leica BOND-MAX自动免疫染色器对Napsin A和ALK抗体进行免疫组化染色(IHC)。小鼠抗人Napsin A单克隆抗体和ALK单克隆抗体均购自北京中杉金桥生物有限公司，以PBS代替一抗作为阴性对照，以肺组织作为Napsin A染色的阳性对照。

1.3结果判断

染色切片高倍视野下(×400倍)随机选取5个视野，每个视野随机观察100个细胞，计算阳性细胞率的平均值，表达Napsin A的淋巴瘤细胞在每个样本中的比例是两个病理学家评估的一半。Napsin A胞浆染色强度分类为以下3类：0，1%～30%，31%～66%和67%～100%，并就病例差异达成共识[9]。

1.4统计学分析

应用SPSS 16.0进行统计学分析。为了评估免疫组织化学阳性率和临床特征关系变量的区别，应用Pearson’s卡方检验或Fisher’s exact test。以P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1Napsin A在ALCL中的表达情况

根据2016版WHO淋巴瘤分类和染色结果，Napsin A在间变性大细胞淋巴瘤的胞浆中呈点状分布。而在反应性淋巴组织中Napsin A阴性或仅在少量组织细胞中表达，这一现象与文献描述一致[10]。ALCL的Napsin A表达率为(20.0%，12/60)，其中ALK阳性的ALCL(25.0%，10/40例)，其表达的比率明显高于ALK阴性的ALCL(10.0%，2/20；P=0.01)。

2.2Napsin A在DLBCL中的表达情况

我们的研究发现，Napsin A也在DLBCL的肿瘤细胞的胞浆中也呈现点状分布，阳性细胞表达比例为14.0%(7/50)。但其他成熟B细胞类型的淋巴瘤中不能检测到Napsin A。

2.3Napsin A在HL及外周T细胞淋巴瘤中的表达。

我们的研究发现，除了非霍奇金淋巴瘤，Napsin A在霍奇金淋巴瘤中也有表达，表达比例为10.0%(3/30)。肿瘤细胞胞质阳性表达。Napsin A在外周T细胞淋巴瘤中也有少量的病例呈阳性表达，表达率为6.6%(4/60)。

2.4ALCL及DLBCLs表达Napsin A的临床特征和预后提示。

表1 Napsin A表达的ALCL的临床特征

Napsin A表达的ALCL的临床特征总结。Napsin A的表达与患者年龄、性别、血清LDH均无关(P>0.05)。在全身的ALCL中Napsin A的表达与较高的国际预后指数有关，有Napsin A表达的ALCL及DLBCL患者倾向预后较差。同时，研究结果发现在LDH血清升高组患者的Napsin A的表达较LDH正常组高；R-CHOP方案治疗后未能缓解组(PR、SD和PD)的表达较完全缓解组高。而在DLBCL，PTCL患者中临床病理特征与Napsin A表达无明显相关性。

3 讨 论

目前研究证实，Napsin A在肺及肾来源的癌的病理诊断中有一定的特异性和敏感性，现在用于两种肿瘤的临床病理诊断和鉴别诊断。近年来，在卵巢癌、甲状腺癌、子宫内膜癌等其他肿瘤中相继被发现有异常高表达[11,12]。而其在淋巴瘤中的表达缺乏研究。我们的研究发现，在反应性淋巴样组织，只有少数组织细胞是Napsin A阳性或阴性表达，而在不同病理类型的淋巴瘤中有不同程度的表达。ALK阳性的ALCL(25.0%，10/40例)表达Napsin A的比率明显高于ALK阴性的ALCL(10.0%，2/20；P=0.01)。Napsin A也在弥漫大B细胞淋巴瘤表达14.0%(7/50)，霍奇金淋巴瘤表达10.0%(3/30)，外周T细胞淋巴瘤表达6.6%(4/60)。这一结果提示，Napsin A的特异性有一定的局限性，在肺和淋巴瘤的诊断和鉴别诊断中需要结合其他组织学特点综合考虑。Napsin A在一些淋巴瘤细胞的表达可能是异常的。超过10%的包括ALK阳性ALCL，HL和DLBCL在内的淋巴瘤亚型表现出Napsin A表达。这些肿瘤有各种细胞来源。ALK阳性的ALCL和HL共有一些形态学特征，包括细胞大、胞浆丰富和退行性的特征[13]。

我们检测的结果与最近的报道比较一致，此外还提示在滤泡性淋巴瘤，浆细胞瘤中也有很少比例的表达，本研究结果ALCL的表达率高于文献，可能与样本量有关，在其他类型淋巴瘤中的表达更需要大样本的进一步深入研究。

目前认为Napsin A的高表达与肿瘤分化好和较好预后有关，而低表达被认为是手术切除肺腺癌的一个独立的预后不良的因素。我们的研究显示，Napsin A表达高的患者常表现为血清LDH升高，并且Napsin A高表达的ALCL患者经典化疗后完全缓解率低于Napsin A阴性组，并且倾向预后较差[14]。由于Napsin A在淋巴瘤中表达率与患者的预后有关，因此，其在淋巴瘤中表达的生理及病理意义需要更深一步的研究。

考虑到Napsin A在肾小管蛋白分解代谢及肺表面活性蛋白突变中起潜在性的作用，Napsin A可能参与导致ALK阳性ALCL和HL共有形态学特征的蛋白质的分解代谢。在所有淋巴瘤中ALK阳性ALCL出现最频繁，且表达最强[12]。然而，目前，淋巴瘤细胞亚型异常Napsin A表达的机制以及淋巴瘤中Napsin A的作用仍不清楚。

总之，我们的研究证明，Napsin A在淋巴瘤各亚型中存在差异表达，尤其是在ALK阳性ALCL、HL和DLBCL中；因此，这些淋巴瘤应被纳入Napsin A阳性肿瘤的鉴别诊断中。Napsin A在淋巴瘤的生物学和功能学之间的关系尚需要进一步研究。