包头市孕前及孕早期妇女叶酸代谢障碍相关基因位点分布研究

张春光，朱 兵，张晓娟，刘 蕾，杨文亮，郭志利*

（包钢职工第三医院，内蒙古 包头 014000）

一般情况下，民族、地区的差异性，研究对象、方法的不同，会致使人群的MTHFR与MTRR基因多态性的分布也具有较大的差异性，表明出民族、区域的不同。现如今，按照分子医学研究证实，在叶酸代谢时，甲硫氨酸合成酶还原酶（MTRR）、亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）被作为关键的酶，编码该类酶的基因具有多态性。本文主要是对包头市孕前及孕早期妇女叶酸代谢障碍相关基因位点分布特点的研究，确保此地区妇女个体化的孕期保健有一个科学的依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究选择的是2018年1月～2018年9月在内蒙古自治区包头市包钢职工第三医院展开孕前或者孕期检查的女性当作分析对象。将受检者口腔粘膜细胞采集起来，并且展开基因型检测，基于实际的样本要求，得到有效样本294例，受检女性平均年龄为27.15±3.12岁，汉族276人，回族4人，满族3人，蒙古族11人，所有患者在检测前均签署相关的知情同意书。

1．2

借助有关的软件来分析MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多态性，确定对各个样本的基因分型结果。294例患者都借助棉拭纸对患者的口腔黏膜细胞进行采集，借助柱式质粒DNA 试剂盒少量抽提，同时提取样本DNA Taqman-MGB 探针（表1）实施荧光定量PCR检测MTHFR C677TA1298C、MTRR A66G的基因多态性的设备试剂（美国ABI公司），总体积10 μL/反应体系，涉及了浓度在20 ng/μL的DNA模板1 μL，2 x Taqman Universal MasterMix 5μL，20 x Taqman-MGB 探针0.5 μL，去离子水3.5 μL。95℃下反应10 min，92℃ 15 s、60℃ 1 min扩增20个循环，89℃15s，60℃ 90 s扩增30个循环反应结束后在ABI7900型荧光定量PCR仪上对样品孔中的终点荧光读取,借助Hardy-Weinberg平衡分析[8]。

1.3 统计学方法

用SPSS 16.0软件对相关数据进行统计与分析，通过P＜0.05表示有统计学意义；（±s）代表计量资料，并且借助t实施检验。

表1 Taqman-MGB 探针所在位置

2 结 果

包头市女性MTHFR、MTRR基因多态性研究入组人群的数据和我国总体报道的数据分别展开对比，和南方区域对比得到以下结果。

2.1 和全国及南方区域女性MTHFR C677T基因型分布（见表2）对比

包头市MTHFR C677T纯合突变TT型与全国及南方区域相比差异均有统计学意义（P＜0.05），其等位基因C和T的分布与全国及南方区域相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2 不同地区女性MTHFRC677T基因多态性分布对比

2.2 与全国及南方区域女性MTHFR A1298C基因型分布（见表3）对比

包头市女性MTHFR A1298C纯合突变型CC与全国及南方区域女性相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。其等位基因A和C的分布与全国及南方区域女性相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表3 不同地区女性MTHFR A1298C基因多态性分布对比

2.3 全国及南方区域女性MTRR A66G基因型分布分布（见表4）

包头市MTHFR A66G纯合突变GG型与全国及南方区域女性相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表4 不同地区女性MTRR A66G基因多态性分布对比

3 讨 论

按照叶酸代谢障碍机制可以证实，在叶酸代谢时5-甲基四氢叶酸有着十分关键的作用，该叶酸的被视为同型半胱氨酸转换为甲硫氨酸的基础之一，并且其也被作为甲基在这两者之间的重要传递[11.12]。在叶酸摄入量未变化的前提下，受到MTHFR、MTRR等会控制5-甲基四氢叶酸的量，换句话说MTHFR、MTRR酶活性与5-甲基四氢叶酸的产量呈现正相关的关系。若是MTRR基因突变会制约酶活性，降低甲硫氨酸合成酶活性，对同型半胱氨酸的转化、甲基的传递均有着负面影响[13]。另一方面，充分的的5-甲基四氢叶酸被视为确保血液中同型半胱氨酸水平的关键基础，是对体内甲基化程度有效的基石。

MTHFR基因包含了C677T基因、A1298C基因，另一方面，对酶的活性改变来说，MTRR中的A66G基因情况扮演关键的角色，与孕早期妇女的本身叶酸代谢障碍息息相关，最大程度上降低了MTR酶活性、MTHFR酶活性[5-8]。在叶酸摄入量不改变的状据，依据相关的文献数据表明，和正常型CC和杂合突变型CT型相对比，MTHFR 677TT型会相应的下降，降MTHFR酶活性。另一方面，1298AC型、MTHFR 677CT型存在较大的协同增加效应，和正常酶活力相比较来说，携带该基因分布特征的人群MTHFR酶活力获得下降[13]。针对对孕妇细胞内叶酸的浓度而言，MTHFR C677T基因分型会造成制约关系，在同样条件下，和正常基因对比来说，TT型以及CT型妇女细胞内叶酸含量往往较低[7]，但是对叶酸的需求孕期妇女大于普通人,，鉴于此，在防止出生缺陷的出现过程中，该基因位点至关重要。在294例样本中，未发现风险组发现只有32.00%，低风险组只有7.00%，但是中风险为35.00%显著的高于未发现风险组，高风险组为26. 00%，给予基因型对叶酸进行补充，可确保出生缺陷率 MTHFR、MTRR基因型得到下降，与出发生的出生缺陷有着直接的关系，还和复发性流产明显有关[8-9]，另一方面，叶酸的不足也被作为视为引发新生儿出生缺陷的关键因素之一。现如今，在孕前3个月至孕期前3个月，我国建议育龄妇女补服叶酸，剂量保证在400 mg/d，然而依据相关的研究证实，MTHFR和MTRR基因分布很大程度上具体一定的差异性，所以有效的掌握基因的地域分布特征很关键。

本研究统计结果显示，和全国及南方区域女性MTHFR C677T基因型分布（表）相对比而言，包头市MTHFR C677T纯合突变TT型与全国及南方区域相比，差异有统计学意义（P＜0.05），其等位基因C和T的分布与全国及南方区域相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。与全国及南方区域女性MTHFR A1298C基因型分布（表3）对比来说，包头市女性MTHFR A1298C纯合突变型CC与全国及南方区域女性相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。其等位基因A和C的分布与全国及南方区域女性相比差异存在统计学意义（P＜0.05）。全国及南方区域女性MTRR A66G基因型分布分布（表4）对比而言，包头市MTHFR A66G纯合突变GG型与全国及南方区域女性相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。由此可知，从北方地区到南方地区，MTHFR 677TT纯合突变型分布频率大幅度下降[14]。新生儿神经管不足与高同型半胱氨酸息息相关，被视为一个独立危险因素[15]。各地区基因分布特征出现不同，很大程度上是由于人群位于的生活环境，人们的饮食生活习惯的差异性，若是女性的叶酸检测为中度、高度风险，需强化对膳食叶酸、叶酸制剂的补充计量，确保孕产期疾病、新生儿出生缺陷大大的降低，所以，给予各地不同人群的遗传特征，借助构建区域性的基因多态性分布数据库对各地地域特点制定区域性的卫生政策充分的了解，给予行之有效的合理依据。