高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗（TJM-F92株）安全性调查及有效性和干扰性试验

刘晓东，郝尧光，王宗升，王辉之，范根成，杜元钊，董雅琴，高 丰

（1. 吉林大学动物医学学院，吉林长春 130062；2. 动物基因工程疫苗国家重点实验室，山东青岛 266000；3. 中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032）

当前我国养殖环境较差，疾病错综复杂，单纯依靠药物治疗不仅不能有效控制疾病，还给猪场造成严重的经济损失。目前，猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在国内猪场的感染率已达70%以上，造成母猪流产、产死胎或弱仔、奶水质量差、返情、屡配不孕以及公猪精子活力弱、仔猪呼吸道症状严重等，后期可继发细菌感染，难以控制，严重时造成猪场大批猪只死亡[1-3]。

猪繁殖与呼吸综合征和古典猪瘟防疫是目前养猪业面临的难题，如何设计更加合理的免疫程序对其进行防控是目前急需解决的问题。为探讨高致病性PRRSV弱毒疫苗的安全性与有效性，确定更加合理的免疫程序，在山东省某规模化猪场开展了PRRSV 弱毒疫苗（TJM-F92株）安全性调查及有效性和干扰性试验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗 试验疫苗选用高致病性PRRSV弱毒疫苗（TJM-F92株）与古典猪瘟病毒（CSFV）脾苗，利用疫苗专用稀释液稀释，疫苗来源于山东省青岛市某公司。

1.1.2 试验动物 安全性试验：选取母猪30头；有效性试验：选取不同阶段猪群各25头，共10组250头，包括母猪（空怀期、妊娠期、哺乳期）和仔猪（2、4、8、12、15、18、25周龄）；干扰性试验：选取12头仔猪，分为2组，每组6头。各猪群免疫程序见表1。

1.1.3 试剂与仪器 PRRSV ELISA 抗体检测试剂盒、CSFV ELISA抗体检测试剂盒：购自美国IDEXX公司。其他试剂包括：ELISA反应板、洗涤液（10×）、阴性对照、阳性对照、样品稀释液、TMB底物、终止液等。酶标仪：型号为TECAN，购自瑞士帝肯公司；离心机：型号为TGL-16，购自湘仪公司；微量移液器、枪头、超净台等：由本实验室提供。

表1 不同猪群的PRRSV疫苗免疫程序

1.2 方法

1.2.1 安全性调查 2018年5月22日，对选取的30头母猪接种高致病性PRRSV（TJM-F92株）疫苗，然后分别统计免疫前后的采食量、体温变化情况；统计猪场近1年内43周龄母猪免疫该弱毒苗前后的返情比例、流产比例以及死胎、木乃伊胎产生率变化情况。

1.2.2 有效性试验 对3个阶段（空怀期、妊娠期、哺乳期）的试验母猪和7个生长周期（2～25周龄）的仔猪各25头，按表1程序免疫高致病性PRRSV（TJM-F92株）疫苗，然后利用ELISA方法进行PRRSV抗体水平跟踪检测。

1.2.3 干扰性试验 第1组（6头仔猪）：在14日龄进行PRRSV（TJM-F92株）疫苗免疫，30、60日龄分别进行CSFV疫苗免疫，然后通过ELISA方法检测PRRSV及CSFV抗体；第2组（6头仔猪）：在14日龄进行PRRSV（TJM-F92株）疫苗免疫，30日龄进行PRRSV疫苗与CSFV疫苗同时免疫（颈部肌内注射，一边一针），60日龄CSFV疫苗加强免疫。利用ELISA方法检测PRRSV及CSFV抗体。对两组数据进行对比，观察PRRSV（TJM-F92株）疫苗与CSFV疫苗间的相互影响。

1.2.4 检测及结果判定 按照各病毒试剂盒检测说明书进行操作。操作过程大体如下：被检样品加入与感作→洗涤→酶标二抗感作→洗涤→加入底物→加入终止液终止→OD值测定与分析。两种病毒抗体检测结果判定标准按说明书标准（表2）。

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表2 两种病毒抗体检测结果判定标准

1.2.5 数据处理 应用Excel 2013进行统计学分析。

2 结果与分析

2.1 安全性试验

2.1.1 采食量变化 对比发现，5月22日免疫PRRSV弱毒疫苗后，30头母猪的平均日采食量与免疫前相比几乎没有变化（图1），母猪采食行为正常。

2.1.2 体温变化 30头母猪5月22日免疫前后的平均体温均在正常范围内（图2），未出现高烧、低温等不正常现象。

图1 猪群采食量监测结果

图2 猪群体温监测结果

2.2 安全性调查

2.2.1 返情率 该猪场母猪43周龄免疫PRRSV（TJM-F92株）疫苗后，返情率略有波动，但整体稳定（图3）。

2.2.2 流产率 猪场母猪43周龄免疫PRRSV（TJM-F92株）疫苗后生产情况基本正常，未发现流产增加现象（图4）。

2.2.3 死胎、木乃伊胎产生率 猪场母猪43周龄免疫PRRSV（TJM-F92株）疫苗后，没有发现死胎、木乃伊胎产生率大幅上升现象（图5）。

图3 母猪返情比例变化情况

图4 母猪流产变化情况

图5 母猪的死胎、木乃伊胎产生率变化情况

2.3 有效性试验

2.3.1 免疫后PRRSV抗体平均值（S/P）及离散度（CV） 母猪每年3次免疫，仔猪14日龄免疫后，各阶段猪群抗体S/P值均在0.73～2.45之间；仔猪群免疫PRRSV疫苗后在15周龄抗体水平达到最高，母猪群在妊娠期抗体水平最高，哺乳期较低，表明猪群在妊娠期对PRRSV的抵抗力较强。免疫后各阶段猪群的抗体水平离散度在13.6%～61.7%之间；仔猪15周龄时的离散度最低，为13.6%，4周龄时最高，为61.7%（表3）。

表3 各阶段猪群PRRSV抗体平均值（S/P）及离散度（CV）监测结果

表4 PRRSV抗体（S/P）不同区间分布情况 单位：%

2.4 干扰性试验

2.4.1 分开免疫

2.4.1.1 CSFV抗体 对6头试验仔猪14日龄进行PRRSV疫苗免疫，30、60日龄进行CSFV疫苗免疫，发现CSFV疫苗免疫前的CSFV抗体阻断率平均值为22.7%，离散度为37.2%；一免后CSFV抗体阻断率平均值为52.8%，离散度为11.4%；二免后CSFV抗体阻断率平均值为67.0%，离散度为7.84%（表5）。由此可见：CSFV抗体在一免后较低，二免后才达到较高水平，且离散度也随之降低，说明CSFV疫苗二免保护效果远远好于一免。

2.4.1.2 PRRSV抗体 对6头试验仔猪14日龄免疫PRRSV疫苗，30日龄免疫CSFV疫苗后发现：免疫前PRRSV抗体S/P平均值为1.11，离散度为28.4%；一免后抗体平均值为2.13，离散度为12.5%（表6），说明14日龄时免疫1次PRRSV疫苗，30日龄后即可提供较高的保护。

2.4.2 联合免疫

2.4.2.1 CSFV抗体 对6头试验仔猪，在30日龄进行CSFV疫苗与PRRSV疫苗同时免疫，发现免疫前CSFV抗体阻断率平均值为18.5%，离散度为45.3%；一免后CSFV抗体阻断率平均为54.3%，离散度为14.9%；二免后CSFV抗体阻断率平均为66.5%，离散度为16.5%（表7）。这说明同时免疫CSFV活苗与PRRSV疫苗（TJM-F92株）后，CSFV抗体表现正常，未出现被PRRSV抑制的现象。

2.4.2.2 PRRSV 抗体 对6头试验仔猪30日龄时进行CSFV疫苗与PRRSV疫苗同时免疫，发现免疫前PRRSV抗体S/P平均值为0.99，离散度为39.2%；一免后PRRSV抗体S/P平均值为2.36，离散度为15.6%（表8）。此结果表明，30日龄时，CSFV疫苗与PRRSV疫苗同时免疫对PRRSV抗体产生无影响。

表5 免疫CSFV疫苗后抗体（阻断率）监测结果 单位：%

表6 免疫PRRSV疫苗后PRRSV抗体（S/P）监测结果

表7 同时免疫后CSFV抗体（阻断率）监测结果 单位：%

3 讨论

本次安全性试验和调查表明，高致病性PRRSV弱毒疫苗（TJM-F92株）对母猪免疫后，无论采食量、体温、返情率及死胎与木乃伊胎产生率均无变化，说明高致病性PRRSV弱毒疫苗（TJM-F92株）具有良好的安全性，这与王科文[4]的研究结论一致。

表8 同时免疫后PRRSV抗体（S/P）监测结果

利用高致病性PRRSV弱毒疫苗（TJM-F92株），按规定程序每头猪1头份肌内注射，可使各个阶段猪群均产生有效保护力，因此在实际应用中，不需加大免疫剂量。

传统理论认为，不同病毒疫苗同时免疫会产生干扰作用[5-6]。杜喜忠等[7]认为PRRSV弱毒苗和CSFV疫苗同时免疫的相互干扰影响最大。但本次试验发现，同时免疫高致病性PRRSV弱毒疫苗（TJM-F92株）和CSFV冻干疫苗的免疫效果与分开免疫并无差异，不会相互影响，由此认为高致病性PRRSV弱毒疫苗（TJM-F92株）与CSFV疫苗间的相互免疫抑制作用较小，可以在现场生产中优化免疫程序，实施同时免疫，从而节省人力，减少猪群应激。

因为PRRSV的发病机理以及免疫机制非常复杂，不同的试验条件、不同的试验猪群所得到的结果可能不尽相同，所以本试验结果具有一定局限性，需要后续开展系统试验进行验证。

4 结论

本次研究发现：高致病性PRRSV弱毒疫苗（TJM-F92株）具有优秀的安全性，可以对母猪进行普免，不会引起不良反应，对各阶段猪群均可产生有效保护，有效性较好；高致病性PRRSV弱毒疫苗（TJM-F92株）与CSFV疫苗同时免疫不会产生相互干扰，因而猪场可以尝试优化免疫程序，对两种疫苗同时免疫，以减少应激，节省人力。